全反式維甲酸在製備防治心肌重構藥物中的應用的製作方法
2023-09-14 10:48:05 1
專利名稱：全反式維甲酸在製備防治心肌重構藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬醫藥領域，涉及全反式維甲酸在製藥領域中的新用途，具體涉及全反式維甲酸在製備防治心肌重構藥物中的應用。
本發明經動物實驗，結果表明，口服全反式維甲酸可顯著降低心肌間質及心肌血管周圍纖維化，證實全反式維甲酸具有抑制心肌間質及心肌血管周圍纖維化的新用途。為了說明本發明的優點，本發明通過以下動物實驗證明全反式維甲酸明顯降低心肌間質及心肌血管周圍纖維化的藥理作用。
實驗動物採用清潔級自發性高血壓大鼠(spontaneuslyhypertensive rat，SHR)及WKY大鼠，購自中國科學院實驗動物中心。實驗材料採用全反式維甲酸，由上海第六製藥廠生產。
按常規方法，將上述實驗材料全反式維甲酸於植物油中製成混懸劑，植物油為東海糧油工業(張家港)有限公司生產的福臨門牌大豆色拉油。SHR在清潔級實驗室內飼養及實驗。取33隻5周齡的SHR及WKY大鼠，隨機分為4組，各組動物間開始給藥或對照溶劑前的體重均無統計學意義上的差異。4組動物的分組及給藥方案如下WKY對照組植物油，1ml/kg體重/日SHR對照組植物油，1ml/kg體重/日SHRatRA1組全反式維甲酸5mg/kg體重/日(藥物濃度為5mg/ml)SHRatRA2組全反式維甲酸10mg/kg體重/日(藥物濃度為10mg/ml)大鼠分組後開始按上述方案以灌胃方式給藥，每日1次。動物給藥期間每天稱一次體重，每周測一次血壓，並根據體重確定當天的給藥量，連續給藥3個月。餵藥期結束後，處死大鼠，立即取出其心臟和腎臟，經固定、脫水和石蠟包埋後，每隔0.3mm作0.3μm厚的連續切片(心臟的切片取與心臟長軸相垂直的方向，腎臟則作冠狀切片)，HE(hematoxylin和eosin)染色以及膠原染色(用溶於水飽和的苦味酸中的天狼星紅染色)，分離顯示包括心臟和腎臟內小動脈的形態結構以及心肌間質和血管周圍的膠原纖維。
顯微鏡下觀察HE染色切片，用KS400成像系統(德國Zeiss)和Release3.0以及Image Measure軟體攝取上述直徑在50~200μm之間的圓形橫切面小動脈圖象，並分析每根入選小動脈的血管壁面積與管腔面積的比值(wall-area-to-lumen-area-ratio，WA/LA)，每張切片上入選3~5根小動脈，每個大鼠取了3個切面，計有約10根小動脈入選，取其平均值作為每個大鼠血管壁厚度的數據。心肌間質纖維化以膠原容積分數(collagen volume fraction，CVF)作為指標，CVF是以心肌切片中天狼星紅所染色的區域面和與所有結締組織與心肌細胞面積之和的比值；血管周圍纖維化則以血管周圍膠原面積與血管腔面積之比(perivascular collagen area/luminal area，PVCA/LA)作為指標。
腎臟的切片以HE染色，在顯微鏡下尋找直徑在50~200μm之間的圓形橫切面小動脈，用於觀察心肌內小動脈同樣的方法檢測腎臟小動脈的肥厚情況，其數據以WA/LA表示。
各組動物的數據以平均值±標準誤表示，組間的差異用單因素方差分析，p＜0.05為有統計學意義。
實驗結果表明，口服全反式維甲酸3個月可使SHR大鼠中心肌內小動脈壁的肥厚、心肌間質及血管周圍纖維化均顯著降低。表1是全反式維甲酸治療後WA/LA、CVF(％)以及PVCA/LA等指標的變化。表2是腎臟小動脈管壁厚度數據。
表1WKY對照組 SHR對照組 SHRatRA1組 SHRatRA2組(n＝6) (n＝12) (n＝9) (n＝11)WA/LA 0.4±0.04 1.01±0.09*0.79±0.08*，#0.79±0.05*，#CVF(％)2.4±0.2 3.3±0.2*2.5±0.1#2.7±0.1#PVCA/LA0.31±0.04 0.94±0.08*0.66±0.06*，#0.74±0.06*，#其中，數據以平均值±標準誤表示；*與WKY對照組相比，p＜0.05；#與SHR對照組相比，p＜0.05。
表2WKY對照組 SHR對照組 SHRatRA1組SHRatRA2組(n＝6) (n＝12)(n＝9)(n＝11)WA/LA 1.76±0.24.49±0.45*2.78±0.32*，#2.73±0.23*，#其中，數據以平均值±標準誤表示；*與WKY對照組相比，p＜0.01；#與SHR對照組相比，p＜0.01。
其中A為正常血管對照組，B顯示SHR大鼠的小動脈壁明顯肥厚，
C顯示全反式維甲酸可明顯減輕所述肥厚。
圖2是WKY對照組(A1，A2)、SHR對照組(B1，B2)以及SHRatRA2組(C1，C2)心肌內血管周圍及心肌間質膠原染色的照片。
其中，A1，A2為正常血管周圍及間質纖維，B1，B2為SHR大鼠血管周圍及間質纖維化，C1，C2為全反式維甲酸顯著地抑制心肌和血管周圍纖維化。
上述實驗結果證明全反式維甲酸對高血壓所引起的心臟病變具有以下治療作用1)通過抑制心肌內小動脈管壁的肥厚可抑制因小動脈壁肥厚而導致的心肌內小動脈管腔狹窄以至心肌血流阻力增加、心肌血供不足而缺血。
2)通過抑制心肌內血管周圍纖維化，可防止因血管周圍膠原大量沉積而對血管產生的壓迫作用，從而防止因血管周圍纖維化而引起的血管腔狹窄和心肌血供不足。
3)通過抑制心肌間質和血管周圍纖維化，可防止因纖維化而造成的心肌順應性下降、心臟收縮、舒張功能障礙以及心肌耗氧量增加。
4)通過抑制腎臟內小動脈管壁的肥厚，可防止因腎臟小動脈壁肥厚而引起的腎小球血流量下降以及繼發的腎小球濾過率下降和腎功能不全。
權利要求
1.全反式維甲酸在製備抑制血管壁肥厚藥物中的用途。
2.全反式維甲酸在製備抑制心肌內血管周圍纖維化和/或心肌間質纖維化藥物中的用途。
3.全反式維甲酸在製備抑制腎臟內血管管壁肥厚藥物中的用途。
4.全反式維甲酸在製備防治心肌內血管壁肥厚引起的心肌血供不足藥物中的用途。
5.全反式維甲酸在製備防治心肌內血管壁周圍纖維化引起的心肌血供不足藥物中的用途。
6.全反式維甲酸在製備防治心肌內血管壁周圍和/或間質纖維化引起的心臟順應性下降、心臟收縮和舒張功能障礙藥物中的用途。
7.全反式維甲酸在製備防治心臟纖維化造成的心肌耗氧量增多藥物中的用途。
8.全反式維甲酸在製備防治腎臟小血管壁肥厚引起的腎血管不足以及腎小球濾過功能障礙藥物中的用途。
9.全反式維甲酸在製備治療高血壓引起的心臟和腎臟損害的藥物中的用途。
全文摘要
本發明屬醫藥領域，涉及全反式維甲酸在製藥領域中的新用途，本發明經動物實驗表明，具有抑制自發性高血壓引起的心肌內小動脈壁肥厚、心肌血管周圍及間質纖維化等病理變化的新用途和抑制腎臟內小動脈壁肥厚的作用。結果證明全反式維甲酸可以明顯地減輕因自發性高血壓而引起的心肌內管壁肥厚、心肌內血管周圍及心肌間質纖維化，以及腎臟內動脈管壁的增生肥厚，可用於製備防治心肌重構和高血壓引起的心臟及腎臟損害的藥物。
文檔編號A61P9/10GK1452958SQ0312887
公開日2003年11月5日 申請日期2003年5月26日 優先權日2003年5月26日
發明者朱依純, 呂雪, 姚泰, 丁瀅泂, 陳瑩 申請人:復旦大學