夏天無總生物鹼精製物、其製備方法及其用途的製作方法

2023-05-11 10:23:16

專利名稱：夏天無總生物鹼精製物、其製備方法及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及夏天無總生物鹼的精製物，這種精製物中畢扣扣靈的含量低於1重量％，本發明還涉及該精製物的製備方法以及其用於製備藥物製劑的用途。
背景技術：
生物鹼是含負氧化態氮原子、存在於生物有機體中的環狀化合物，是許多中草藥的有效成分。夏天無系罌粟科植物伏生紫堇(CorydalisdecumbensCThunbJPers.)的乾燥塊莖或全草，又名一粒金丹、野延胡、洞裡神仙、伏地延胡等，為常用的行氣活血，通絡止痛藥，可用於中風偏癱，跌扑損傷，風溼性關節炎，坐骨神經痛等諸多血液循環障礙疾病的治療。目前的研究表明夏天無發揮治療作用的成分是總生物鹼。因此，已不斷有人開發出了新的總生物鹼提取工藝，包括極性溶劑提取-樹脂富集、超臨界二氧化碳萃取等，均能夠在一定程度上改善目前已有製劑中存在的問題，得到總生物鹼含量較高的提取物。但在總生物鹼提取物總會有較高含量的致驚厥劑畢扣扣靈。如在中國專利CN1535969A公開了一種夏天無總生物鹼的製備方法，該方法使用極性溶劑對夏天無進行滲漉，滲漉液濃縮後進行大孔樹脂吸附層析，鹼水除雜後以極性溶劑洗脫，最後回收溶劑得到夏天無總生物鹼， 其重量分組成包括原阿片鹼25-60%，四氫巴馬亭10-20%，畢扣扣靈10-20%，巴馬亭 10-20%，提取物中總生物鹼用UV法或HPLC法檢測不少於80%。中國專利CN1010M377A 公開的夏天無總生物鹼重量百分比為原阿片鹼20 30%，延胡索乙素15 25%，畢扣扣靈10 15%，鹽酸巴馬亭5 10%，夏無寧鹼10 15%，紫堇爾明5 10%，總生物鹼含量在提取物中重量比例不低於85%。中國專利CN101058576A公開了一種通過優化超臨界萃取條件，以超臨界(X)2為流體從夏天無中萃取總生物鹼的方法，可以得到總生物鹼含量達 90%以上的提取物，其中分離鑑定出的6個生物鹼的含量可達80%，重量組成比如下原阿片鹼15 35%，延胡索乙素10 25%，畢扣扣靈5 15%，鹽酸巴馬亭0. 05 2%，紫堇爾明5 15%，夏無寧鹼15 30%。早在1934年Welch和Henderson就曾報導了畢扣扣靈的致驚厥作用(J Pharmacol Exp Ther 51 :482，1934)。上海藥物研究所的鄒網等在1976年曾發文報導了畢扣扣靈的致驚厥劑量其小鼠腹腔注射半數驚厥量為6. 25mg/kg，半數致死量(LD5tl)為7. Omg/kg，與經典的驚厥劑比較，畢扣扣靈的效力僅次於士的寧。抗癲癇藥苯妥英鈉、三甲雙酮及苯巴比妥鈉均不能防止畢扣扣靈引起的驚厥。畢扣扣靈的存在使得夏天無總生物鹼在用於臨床時存在致驚厥的隱患，且不利於提高總生物鹼的使用劑量。基於如上理由，通常期望除去夏天無總生物鹼中的畢扣扣靈，但是畢扣扣靈與總生物鹼提取物中的夏無寧鹼和四氫巴馬亭同屬苄基四氫異喹啉類，且畢扣扣靈與夏無寧鹼在TLC上Rf值極為接近，在HPLC上保留時間極為接近。這使得常規的柱層析或萃取等分離手段在應用於從夏天無總生物鹼中分離、去除畢扣扣靈時效果不理想。因此如今仍期望新的提取方法，能得到畢扣扣靈含量較低或不含畢扣扣靈的夏天無總生物鹼精製物。

發明內容
申請人:意外地發現相對於夏天無總生物鹼提取物中的其它生物鹼，畢扣扣靈更易溶於稀鹼溶液，因此本申請利用此特性採用下述方法，選擇性地除去或減少畢扣扣靈，得到了夏天無總生物鹼精製物，其中畢扣扣靈含量低於1重量％或不含有畢扣扣靈，從而在臨床應用時不會產生驚厥的副作用。本發明的夏天無總生物鹼提取物中根據提取方法的不同，還可含有如10 25% 的原阿片鹼、2 10%的巴馬亭、10 25%的延胡索乙素、15 35%的夏無寧鹼、5 15% 的紫堇爾明等其它成分。本發明的夏天無總生物鹼精製物的製備方法包括如下步驟(a)提取夏天無總生物鹼，(b)減少或除去夏天無總生物鹼中的畢扣扣靈，包括⑴以水溶性溶劑溶解夏天無總生物鹼；(ii)加入稀鹼溶液，充分混合反應；(iii)以脂溶性溶劑萃取所得混合反應液，收集有機相，以及(c)除去萃取液中的溶劑。步驟(a)的提取方法可使用本領域技術人員使用的任何方法，例如中國專利 CN1535969A所公開的滲漉，CN101058576A所公開的超臨界C02流體萃取法，CN1647816A所公開的包含高速離心和膜分離技術在內的提取方法，CN101289471A所公開的將夏天無提取液通過陽離子交換樹脂精製後得到夏天無生物鹼的方法，CN1951429A所公開的將夏天無鹽酸提取液依次通過大孔樹脂及氧化鋁柱層析後得到夏天無生物鹼的方法。步驟(b)中的水溶性溶劑可選自DMS0、甲醇、乙醇、丙酮，優選為DMS0。步驟(b) 中的稀鹼溶液可以是本領域中任何已知的無機鹼溶液。有機鹼與畢扣扣靈反應後會形成絡合物/複合物，在後續的萃取步驟中不利於與其它生物鹼的分離，因此本發明不適用有機鹼的稀溶液。無機鹼例如鹼金屬或鹼土金屬的氫氧化物，例如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣等，優選使用氫氧化鈉；步驟(b)中的脂溶性溶劑包括所有的本領域所公知的脂溶性溶劑，例如乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、石油醚、正己烷等，優選使用二氯甲焼。目前國內外已有夏天無片和夏天無注射液生產上市，夏天無片在中國藥典有收載。本發明的夏天無總生物鹼提取物可用於製備各種藥物製劑，包括片劑、膠囊、丸劑、散齊 、顆粒劑、包合物、粉針劑、注射劑等，優選是包合物和鹽酸凍乾粉針劑。
具體實施例方式實施例1取夏天無藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤Ih後置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界0)2流體流速45L/h，夾帶劑(無水乙醇)連續加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min後萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無總生物鹼提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經HPLC測定提取物中夏無寧鹼含量為35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅託品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為 2 %。將此總生物鹼提取物溶解於IOmLDMSO中，然後與4g/mL的NaOH液ImL混合，混合液澄清。將混合液於35度下磁力攪拌30分鐘後轉入250mL分液漏鬥中，向其中加入SOmLCHCl3, 再向其中添加80mL水，震蕩後靜置待其分層後分出下層CHCl3。再次向分液漏鬥中加入SOmL CHCl3,震蕩，靜置，分層後後分出下層CHCl3,重複此操作一次。合併3次CHCl3萃取液，共 240mL，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經HPLC分析測定發現此浸膏中夏無寧鹼含量38%，畢扣扣靈含量0.9%，普羅託品含量16.5%，延胡索乙素含量22%，巴馬亭含量2%，酸性染料比色法測定其總鹼含量為90%。實施例2取夏天無藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤Ih後置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界C02流體流速45L/h，夾帶劑(無水乙醇)連續加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min後萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無總生物鹼提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經HPLC測定提取物中夏無寧鹼含量為35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅託品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為2%。將此總生物鹼提取物溶解於IOmLDMSO中，然後與0. 4g/mL的NaOH液IOmL混合， 混合液澄清。將混合液於35度下磁力攪拌30分鐘後轉入250mL分液漏鬥中，向其中加入 SOmLCHCl3,再向其中添加SOmL水，震蕩後靜置待其分層後分出下層CHCl3。再次向分液漏鬥中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層後後分出下層CHCl3，重複此操作一次。合併3次CHCl3 萃取液，共MOmL，轉入500mL分液漏鬥中，向其中加入200mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層後分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經HPLC分析測定發現此浸膏中夏無寧鹼含量38 %，畢扣扣靈含量0. 3 %，普羅託品含量16. 5 %，延胡索乙素含量22 %，巴馬亭含量2%。實施例3取夏天無藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤Ih後置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界C02流體流速45L/h，夾帶劑(無水乙醇)連續加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min後萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無總生物鹼提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經HPLC測定提取物中夏無寧鹼含量為 35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅託品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為 2 %。將此總生物鹼提取物溶解於IOmLDMSO中，然後與0. 4g/mL的NaOH液IOmL混合，混合液澄清。將混合液於常溫下放置30分鐘後轉入250mL分液漏鬥中，向其中加入SOmLCHCl3, 再向其中添加80mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩後靜置待其分層後分出下層CHC13。再次向分液漏鬥中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層後後分出下層CHC13。合併2次CHCl3萃取液， 共160mL，轉入500mL分液漏鬥中，向其中加入IOOmLO. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層後分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經HPLC分析測定發現此浸膏中夏無寧鹼含量38%，普羅託品含量16. 5%，延胡索乙素含量22%，巴馬亭含量2%，未檢出畢扣扣靈。實施例4.Ikg夏天無藥材，粉碎至20目，使用50g/L的NaCO3水溶液1L，潤溼1小時，用4L95%乙醇浸泡過夜後回流提取，溫度75度，恆溫加熱池，保溫池，共5次，回收溶劑得浸膏。將浸膏用10%鹽酸IL浸泡一夜，離心去沉澱後，以NaOH調節pH至13，得夏天無總鹼沉澱，真空乾燥後得樣品285g，經HPLC測定提取物中夏無寧鹼含量為20%，畢扣扣靈含量為5%，普羅託品含量為11%，延胡索乙素含量為15%，巴馬亭含量為2%，總生物鹼含量為57%。取此總生物鹼提取物12g溶解於15mLDMS0中，然後與0. 4g/mL的NaOH液15mL 混合，混合液澄清。將混合液於常溫下放置30分鐘後轉入250mL分液漏鬥中，向其中加入 SOmLCHCl3,再向其中添加80mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩後靜置待其分層後分出下層CHC13。 再次向分液漏鬥中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層後後分出下層CHC13。合併2次CHCl3 萃取液，共160mL，轉入500mL分液漏鬥中，向其中加入IOOmLO. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層後分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏8. 5g，經HPLC分析測定發現此浸膏中夏無寧鹼含量23. 5 %，普羅託品含量12. 5 %，延胡索乙素含量18 %，巴馬亭含量2 %，未檢出畢扣扣靈。酸性染料比色法測定其中總鹼含量為68%。實施例5.不含畢扣扣靈夏天無總鹼的應用——包合物的製備取Ig去除畢扣扣靈的夏天無總鹼溶於無水乙醇，IOg羥丙基β環糊精溶於IOOmL 無水乙醇，混合後常溫下磁力攪拌2. 5小時，減壓回收溶劑後得可溶於水的淡黃色粉末。實施例6.不含畢扣扣靈夏天無總鹼的應用——鹽酸凍乾粉的製備取不含畢扣扣靈夏天無生物鹼lg，加鹽酸使溶解，加入適量甘露醇，再用氫氧化鈉調節pH4 5，過0. 2 μ m微孔濾膜，分裝，凍幹即可。
權利要求
1.一種夏天無總生物鹼精製物，其中總生物鹼含量為_90%，其特徵在於其中畢扣扣靈的含量低於1重量％或不含有畢扣扣靈。
2.根據權利要求1所述的夏天無總生物鹼精製物，其中總生物鹼中還包含35重量％ 至38重量％的夏無寧鹼、20重量％至30重量％的延胡索乙素、15重量％至30重量％的普羅託品、2重量％至10重量％的紫堇爾明和2重量％至10重量％的巴馬亭。
3.根據權利要求1或2所述的夏天無總生物鹼精製物的製備方法，包括以下步驟(a)提取夏天無總生物鹼，(b)減少或除去步驟(a)的夏天無總生物鹼提取物的畢扣扣靈，包括(i)以水溶性溶劑溶解夏天無總生物鹼；(ii)加入稀鹼溶液，充分混合反應；(iii)以脂溶性溶劑萃取所得混合反應液，收集有機相，以及(c)除去萃取液中的溶劑。
4.根據權利要求3所述的製備方法，步驟(b)所述水溶性溶劑選自DMS0、甲醇、乙醇或丙酮。
5.根據權利要求3所述的製備方法，步驟(b)所述的稀鹼溶液為鹼金屬或鹼土金屬的氫氧化物的水溶液。
6.根據權利要求5所述的製備方法，步驟(b)所述的稀鹼溶液為稀氫氧化鈉溶液。
7.根據權利要求3所述的製備方法，其中步驟(b)所述的脂溶性溶劑選自二氯甲烷、 乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、石油醚或正己烷。
8.根據權利要求7所述的製備方法，其中步驟(b)所述的脂溶性溶劑為二氯甲烷。
9.根據權利要求3所述的製備方法，其中步驟(a)所述的提取方法選自滲漉法、超臨界 C02流體萃取法、膜分離法、離子交換法或樹脂法。
10.根據權利要求1或2所述的夏天無總生物鹼精製物在製備藥物製劑中的用途。
11.根據權利要求10所述的用途，所述藥物製劑是包合物或鹽酸凍乾粉針。
全文摘要
本發明公開一種夏天無總生物鹼精製物，其中總生物鹼含量為55％-90％，其特徵在於其中畢扣扣靈的含量低於1重量％或不含有畢扣扣靈，以及其製備方法和其在製備藥物製劑中的用途。本發明公開的夏天無總生物鹼精製物由於其畢扣扣靈含量低於1重量％或不含有畢扣扣靈，從而在臨床應用時不會產生驚厥的副作用。
文檔編號A61P19/02GK102475743SQ201010562489
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月26日 優先權日2010年11月26日
發明者楊義芳, 袁輝 申請人:上海醫藥工業研究院