青龍衣中胡桃苷b的鑑別方法及其含量測定方法
2023-09-17 17:10:25
專利名稱：青龍衣中胡桃苷b的鑑別方法及其含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種胡桃苷B的鑑別方法及其含量測定方法。
背景技術：
青龍衣為胡桃科植物核桃楸(1/"^""5 MAXIM')和胡桃
fyag^f7rsT^g^Z^的未成熟外果皮(吳徵鎰，周太炎，肖培根，等.新華本草綱目(第
三冊).上海上海科學技術出版社，1990);有效治療胃癌、肝癌、食管癌、肺癌等消化 系統腫瘤。
目前，青龍衣及其製劑的質量標準中沒有青龍衣化學成分的鑑別和含量測定方法，因此 不能有效地控制藥材和製劑的質量，不具有專屬性、準確性和可靠性。
本發明的目的是提供青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法及其含量測定方法，以解決現有青龍 衣及其製劑缺少穩定有效的質量控制指標的問題。
胡桃苷B的化學名稱為(4S)-4， 5-二羥基-a -四氫萘酮-4-0- P -D-吡喃葡糖苷，結構式為
本發明青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法是通過薄層色譜實現的，具體是按下述步驟進行的 :a、將青龍衣生藥粉末過三號篩(篩孔內徑平均值355士13，工業篩目數60孔/英寸)，然 後稱取10g，加入50mL體積純度為50% 95%乙醇，超聲處理30分鐘，濾過，去除濾渣，再將 濾液蒸乾，蒸乾得到的殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；b、每毫升甲醇加入lmg胡 桃苷B配製成對照品溶液；c、分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10uL，點於同一矽膠G板 上，再用展開劑展開，取出後晾乾，再噴質量濃度為10%的鉬酸銨硫酸水溶液，加熱至斑點 清晰，供試品薄層色譜與對照品薄層色譜在相應的位置上呈現相同顏色的斑點證明胡桃苷B 存在；其中步驟c所述的展開劑由三氯甲烷與甲醇按8 3: 2體積比配成。
本發明青龍衣中胡桃苷B的含量測定方法是按下述步驟進行的A、對照品溶液的製備 按每毫升甲醇加入60yg胡桃苷B配製成對照品溶液；B、供試品溶液得製備 一、將青龍衣
發明內容生藥粉末過三號篩(篩孔內徑平均值355士13，工業篩目數60孔/英寸)，然後精密稱定(精 密稱定係指準確到所稱重量的千分之一)10g，再精密量取50mL體積純度為50% 95%乙醇 ，然後加入經精密稱定的青龍衣生藥粉末中，再超聲處理30分鐘，濾過，去除濾渣，濾液蒸 幹，將蒸乾得到的殘渣加水10mL使溶解得到水液；二、水液通過大孔樹脂柱(內徑1.5cm， 長15cm)，以50mL水作洗脫液洗脫，棄去洗脫液，然後用50mL體積純度為10。/。的乙醇作洗脫 液洗脫，棄去洗脫液，繼續用80mL體積純度為30%的乙醇作洗脫，收集洗脫液後蒸乾，蒸乾 得到的殘渣加甲醇溶解並定量轉移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液， 即得作為供試品溶液，洗脫的流速為2 mL/min; C、採用高效液相色譜法測定以十八烷基 矽烷鍵合矽膠作為填充劑，以體積為10:90:0.2的乙腈、水和磷酸混合液作為流動相，理論 板數按胡桃苷B峰計算不低於3000，流動相的流速為0.8 mL/min，檢測波長為258nm，柱溫為 室溫，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10uL，注入高效液相色譜儀進行測定，根 據峰面積用外標法計算出胡桃苷B的含量。
胡桃苷B在青龍衣藥材中含量較高(0. 012% 0. 014%)，胡桃苷B的濃度在6y g/mL 48 yg/mL範圍內，胡桃苷B有良好的線性關係和精密度，易於提取分離得到，且穩定性較好； 本發明具有重現性良好、穩定；用於控制青龍衣藥材和製劑的質量，更具合理性和可操作性 ，是該化合物的一種新用途。本發明以該化合物為指標成分，利用薄層色譜建立了鑑別項目 的方法，利用高效液相色譜法建立含量測定項目的方法，為青龍衣在抗腫瘤應用上提供了科 學的保障。本發明採用的薄層色譜和高效液相色譜法，簡便易行，重現性好，能更有效地控 制青龍衣藥材和製劑的質量，實現青龍衣藥材及其製劑質量的穩定和可控，比現有的質量標 準更具專屬性、準確性和可靠性；胡桃苷B可作為中藥對照品廣泛使用。
圖l是青龍衣的薄層色譜圖；圖2是青龍衣的高效液相色譜圖，圖中l表示對照品溶液的 高效液相色譜，2表示供試品溶液的高效液相色譜；圖3是青龍衣中胡桃苷B含量測定的標準 曲線。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法是通過薄層色譜(薄層層析 ，thin Layer Chromatography)實現的，具體是按下述步驟進行的a、將青龍衣生藥粉末 過三號篩(篩孔內徑平均值355士13，工業篩目數60孔/英寸)，然後稱取10g，加入50mL體 積純度為50% 95%乙醇，超聲處理30分鐘，濾過，去除濾渣，再將濾液蒸乾，蒸乾得到的 殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；b、每毫升甲醇加入lmg胡桃苷B配製成對照品溶液;c、分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10uL，點於同一矽膠G板上，再用展開劑展開， 取出後晾乾，再噴質量濃度為10%的鉬酸銨硫酸水溶液，加熱至斑點清晰，供試品薄層色譜 與對照品薄層色譜在相應的位置上呈現相同顏色的斑點證明胡桃苷B存在(參見圖l);其中 步驟c所述的展開劑由三氯甲烷與甲醇按8 3: 2體積比配成。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟a所述的乙醇的體積純 度為50%。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟a所述的乙醇的體積純 度為60% 80%。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟a所述的乙醇的體積純 度為95%。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式青龍衣中胡桃苷B的含量測定方法是按下述步驟進行的
A、對照品溶液的製備按每毫升甲醇加入60yg胡桃苷B配製成對照品溶液。B、供試品溶 液得製備 一、將青龍衣生藥粉末過三號篩(篩孔內徑平均值355士13，工業篩目數60孔/英 寸)，然後精密稱定(精密稱定係指準確到所稱重量的千分之一)10g，再精密量取50mL體 積純度為50% 95%乙醇，然後加入經精密稱定的青龍衣生藥粉末中，再超聲處理30分鐘， 濾過，去除濾渣，濾液蒸乾，將蒸乾得到的殘渣加水10mL使溶解得到水液；二、水液通過大 孔樹脂柱(內徑1.5cm，長15cm)，以50mL水作洗脫液洗脫，棄去洗脫液，然後用50mL體積 純度為10%的乙醇作洗脫液洗脫，棄去洗脫液，繼續用80mL體積純度為30。/。的乙醇作洗脫，收 集洗脫液(約70mL)後蒸乾，蒸乾得到的殘渣加甲醇溶解並定量轉移至2mL量瓶中，加甲醇 至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得作為供試品溶液，洗脫的流速均為2mL/min; C、採用 高效液相色譜法測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠作為填充劑，以體積為10:90:0.2的乙腈、 水和磷酸混合液作為流動相，理論板數按胡桃苷B峰計算不低於3000，流動相的流速為 0.8mL/min，檢測波長為258nm，柱溫為室溫，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10靚 ，注入高效液相色譜儀進行測定，根據峰面積用外標法計算出胡桃苷B的含量。
本實施方式步驟B的第二步驟中甲醇用量不超過2mL，以能完全溶解蒸乾得到的殘渣為宜
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
五不同的是步驟B中步驟一所述的大孔 樹脂柱為AB-8型大孔樹脂柱。其它步驟及參數與具體實施方式
五相同。 本實施方式高效液相色譜圖如圖2所示。 通過下述實驗驗證本發明胡桃苷B含量測定方法1. 儀器與設備
LC-10ATVP高效液相色譜儀，紫外檢測器；YMC-Pack C18 (4. 6 X 50mm)色譜柱。 試劑乙腈(色譜純、Dikma公司)，磷酸(分析純)，甲醇、乙醇(分析純)。 藥材青龍衣採於黑龍江省五常縣(北青龍衣)，經加工製成。
2. 線性範圍的考察
按每mL甲醇含60y g胡桃苷B配製成對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液l. OmL， 2. OmL ，4.0mL， 6.0mL， 8. OmL置於10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10yL 進行測定，以對照品的濃度為橫坐標，以對照品的峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程 為Y46237X+15184， r=0. 9994。結果表明，在6 y g/mL 48 y g/mL的範圍內，具有良好的線 性關係。
由圖3的結果表明，胡桃苷B的濃度在6yg/mL 48 yg/mL範圍內，對照品峰面積值與進 樣量有良好的線性關係。
3. 精密度試驗
取濃度為24yg/mL的對照品溶液連續進樣5次，RSD值為1.2P/。，表明精密度良好。
4. 重複性試驗
對同一次採集的北青龍衣按樣品處理方法製備5份供試液，按上述色譜條件進樣測定， 結果的RSD值為l. 32%，表明該方法重現性良好。
5. 穩定性試驗
將供試品溶液在O、 2、 4、 6、 8、 12小時分別測定，結果RSD值為1.82y。，表明樣品在12 小時內穩定。
6. 加樣回收率試驗
精密稱取已知含量的北青龍衣5份，每份5g，分別精密加入適量對照品溶液，餘下操作 按供試品溶液製備方法製備，依法測定，測得平均回收率為96. 12%， RSD值為l. 18%。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
五不同的是步驟B中步驟一所述的大孔 樹脂柱為D101型大孔樹脂柱。其它步驟及參數與具體實施方式
五相同。
權利要求
1.青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法，其特徵在於青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法是通過薄層色譜實現的，具體是按下述步驟進行的a、將青龍衣生藥粉末過三號篩，然後稱取10g青龍衣生藥粉末，加入50mL體積純度為50％～95％的乙醇，超聲處理30分鐘，濾過，去除濾渣，再將濾液蒸乾，蒸乾得到的殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；b、每毫升甲醇加入1mg胡桃苷B配製成對照品溶液；c、分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10μL，點於同一矽膠G板上，再用展開劑展開，取出後晾乾，再噴質量濃度為10％的鉬酸銨硫酸水溶液，加熱至斑點清晰，供試品薄層色譜與對照品薄層色譜在相應的位置上呈現相同顏色的斑點證明胡桃苷B存在；其中步驟c所述的展開劑由三氯甲烷與甲醇按8～3∶2體積比配成。
2.青龍衣中胡桃苷B的含量測定方法，其特徵在於青龍衣中胡桃苷B的含量測定方法是按下述步驟進行的A、對照品溶液的製備按每毫升甲醇加入60yg胡桃苷B配製成對照品溶液；B、供試品溶液得製備 一、將青龍衣生藥粉末過三號篩，然後精密稱定10g，再精密量取50mL體積純度為50% 95%乙醇，然後加入經精密稱定的青龍衣生藥粉末中，再超聲處理30分鐘，濾過，去除濾渣，濾液蒸乾，將蒸乾得到的殘渣加水10mL使溶解得到水液；二、水液通過大孔樹脂柱，以50mL水作洗脫液洗脫，棄去洗脫液，然後用50mL體積純度為10%的乙醇作洗脫液洗脫，棄去洗脫液，繼續用80mL體積純度為30%的乙醇作洗脫，收集洗脫液70 mL後蒸乾，蒸乾得到的殘渣加甲醇溶解並定量轉移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液，洗脫的流速均為2mL/min; C、採用高效液相色譜法測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠作為填充劑，以體積為10:90:0.2的乙腈、水和磷酸混合液作為流動相，理論板數按胡桃苷B峰計算不低於3000，流動相的流速為O. 8mL/min，檢測波長為258nm，柱溫為室溫，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IO y L，注入高效液相色譜儀進行測定，根據峰面積用外標法計算出胡桃苷B的含量。
全文摘要
青龍衣中胡桃苷B的鑑別方法及其含量測定方法，它涉及一種胡桃苷B的鑑別方法及其含量測定方法。本發明解決了現有青龍衣及其製劑缺少穩定有效的質量控制指標的問題。本發明胡桃苷B的鑑別方法通過薄層色譜實現的；胡桃苷B的含量測定方法採用高效液相色譜法進行。胡桃苷B作為指標成分進行青龍衣及其製劑質量的控制，具有合理性和可操作性。本發明採用的薄層色譜和高效液相色譜法，簡便易行，重現性好，能更有效地控制青龍衣藥材和製劑的質量，實現青龍衣藥材及其製劑質量的穩定和可控，比現有的質量標準更具專屬性、準確性和可靠性；胡桃苷B可作為中藥對照品廣泛使用。
文檔編號A61K36/52GK101637501SQ20091030554
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月12日 優先權日2009年8月12日
發明者劉麗娟 申請人:黑龍江大學