濱梅細胞工程苗大規模繁殖方法
2023-05-09 04:29:26
專利名稱：濱梅細胞工程苗大規模繁殖方法
技術領域：
本發明屬於植物細胞工程技術領域。
濱梅(Prunus maritima)是一種沙生灌木果樹，它能在乾旱(包括很低的土壤含水量)、瘠薄、大風、揚沙、不穩定基質和高鹽分的環境中適應生存。但由於種子萌發周期長，種子萌發率很低，難以大規模繁殖推廣。
目前國內外尚無濱梅細胞工程苗大規模生產技術及灘涂引種的成套技術研究及相關報導。
愈傷組織的繼代培養是決定其能否順利進入分化的關鍵。通過調整改善光照、激素條件、瓊脂類別、氮源和有機化合物等因子，在遏止愈傷組織的褐化方面取得了成功，促使其繼代增殖的正常進行，從而獲得綠色緻密的胚性愈傷組織。
本發明建立了濱梅優質胚性細胞系，從綠色緻密的胚性愈傷組織轉入分化，植株再生頻率為100％。
在以上研究的基礎上，本項發明建立了濱梅組織培養再生苗的繁殖方法如下(1)在添加2，4-D和IBA激素條件下由濱梅外植體(幼胚)誘導愈傷組織；(2)在添加2，4-D、NAA、BA、ZT等激素條件下，進行愈傷組織的繼代培養；(3)在添加BA和ZT等激素條件下，誘導培養再生植株；(4)在添加IBA、KT和AC等激素條件下，培養出完整的(生根的)再生植株；該繁殖方法性能穩定，試驗重複性好，試管再生苗分化、叢生性狀良好，優質試管再生苗年生產能力為100萬株。
(5)混株群體自交去雜——決選單株混合，硫酸脫絨後的種子經卡那黴素浸種，營養缽播種育苗去雜苗，保留子葉正常綠色的棉苗。當棉苗長到3葉1心，移入基礎種繁殖田，在初花期根據大田性狀去異型株，保留株型與原品種基本一致的單株，人工自交，在吐絮期混收自交花。
(6)自交種冰箱保存備用——自交種硫酸脫絨曬乾，在冰箱或冷庫-5℃左右溫度條件下保存備用。
(7)生產原種——每年按需要取適量自交種，重複苗床去雜步驟，大田繁殖得核心種；核心種開放授粉繁殖得基礎種；基礎種繁殖即為抗蟲棉原種，抗蟲棉原種繁殖得生產用的原種一代。
有關本實施例的試驗研究情況如下1、國內外抗蟲棉品種純度對比用107單位/L濃度的卡那黴素浸種，分析目前國內在生產上推廣使用的6個抗蟲棉品種的黃斑率，結果見表1。由表可見，4個國產抗蟲棉，其中GK22的品種純度為100％，GK14為91.78％，JK103為83.12％，雙價抗蟲棉SGK321的品種純度為98.52％，平均抗蟲性純度為93.2％；而美國2個抗蟲棉32B、33B的品種純度均為100％，平均抗蟲性純度為100％。可見，目前國產抗蟲棉純度不如國外品種，急需加強良種保純力度。
表1國產抗蟲棉與國外抗蟲棉抗蟲性純度比較
通過體細胞胚的誘導培養研究，大規模生產濱梅的細胞工程苗，並用細胞工程等技術改良濱梅的農藝品質，以利於推廣開發。如有足夠投資，用此技術方案，可年生產濱梅試管苗100萬株以上，每年從細胞工程苗可獲直接經濟收入200萬元。濱梅在春季展現的豔麗的花朵，無疑是美化景觀的優良樹種；而秋季直徑為1.5cm的濱梅果實則可以收穫用來加工果醬和蜜餞。兼有美化環境和恢復沙生植被的特點，使之在海濱發展可持續的果樹系統的需求方面將有所作為。
鹽土農業非常適合我國的國情，有利於解決我國地少人多、食物和蛋白質短缺的問題，開發海灘鹽土非但不佔良田，還可增加農業用地；因此，充分利用鹽土和海水資源，大力開發耐鹽耐海水植物資源，有望為我國的海洋產業創造巨大的新增效益。
權利要求
1.一種濱梅細胞工程苗快繁方法，其特徵是利用濱梅幼胚進行愈傷組織誘導培養，培養出完整的濱梅試管苗，其繁殖方法為(1)添加2，4-D和I BA激素條件下由濱梅外植體幼胚誘導愈傷組織；(2)在添加2，4-D、NAA、BA、ZT等激素條件下，進行愈傷組織的繼代培養；(3)在添加BA和ZT等激素條件下，誘導培養再生植株；(4)在添加IBA、KT和AC等激素條件下，培養出完整的濱梅試管苗；
2.一種濱梅試管苗移栽方法，其特徵是用權利要求1產出的優質濱梅試管苗轉移至無土栽培苗床，配以鋸木屑碳渣疏鬆型培養基，二者體積比為10∶1，間隔澆灌海水性營養液，無土栽培2-3個月，生產出優質苗木。
全文摘要
本發明屬於植物細胞工程技術領域。運用濱梅組培細胞工程苗快繁技術和濱梅再生苗擴繁技術，大規模生產濱梅耐鹽優質細胞工程苗，以克服該植物萌發周期長、種子萌發率低，阻滯大規模繁殖推廣的弊端，適應我國海岸帶耐鹽木本植物引種開發的迫切需要，從而推動我國鹽土農業的可持續發展。
文檔編號A01H4/00GK1425278SQ03112698
公開日2003年6月25日 申請日期2003年1月17日 優先權日2003年1月17日
發明者鄭麗屏, 欽佩, 龔津平, 趙福庚, 謝民 申請人:南京大學