葡萄糖轉運蛋白抑制多肽及其製備方法、應用的製作方法
2023-05-10 19:24:31 1
葡萄糖轉運蛋白抑制多肽及其製備方法、應用的製作方法
【專利摘要】葡萄糖轉運蛋白抑制多肽及其製備方法、應用，本發明涉及藥物領域，具體涉及多肽化合物，能治療糖尿病。所述的多肽序列為MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽的製備方法，採用Fmoc保護的固相合成技術製備，可共價連接一個佐劑，佐劑是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽在治療糖尿病及糖尿病併發症中的應用。所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變。多肽可通過多種給藥方式治療糖尿病及糖尿病併發症，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發明中的葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽，可以靶向抑制葡萄糖轉運體蛋白，達到預防或治療糖尿病的效果。
【專利說明】葡萄糖轉運蛋白抑制多肽及其製備方法、應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用於治療糖尿病的多肽化合物。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特徵的代謝性疾病，是由於胰島素不足或胰島素的細胞 代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質及脂質代謝紊亂的一種綜合症。近年來，糖尿病患者 的人數逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數佔糖尿病 總人數的85-90%，嚴重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多併發症，例如：糖尿病腎病、視網膜病變、高血壓等。
[0003] 目前，大多數患者通過口服降糖藥物來幫助控制體內血糖，或調節胰島素分泌等， 很多患者最終仍然要使用胰島素治療。
[0004] 葡萄糖的代謝取決於細胞對葡萄糖的攝取，然而，葡萄糖無法自由通過細胞膜脂 質雙層結構進入細胞，細胞對葡萄糖的攝入需要藉助細胞膜上的葡萄糖轉運蛋白（glucose transporters)簡稱葡萄糖轉運體（GLUT)轉運功能才能得以實現。
[0005] 抑制葡萄糖轉運體轉運功能就可以抑制體內葡萄糖的攝入，緩解體內高血糖的症 狀，因此，葡萄糖轉運體轉運抑制認為是治療糖尿病的靶點。儘管如此，並沒有成熟開發的 葡萄糖轉運體轉運抑制劑問世，用於治療糖尿病。
【發明內容】
：
[0006] 本發明目的是針對現有降血糖的藥物的特點，設計一種多肽2化合物，能有效治 療糖尿病。
[0007] 技術方案
[0008] 一種葡萄糖轉運蛋白抑制多肽2,其序列為MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽2的 製備方法，其特徵在於：採用Fmoc保護的固相合成技術製備，可共價連接一個佐劑，佐劑是 牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽2在治療糖尿病及糖尿病併發症中的 應用。所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變。 多肽2可通過多種給藥方式治療糖尿病及糖尿病併發症，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射 或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0009] 有益結果：
[0010] 本發明中的葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽2，可以靶向抑制葡萄糖轉運體蛋白，達到 預防或治療糖尿病的效果。更優選是治療糖尿病和/或糖尿病併發症藥物中的用途。所 述的糖尿病包括I型糖尿病和Π型糖尿病；所述的糖尿病併發症包括但不限於：糖尿病腎 病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變等。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1
[0012] 多肽的化學合成方法
[0013] 多肽2用Fmoc保護的固相合成技術製備。合成反應按照多肽序列從C端向N端進 行，Rink介質（可在AdvancedChemTech公司購得）上有自由氨基。每一步連接過程中，氨 基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍於介質上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨 基酸。每次胺基酸的連接反應之後，都用一個吡啶/醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5)的混合 物來封閉未連接的自由氨基，封閉反應10分鐘。每次胺基酸的連接反應之後，下一個氨基 酸連接之前，都要把介質上的Fmoc-基團去掉,去Fmoc-基團使用含20 %哌陡的二甲基甲醯 胺，需15分鐘。最後，當所有胺基酸殘基順序連接之後，多肽2用98 %三氟乙酸從介質上切 割下來，切割在室溫下進行2小時。
[0014] 應用上述化學條件可合成並獲得多肽2,序列為MVTRCNNVGRYRVRIYVDA，該序列為 全新序列。也可以委託上海生工合成。
[0015] 實施例2
[0016] 葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽2的體外細胞活性測定
[0017] 採用MTT比色法。將對數生長的胰島瘤細胞（INS-1細胞），以I.OX105加入96 孔培養板中，培養24h，實驗孔分別加入不同濃度的實驗藥物葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽2 作為實驗組；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，每孔加入MTT，作用 4h後，加入DMS0,孵育30min，在酶標儀570nm處測定吸光度A值，按公式細胞生長增殖率= (實驗組吸光值/對照組吸光值-I)X100%。計算出實驗藥物的EC50為5. 45nmol/L。
[0018] 實施例3
[0019] 葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽2的體內降糖實驗
[0020] 昆明小鼠，高脂高糖餵養至體重18?22g，雌雄各半，實驗前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射鏈脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(l%的檸檬酸鹽緩衝液溶解配製）。1周後小鼠尾靜 脈採血測血糖（BS)，BS高於16mmol/L為造模成功。造模後將小鼠分為3組，每組10隻，糖 尿病模型組（DM組）：給予等量的PBS緩衝液皮下注射；對照組（拜糖平）：20μg/kg皮下 注射給藥（溶於0.lmol/LPBS緩衝液），一天兩次，連續15d;樣品組（葡萄糖轉運體蛋白 抑制多肽2):同對照組；另取10隻正常小鼠做為空白組。用藥後第3d、9d、15d於尾靜脈取 血快速測量血糖。15d之後，在停藥1周後，禁食不禁水16小時進行葡萄糖耐量試驗。用 25%葡萄糖溶液（2g/kg)灌胃，灌胃後0、30、60、120分鐘尾靜脈取血檢測血糖。
[0021] 結果：葡萄糖轉運體蛋白多肽2具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈0. 05,表 1);同時，可以緩解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其多肽2的作用與對照組拜糖平作 用相當。
[0022] 表1葡萄糖轉運體蛋白抑制多肽2對小鼠降血糖作用
[0023]
【權利要求】
1. 一種葡萄糖轉運蛋白抑制多肽，其特徵在於：其胺基酸序列為 MVTRCNNVGRYRVRIYVDA 〇
2. -種權利要求1所述多肽的製備方法，其特徵在於：採用Fmoc保護的固相合成技 術製備。
3. 根據權利要求2所述的多肽的製備方法，其特徵在於：共價連接一個佐劑，佐劑是牛 血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。
4. 權利要求1所述的多肽在製備治療糖尿病及糖尿病併發症藥物中的應用。
5. 根據權利要求4的用途，其特徵在於所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高 血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變。
6. 根據權利要求4所述的多肽的用途，其特徵在於：通過多種給藥方式治療糖尿病及 糖尿病併發症，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻 噴劑。
【文檔編號】A61P3/10GK104262462SQ201410509098
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月28日 優先權日:2014年9月28日
【發明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司