三氯生衍生物及其用途

2023-04-25 06:07:51

三氯生衍生物及其用途
【專利摘要】一種用於選擇性抑制在靶細胞和非靶細胞的混合群體中的非靶細胞的包含三氯生衍生物的選擇劑。優選地，所述三氯生衍生物是糖苷衍生物，更優選地是吡喃糖苷衍生物。合適地提供了包含所述選擇劑的選擇性培養基以及使用所述選擇劑培養細胞的方法。
【專利說明】三氯生衍生物及其用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及三氯生衍生物及其用途，特別是包含三氯生衍生物的選擇劑和含有三氯生衍生物的選擇性培養基。本發明還涉及使用包含三氯生衍生物的選擇劑選擇性抑制混合群體中的特定細胞的生長的方法以及用於進行此類方法的試劑盒。
【背景技術】
[0002]對本發明背景的下列論述旨在促進對本發明的理解。然而，應理解，該論述不是認可或承認提及的任何材料在本申請的 優先權日:期時在任何權限下被公布、為人所知或是本領域技術人員的常見一般知識的一部分。
[0003]廣譜抗微生物劑5-氯_2-(2，4- 二氯苯氧基)苯酚(也稱為「三氯生」或「Irgasan?」,其是Ciba Specialty Chemical的三氯生的商標名)自19世紀70年代早期開始已常用於個人衛生用品(包括肥皂、牙膏、除臭劑)以及用於家用和工業清潔產品。儘管在高濃度下三氯生是殺蟲劑，其在較低水平下起抑菌劑的作用。
[0004]儘管有抗微生物用途的悠久歷史，但是三氯生通常不單獨用作區分培養基中用於特定細菌物種的優先生長的選擇劑。Toora的美國專利5447849教導了頭孢磺啶和三氯生的組合用於選擇性生長小腸結腸炎耶爾森氏菌的用途。Russell的美國專利5741663教導了與羧苄青黴素和呋喃妥因組合的三氯生用於選擇性生長螢光假單胞菌的用途。Good等人的美國專利申請公布2010/0278847教導了將IOOnM至10 μ M範圍內的三氯生添加至培養基(其還補充有氨苄青黴素)以用於區分基因改造的(轉化的)大腸桿菌，所述大腸桿菌顯示載體介導的對於 烯醯基-ACP還原酶(fabl)基因的表達。Good等人沒有公開涉及通常在環境、工業或醫學樣本中發現的類型的天然存在的細菌和/或真菌的培養物。

【發明內容】

[0005]根據本發明的第一方面提供了用於選擇性抑制靶細胞和非靶細胞的混合群體中的非靶細胞的包含三氯生衍生物的選擇劑。
[0006]在整篇說明書和權利要求書中，除非上下文另有需要，否則應理解詞語「包括(comprise)」或變型諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」意味著包含所述的整數或整數組而不排除任何其它整數或整數組。
[0007]混合群體為在環境、工業和/或臨床樣本中發現的類型。可在無其它抗生素、抑制染料、生物殺滅劑或抑菌劑的情況下使用所公開的三氯生衍生物。採集時微生物存在的條件以及運輸環境、工業和/或醫學樣本的條件一般是受脅迫(stressed，應激)的和潛在危害性的。因此，樣本中的靶微生物可具有對抗生素和其它抑制劑的減弱的抗性，並且在恢復正常生長之前往往需要延長的遲滯期。很多實驗室的標準實踐是使樣本在不含抗生素的營養生長培養基中經受預富集培養一段足以促進靶微生物恢復的時間，例如約16小時。然而，靶細胞往往以低於非靶微生物的數量存在並且預富集培養可加劇這種不平衡，導致非靶微生物的生長過度以及掩蔽靶微生物。[0008]因為本發明的三氯生衍生物和含有此類三氯生衍生物的組合物允許在無抗生素或其它生物殺滅劑下培養，所以對於大多數樣本來說，排除預富集培養的需要，這樣節省了時間，並且減少與進行預富集恢復培養的額外處理樣本相關的風險。
[0009]本發明還提供三氯生衍生物作為用於選擇性抑制靶細胞和非靶細胞的混合群體中的非靶細胞的選擇劑的用途。
[0010]本文所用的關於三氯生的術語「衍生物」一般是指直接或通過修飾或部分取代由三氯生衍生的化學物質。
[0011]細胞可以是真核細胞(例如哺乳動物細胞、真菌細胞或酵母細胞)，但是更通常是細菌細胞。特別地，所述靶細胞和所述非靶細胞通常均包含細菌。
[0012]本文所用的術語「抑制」一般是指通過減少、減緩或終止細胞的生長而抑制細胞的生長。如本文所用，「生長」是指尺寸增加或增殖或兩者兼有。因此，本發明的化合物可通過殺死、抑制細胞變大而抑制它們，和/或可預防細胞區分和複製和數量增加。總體而言，此類抑制預防活細胞數量的任何淨增加。
[0013]在優選的實施方式中，選擇劑是用於包含在細菌生長培養基中的組合物。
[0014]優選地，三氯生衍生物是三氯生的糖苷衍生物。換句話說，選擇劑是其中糖苷配基(aglycone)是三氯生的糖苷。糖部分經由O-鍵結合於三氯生部分。三氯生結合於碳水化合物部分的異頭碳。
[0015]優選地，三氯生的糖苷衍生物是吡喃糖苷衍生物(即三氯生的吡喃葡萄糖苷)。換句話說，糖苷的糖基(glycone)部分(即糖部分)包括批喃糖環。
[0016]在優選的實施方式中，所述三氯生糖苷衍生物選自:
[0017]三氯生-a-D-吡喃阿拉伯糖苷，
[0018]三氯生_β-D-吡喃阿拉伯糖苷，
[0019]三氯生-a -D-吡喃半乳糖苷，
[0020]三氯生-β -D-吡喃半乳糖苷，
[0021 ] 三氯生-a -D-吡喃葡萄糖苷，
[0022]三氯生-β -D-吡喃葡萄糖苷，和
[0023]三氯生-a -D-吡喃甘露糖苷。
[0024]在優選的實施方式中，選擇劑具有通式(I):
[0025]
【權利要求】
1.一種用於選擇性抑制在靶細胞和非靶細胞的混合群體中的非靶細胞的包含三氯生衍生物的選擇劑，其中所述三氯生衍生物是三氯生的糖苷衍生物。
2.根據權利要求1所述的選擇劑，其中所述三氯生的糖苷衍生物是吡喃糖苷衍生物。
3.根據權利要求1或2所述的選擇劑，其中所述三氯生糖苷衍生物選自: 三氯生-a -D-吡喃阿拉伯糖苷、 三氯生-β -D-吡喃阿拉伯糖苷、 三氯生-a -D-吡喃半乳糖苷、 三氯生-β -D-吡喃半乳糖苷、 三氯生-a -D-吡喃葡萄糖苷、 三氯生-β -D-吡喃葡萄糖苷，和 三氯生-a -D-吡喃甘露糖苷。
4.根據前述權利要求的任一項所述的選擇劑，其中，當所述選擇劑與非靶細胞接觸時對非靶細胞產生毒性作用，而當所述選擇劑與靶細胞接觸時對靶細胞不產生毒性作用。
5.根據前述權利要求的任一項所述的選擇劑，其中，當所述選擇劑與非靶細胞接觸時抑制非靶細胞的生長，但是當與無論是否受脅迫的靶細胞接觸時基本上對靶細胞無抑制作用。
6.根據前述權利要求的任一項所述的選擇劑，用於選擇性抑制，其中所述靶細胞是沙門氏菌屬的多個種，並且所述非靶細胞是大腸桿菌和/或其它大腸菌群。
7.根據權利要求1至5的任一項所述的選擇劑，其中所述靶細胞是彎曲桿菌屬培養基的多個種。
8.一種用於選擇性抑制在靶細胞和非靶細胞的混合群體中的非靶細胞的培養基，所述培養基包含根據任何前述權利要求的任一項所述的選擇劑。
9.根據權利要求8所述的培養基，所述培養基與靶細胞和非靶細胞的混合群體接觸。
10.一種用於區分沙門氏菌屬的多個種的培養基，所述培養基包含根據權利要求1至6任一項所述的選擇劑。
11.一種用於區分彎曲桿菌屬多個種的培養基，所述培養基包含根據權利要求1至5或7的任一項所述的選擇劑。
12.—種在懷疑含有靶細胞和非靶細胞的混合群體的樣本中培養細菌、真菌或酵母細胞的方法，所述包括以下步驟: 使所述樣本細胞與根據權利要求1至7中任一項所述的選擇劑接觸，其中所述選擇劑對非靶細胞有抑制作用但基本上對靶細胞無抑制作用， 並且在允許靶細胞生長的條件下培養所述細胞。
13.根據權利要求12所述的方法，其中，進行所述方法而不使所述樣本與缺少所述選擇劑的預富集培養基接觸。
14.根據權利要求12或13所述的方法，其中，在所述培養步驟之前，所述混合群體中非革巴細胞的數量大於所述混合群體中祀細胞的數量。
15.一種用於根據權利要求12至14中任一項所述的方法的試劑盒，包含根據權利要求8至11任一項所述的培養基或用於製備所述培養基的組分。
16.根據權利要求15所述的試劑盒，其中所述試劑盒進一步包括進行根據權利要求12至14中任一項所述的方法的使用說明。
17.—種組合物，包含三氯生的糖苷衍生物。
18.根據權利要求17所述的組合物，其中所述三氯生的糖苷衍生物是吡喃糖苷衍生物。
19.根據權利要求18所述的組合物，其中所述三氯生的吡喃糖苷衍生物選自: 三氯生-a -D-吡喃阿拉伯糖苷， 三氯生-β -D-吡喃阿拉伯糖苷， 三氯生-a -D-吡喃半乳糖苷， 三氯生-β -D-吡喃半乳糖苷， 三氯生-a -D-吡喃葡萄糖苷， 三氯生-β -D-吡喃葡萄糖苷，和 三氯生-a -D-吡喃甘露糖苷。
20.一種大體上如本文所述的選擇劑。
21.一種大體上如本文所述的用於選擇性抑制的培養基。
22.—種大體上 如本文所述的培養細菌、真菌或酵母細胞的方法。
23.—種大體上如本文所述的試劑盒。
24.一種大體上如本文所述的組合物。
【文檔編號】C12N1/16GK103882091SQ201310712293
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年12月20日 優先權日:2012年12月21日
【發明者】理察·博維爾, 吉馬·豪斯 申請人:奧克索伊德有限公司