一種冰結構蛋白的製造方法
2023-09-19 09:35:10 1
專利名稱：一種冰結構蛋白的製造方法
技術領域：
本發明涉及一種冰結構蛋白的製造方法，屬於食品加工技術領域。
背景技術：
冰結構蛋白能以非依數性地降低水溶液的冰點而對熔點影響甚微，導致水溶液的熔點和 冰點之間出現差值，即冰結構蛋白具有熱滯活性；且冰結構蛋白還能夠特異性地與冰晶結合， 吸附到冰晶表面的冰結構蛋白，阻止了吸附位置處冰晶的生長，冰晶表面被蝕刻得凹凸不平， 導致冰晶新的生長半徑較原來小，阻止冷凍食品體系中冰晶長大，即冰結構蛋白具有抑制冰 晶重結晶功能。基於此，冰結構蛋白可用於冷凍食品體系，控制冰晶重結晶，減小冰晶對食 品體系造成的破壞，具有廣闊的應用前景。
女貞葉在全國分布廣泛，來源豐富。它能耐受-12'C的低溫，在越冬期間保持長青。越冬 女貞葉，經受冷應激，會產生冰結構蛋白以抵抗外界的寒冷。且女貞葉中不含毒副成分，由 其提取出的天然冰結構蛋白可以廣泛應用於農業、食品、醫藥等領域。
發明內容
本發明的目的在於開發一種女貞葉冰結構蛋白的製造方法，最大限度地降低成本、簡化 工藝，為冰結構的廣泛應用奠定基礎。 本發明的技術方案
女貞葉，經冷藏，與Tris-HCl緩衝液及碎冰混合勻漿，再經沸水浴滅酶，冰水浴冷卻， 冷凍離心，收集上清液；再將上清液加入預冷丙酮(上清液丙酮=1: 4)混合，-20°(:過夜， 沉澱，再冷凍離心，收集沉澱，冷凍乾燥，得到冰結構蛋白凍乾粉。工藝為
(1) 冷藏用清水洗淨女貞葉，勿乾燥，帶水置於4"C冰箱中冷藏4周，誘導產生冰結 構蛋白；
(2) 勻漿將冷藏女貞葉投入pH7.4、 20mmol/L Tris-HCl緩衝液(Vc lmg/1)，其中女貞 葉質量/緩衝液體積比為2/5，然後加入碎冰，混合勻漿；
(3) 滅酶勻漿後，經八層紗布過濾，將濾液沸水浴15min，使酶失活，再經冰水浴冷
卻；
(4) 冷凍離心於溫度4。C、離心力10,000 g條件下，離心15min，收集上清液。
(5) 沉澱上清液按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入預冷丙酮中，混合，-20°(:過夜，
沉澱；
(6) 冷凍離心、乾燥於溫度4。C、離心力10,000 g條件下，離心30min，收集沉澱，
3經冷凍乾燥得冰結構蛋白凍乾粉產品。
本發明製備的冰結構蛋白為純天然產品，不含有任何有毒有害物質，可以廣泛應用於農 業、食品、醫藥等行業。
本發明與已有技術相比具有以下優點
本發明製造過程簡單，成本低廉，簡單易行，所得冰結構蛋白凍乾粉天然、無毒，為冰 結構蛋白的廣泛應用奠定了基礎。
圖1為一種冰結構蛋白製造方法工藝流程圖。
圖2為冰結構蛋白凍乾粉的聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)圖。 圖3為部分熔融重凍結的冰結構蛋白的DSC曲線。
具體實施方式
實施例一
用清水洗淨女貞葉，置於4'C冰箱中冷藏4周。稱取女貞葉100g，投入250mLpH7.4、 20mmol/LTris-HCl緩衝液(Vclmg/1)，再加入碎冰，混合勻漿；八層紗布過濾，將濾液沸水 浴15min，再經冰水浴冷卻，於溫度4'C、離心力IO，OOO g條件下離心15min，收集上清液； 然後，按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入預冷丙酮，混合，-201:過夜，沉澱，於溫度4。C、 離心力10,000 g條件下，離心30min，收集沉澱，冷凍乾燥，得到冰結構蛋白凍乾粉。
將上述冰結構蛋白凍乾粉經SDS-PAGE分析，如圖2，泳道M為低分子量標準蛋白，泳 道l為製造出的冰結構蛋白，分子量約為66Kda。經差示掃描量熱儀測定其熱滯活性，如圖 3，所得到的冰結構蛋白的熱滯活性為0.678'C，較通常植物中冰結構蛋白的熱滯活性高。
權利要求
1、一種冰結構蛋白的製造方法，其特徵是以女貞葉為基體，經過冷藏後，與Tris-HCl緩衝液及碎冰混合勻漿，再經沸水浴滅酶，冰水浴冷卻，冷凍離心，收集上清液；再將上清液加入預冷丙酮(上清液∶丙酮＝1∶4)混合，-20℃過夜，沉澱，再冷凍離心，收集沉澱，冷凍乾燥，得到冰結構蛋白粉。工藝為(1)冷藏用清水洗淨女貞葉，勿乾燥，帶水置於4℃冰箱中冷藏4周，誘導產生冰結構蛋白；(2)勻漿將冷藏女貞葉投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl緩衝液(Vc 1mg/l)，其中女貞葉質量/緩衝液體積比為2/5，然後加入碎冰，混合勻漿；(3)滅酶勻漿後，經八層紗布過濾，將濾液沸水浴15min，使酶失活，再經冰水浴冷卻；(4)冷凍離心於溫度4℃、離心力10,000g條件下，離心30min，收集上清液。(5)沉澱冷卻液按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入預冷丙酮中，混合，-20℃過夜，沉澱；(6)冷凍離心、乾燥於溫度4℃、離心力10,000g條件下，離心30min，收集沉澱，經冷凍乾燥得冰結構蛋白凍乾粉產品。
2、 一種用權利要求l所述製造方法得到的冰結構蛋白，其特徵是分子量為66Kda，熱滯 活性為0.678°C。
3、 一種用權利要求l所述製造方法得到的冰結構蛋白，其特徵是純天然、不含有毒有害 物質，可以廣泛應用於農業、食品、醫藥等行業。
全文摘要
本發明涉及一種冰結構蛋白的製造方法，屬於食品加工技術領域。本發明以女貞葉為基體，經過冷藏，與Tris-HCl緩衝液及碎冰混合勻漿，再經沸水浴滅酶、冰水浴冷卻、冷凍離心取上清液；再將上清液加入預冷丙酮，低溫過夜沉澱，再經冷凍離心和冷凍乾燥等工藝過程，製造冰結構蛋白凍乾粉。本發明工藝過程簡單，成本低廉，簡單易行。製造出的冰結構蛋白分子量為66Kda，熱滯活性為0.678℃，為純天然產品，不含有任何有毒有害物質，可以廣泛應用於農業、食品、醫藥等行業。
文檔編號C07K1/14GK101684144SQ20081015719
公開日2010年3月31日 申請日期2008年9月26日 優先權日2008年9月26日
發明者任士賢, 廖祥儒, 賈春利, 黃衛寧 申請人:江南大學