宮頸異常細胞快速篩查方法
2023-04-24 18:44:36 2
專利名稱：宮頸異常細胞快速篩查方法
宮頸異常細胞快速篩查方法 研究背景 宮頸癌在女性惡性腫瘤佔第二位，僅次於乳腺癌，全球大約每兩分鐘就有一位女 性死於宮頸癌，全球每年估計有27萬女性死於宮頸癌，每年新發病例有50萬，其中大約有 一半來自亞洲。 宮頸癌是早期發現可以成功治癒的癌症之一。有大量證據表明早期發現宮頸癌並 進行治療，女性完全可以獲得康復。因此，疾病的早期發現至關重要。宮頸癌篩查是一項極 具意義的公共衛生措施。世界衛生組織、所有發達國家及一些發展中國家的政府部門都在 極力推進和鼓勵21-64歲的女性每年進行一次宮頸癌篩查，尤其對於性生活正常的女性， 不管年齡大小，每年都需要進行此項檢查。
目前宮頸癌篩查方法的原理是基於對細胞形態學異常改變的觀察。遺憾的是，這 項技術步驟過於複雜、耗時長，難以迎合進行大規模宮頸異常細胞篩查的要求。為了滿足這 一需要，我們開發了這種宮頸異常細胞的快速篩查方法。本項發明通過增強在傳統塗片上 異常宮頸細胞的可視性，來提高傳統塗片法的敏感性和特異性。
發明概述 酸性磷酸酶是在男性前列腺高表達的一種酶，酸性磷酸酶檢測已被當作一個生物
標誌物，來診斷前列腺癌及檢測腫瘤有否向身體其他組織擴散，同時也被用來檢測治療效
果。為了檢測女性宮頸組織是否也有酸性磷酸酶表達，我們發現在宮頸異常細胞中酸性磷
酸酶高表達，而在正常宮頸細胞中則沒有表達。這項發現提示酸性磷酸酶是宮頸異常細胞
篩查的一個非常實用的生物標誌物。利用酸性磷酸酶這個生物標誌物，開發出新的檢測試
劑盒用於宮頸異常細胞的篩查。這種新方法應用細胞染色技術，利用傳統宮頸塗片來檢測
酸性磷酸酶的表達來甄別宮頸異常細胞，其原理是利用萘酚AS-BI鹽或萘酚AS-MX鹽作為
酸性磷酸酶底物，利用快紅紫、固醬紫或品紅等重氮鹽作為偶聯物在異常細胞內形成紅色
沉澱。這種方法選擇性標記宮頸異常細胞，而正常細胞則不會著色。因此，標記上紅色的異
常宮頸細胞與傳統染色相比結果更鮮明突出，顯著增加了異常細胞的可視性。 這種結果可讀性的增強減少了傳統塗片染色或新發展的液基細胞學檢查中結果
讀取過程中的模糊性。我們的臨床實驗結果顯示新的方法可以提高20%以上的靈敏度，降
低假陰性率達60%以上。而且，新方法在可讀性方面的提高適用於自動化，因而顯著增加
宮頸異常細胞篩查中的高敏感性和特異性的輸出。新的檢測方法更快捷、花費更小，同時採
用了常規可靠的染色方法，這種檢測方法在可以進行傳統塗片檢查的任何實驗室都可以進
行。新方法結果可讀性的增加同時也顯著減少了樣本檢測所需要的時間，傳統塗片染色的
操作可以由實驗室技術員或醫務人員進行，但結果則需要專業的病理學家來解讀。 實驗方法 —、染色試劑盒成分 (1)試劑A :固定液10%福馬林 (2)試劑B:染色液12.5克/升萘酚AS-BI磷酸鹽溶於二甲基甲醯胺
(3)試劑C :鹽酸品紅4%鹽酸品紅溶於2摩爾/升鹽酸
3
(4)試劑D :亞硝酸鈉0. 5摩爾/升 (5)試劑E :醋酸鈉溶液2. 5摩爾/升，pH 5. 2(6)試劑F:蘇木素復染液 (7)濾紙 二、染色步驟 1.塗片在試劑A中固定1分鐘 2.用水充分洗淨 3.將試劑B， C， D，和E混勻後，用濾紙過濾到染色缸中 4.將塗片放入染色液中置於25-37t:染色20-30分鐘 5.用水充分洗淨 6.用試劑F染色1分鐘 7.封片或晾乾，鏡檢 三、染色結果 異常宮頸細胞胞質中有紅色沉澱，核呈藍色；正常細胞胞質無著色，核呈藍色。 說明書附圖
圖1臨床確診宮頸癌患者宮頸塗片染色示意圖，實體箭頭所示紅色為酸性磷酸酶 著色部位，圖中A、B、C、D中實體箭頭所示細胞分別為來自不同受試者的酸性磷酸酶染色陽 性細胞即宮頸異常細胞，B、 C、 D中空心箭頭所示細胞為著色陰性的正常宮頸細胞。 圖2E為健康對照宮頸塗片染色示意圖，無酸性磷酸酶陽性著色。F為宮頸癌細胞 系Hela細胞染色示意圖，箭頭所示紅色為酸性磷酸酶著色部位，G為細胞放大2倍後效果。
權利要求
一種對受試者進行宮頸異常細胞快速篩查診斷的方法，該方法包括收集受試者宮頸細胞，通過化學染色法分析來自受試者宮頸細胞中酸性磷酸酶的表達情況，以判斷宮頸細胞中是否有異常細胞。
2. 權利要求l的方法，其中酸性磷酸酶作為特異性的生物標誌物在識別宮頸異常細胞 的應用。
3. 權利要求l的方法，酸性磷酸酶作為異常宮頸細胞篩查的特異性生物標誌物在圖象 採集和分析等儀器中的應用。
4. 權利要求1的方法，酸性磷酸酶染色法在異常宮頸細胞篩查和/或評價治療或診斷 效果方面的應用。
5. 權利要求l的方法，酸性磷酸酶染色試劑盒在自動化染色儀器中的應用。
6. 權利要求l的方法，酸性磷酸酶染色試劑盒的設計方法等。
7. 權利要求l的方法，其中酸性磷酸酶的檢測是利用重氮鹽與萘酚鹽在酸性磷酸酶的 存在下進行反應，在胞內生成不溶的紅色沉澱。
8. 權利要求7的方法，其中重氮鹽是指偶氮化合物與亞硝酸鈉反應生成的不穩定化合物。
9. 權利要求7的方法，其中萘酚鹽指的是萘酚AS-BI磷酸鹽或其衍生物。
10. 權利要求8的方法，其中偶氮化合物指的是鹼性品紅或固醬紫(Fast GBCbase)。
全文摘要
本發明提供了一種快速篩查宮頸異常細胞的方法。在製備宮頸細胞塗片基礎上，該方法利用特異性的生物標誌物酸性磷酸酶，採用化學染色法，即酸性磷酸酶水解磷酸萘酚AS-BI生成的萘酚AS-BI與重氮化反應生成的重氮鹽反應在細胞內生成深紅色沉澱，來鑑別宮頸異常細胞。與傳統宮頸塗片檢查或現有液基細胞學檢查相比，該方法具有成本低，快速簡便，靈敏度高，假陰性率低等特點。該方法既適合於宮頸塗片檢查，也可與液基細胞學方法相結合，同時還可與圖像採集軟體結合實現自動化分析。
文檔編號G01N33/50GK101768626SQ20091018577
公開日2010年7月7日 申請日期2009年12月2日 優先權日2009年12月2日
發明者張協平, 方聖雲, 方輝, 沈玉先, 胡健力 申請人:合肥安暘生物醫藥有限公司