一種硫磺菌提取物及用途
2023-10-19 05:01:42 1
一種硫磺菌提取物及用途
【專利摘要】本發明還提供了一種硫磺菌提取物，所述的提取物中含有三氫化松苓酸B的重量百分含量為1-12％。本發明還提供了該提取物及其中的化合物三氫化松苓酸B的用途。硫磺菌是常見食用真菌，安全性好，可以進行大規模發酵製備。製備得到的硫磺菌提取物質量穩定，可控性強；硫磺菌提取物以及分離得到的三氫化松苓酸B具有明顯的抗炎活性，可用於治療急慢性風溼性、類風溼性關節炎、急慢性肝炎、乳腺炎等炎性疾病，能夠抑制COX2，減少PGE2等炎性介質釋放，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
【專利說明】—種硫磺菌提取物及用途
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種硫磺菌提取物。
【背景技術】
[0002]硫磺菌(Laetiporus sulphureus (Bull.) Murri 11)又稱硫色乾酪菌、硫磺多孔菌，屬擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，絢孔菌屬。它是一種藥食兼用的大型真菌。經常食用可增進身體健康，其子實體含齒孔酸(enruicoic acid)，可合成留體藥物腎上腺皮質激素，是預防和治療多種疾病的重要藥物。
[0003]目前關於硫磺 菌功效的報導較少，如:申請號:99110871.X，發明名稱:一種調理胃腸功能的硫磺菌製劑及其生產方法，本發明涉及一種調理胃腸功能的硫磺菌製劑及其生產方法。硫磺菌製劑包括:硫磺菌口服液、粉(散)、膠束、蜜丸劑型。本發明與一般具有相同功能的藥品或保健品相比，有如下優點:迅速緩解病情，可產生即時藥效應；對「氣脹」病、結腸炎等疾病治癒率可達90%以上，而且不再重犯此類病狀，它是直接將硫磺菌原生藥粉入藥。
【發明內容】
[0004]本發明的技術方案是提供了一種硫磺菌提取物。本發明的另一技術方案是提供了該提取物的用途。
[0005]本發明提供了一種硫磺菌提取物，其中，所述的提取物中含有三氫化松苓酸B的重量百分含量為1-12%。
[0006]它是硫磺菌子實體的有機溶劑提取物。
[0007]進一步優選地，所述的有機溶劑是95%乙醇。
[0008]該提取物的高效液相指紋圖譜有4個特徵峰，各特徵峰的相對保留時間為(min):峰 I:33.11±0.I ;峰2:35.13±0.I ;峰 3:50.46±0.I ;峰4:52.21±0.I ；
[0009]色譜條件為:液相色譜柱:色譜柱:十八烷基鍵合矽膠為填料；(Ultimate?AQ-C18, 5um, 4.6 X 250mm, velch);流動相:10 % -100 % 的乙臆水，50min ； 100 % 乙臆 8min ；檢測波長:210nm。
[0010]該提取物的指紋圖譜紋圖譜具有8個特徵峰，各特徵峰的相對保留時間為(min):峰 1:34.57+0.1 ;峰 2:36.27+0.1 ；峰 337.13+0.1 ;峰 4:39.03+0.1 ;峰 5:42.30+0.1 ；峰6:49.14+0.1 ;峰 7:50.93+0.1 ;峰 8:52.15+0.1 ；
[0011]色譜條件為:液相色譜柱:十八烷基鍵合矽膠為填料；流動相:10% -100%的乙腈水，50min:100% 乙腈 8min ;檢測波長:254nm。
[0012]所述的指紋圖譜如圖2或圖4所示。
[0013]本發明還提供了所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備抗炎的藥物或/保健食品中的用途。
[0014]本發明還提供了所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備治療急慢性風溼性、類風溼性關節炎或急慢性肝炎或乳腺炎的藥物中的用途。
[0015]本發明還提供了所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備減少PGE2炎症介質釋放的藥物中的用途。
[0016]本發明還提供了所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備C0X2抑制劑的藥物中的用途。
[0017]其中，所述的藥物是治療胃炎、腸炎消化系統炎症；宮頸炎、等生殖系統炎症；尿道炎、腎炎泌尿系統炎症；急慢性咽炎、肺炎呼吸系統炎症的藥物。
[0018]硫磺菌是常見食用真菌，安全性好，可以進行大規模微生物發酵製備。製備得到的硫磺菌提取物質量穩定，可控性強；硫磺菌提取物以及分離得到的三氫化松苓酸B具有明顯的抗炎活性，可用於治療急慢性風溼性、類風溼性關節炎、急慢性肝炎等炎性疾病，能夠抑制C0X2，減少PGE2等炎性介質釋放，可減少胃酸分泌，保護胃，減輕抗炎藥物對胃的不良反應，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1矽膠柱洗脫物高效液相分析圖
[0020]圖2硫磺菌提取物波長210時局部放大高效液相分析圖[0021 ]圖3硫磺菌提取物波長210時高效液相分析圖
[0022]圖4硫磺菌提取物波長254時高效液相分析局部放大圖
[0023]圖5硫磺菌提取物波長254時高效液相分析圖
[0024]圖6對照品波長210時高效液相分析圖
[0025]圖7HE染色(放大200倍)
[0026]圖8M染色放大200倍
[0027]圖9三氫化松苓酸B與C0X2結合模型
【具體實施方式】
[0028]實施例1硫磺菌提取物及三氫化松苓酸B的製備
[0029]1、實驗材料
[0030]1.1、實驗用菌
[0031]硫磺菌(Laetiporus sulphureus (Fr.) Mutti 11)由三峽旅遊職業技術學院王紹柏教授鑑定並提供子實體及菌株。
[0032]1.2、實驗試劑
[0033]95%的醫用酒精、雙蒸水、色譜級乙腈、石油醚、丙酮等。
[0034]1.3、實驗儀器
[0035]KQ-500DB型超聲波清洗儀，艾朗旋轉蒸發儀(德國)，ME215S型十萬分之一電子天平(德國Sartorios公司)，紫外分光光度計(UV — 2201，日本島津公司)，高效液相色譜儀(DIONEX Ultimate3000,美國戴安液相色譜有限公司)，核磁共振儀(UltrashiedTM400MHZPlus, bruker 布魯克公司)，冷凍乾燥機(FREEZONE PLUS6, LABC0NC0)。
[0036]2、實驗方法與結果
[0037] 2.1、硫磺菌醇提物的製備[0038]將100g硫磺菌子實體用95%的乙醇回流提取三次，每次1.5h，趁熱過濾並合併三次濾液，與旋轉蒸發儀上減壓除去乙醇，得流浸膏50g，再將提取物於50°C烘乾，得25g醇提物。
[0039]2.2、三氫化松苓酸B的製備與鑑定
[0040]將上述醇提物用石油醚:丙酮=3:1作洗脫劑經矽膠柱分離，所得洗脫物佔醇提取物的24%，再將洗脫物經HPLC分析其成分，條件為雙蒸水(A)-乙腈(B)洗脫體系洗脫，B/A = 95%，洗脫物中主要有化合物I (見圖.1)。
[0041 ] 精確稱取60mg洗脫物，用B/A = 95 %作流動相，經高效液相色譜分離，得18mg化合物I。按同法製備化合物1，供實驗用。
[0042]經核磁鑑定，化合物I: 13C-NMR(DMS0-d6, 500MHz): 177.1, 134.4，133.5，131.2，124.0, 76.9，50.2，49.2，47.6，46.7，43.9，38.7，36.7，35.4，32.3，30.2，28.5，28.2，27.7，26.6，26.1, 25.7，25.6，24.2，20.4，19.1, 18.0, 17.5，15.9，15.7 ； IH-NMR(DMS0-d6, 500MHz):0.68 (s, 3H)，0.69 (s, 3H)，0.81 (s, 3H)，0.90 (s, 3H)，0.90 (s, 3H)，1.52 (s, 3H)，1.62 (s, 3H)，4.25 (d, J = 3.5Hz, 1H)，5.06 (s, 1H)，11.96 (s, 1H).[0043]與文獻對照，符合三氫化松苓酸B的結構。
[0044]2.3、硫磺菌醇提物的高效液相特徵分析
[0045]實驗儀器
[0046]高效液相色譜儀(DIONEX Ultimate3000,美國戴安液相色譜有限公司)，液相色譜柱(Ultimate? AQ-C18，5um, 4.6X 250mm, velch)
[0047]實驗試劑
[0048]色譜級乙腈(TEDIA)，蒸餾水，色譜級甲醇(TEDIA)，四氫呋喃(分析純)
[0049]實驗方法
[0050]將2.1mg樣品於1.2ml甲醇與四氫呋喃混合物中溶解，過濾，待用；將對照品1.6mg三氫化松茶酸B和1.1mg齒孔酸用0.6ml甲醇與四氫呋喃混合物中溶解,過濾,待用；
[0051]將高效液相色譜分析條件設為；10% -100%的乙腈水，50min ; 100%乙腈8min，共計58min,進樣量為IOul。
[0052]實驗結果，見圖2-圖6。
[0053]實施例2本發明藥物片劑的製備
[0054]取硫磺菌醇提物或三氫化松苓酸B，加入澱粉和I %硬脂酸鎂，壓片，使每片含硫磺菌醇提物0.1-1.0g,或齒孔酸10-100mg。(所用的輔料可以是微晶纖維素、改性澱粉、乙基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等片劑常用的輔料中的一種或幾種)。
[0055]實施例3本發明藥物膠囊劑的製備
[0056]取硫磺菌醇提物或三氫化松苓酸B，加入澱粉，制粒，整粒，裝膠囊，每粒膠囊中含硫磺菌醇提物0.1-0.5g，或三氫化松苓酸B10-100mg。(所用的輔料可以是微晶纖維素、改性澱粉、乙基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等膠囊劑常用的輔料中的一種或幾種)。
[0057]實施例4本發明 藥物軟膏劑的製備
[0058]取硫磺菌醇提物或三氫化松苓酸B，加入羊毛脂、凡士林、單硬脂酸甘油脂等輔料製作成軟膏，每100g軟膏中含硫磺菌醇提物0.1-0.5g,或齒孔酸三氫化松苓酸B10-100mg。
[0059]以下通過具體藥效學試驗證明本發明的有益效果。
[0060]試驗例I硫磺菌提取物及三氫化松苓酸B小鼠耳廓腫脹實驗
[0061]1、實驗材料
[0062]1.1實驗動物
[0063]體重18_22g ;雄性昆明小鼠。由三峽大學動物實驗中心提供(生產許可證:SCXK (鄂)2011-0012 ;使用許可證:SYXK (鄂)2011-0061)。
[0064]1.2實驗試劑
[0065]二甲苯，4% CMC
[0066]1.3 儀器
[0067]ME215S型十萬分之一電子天平(德國Sartorios公司)
[0068]2、實驗方法與結果
[0069]2.1、實驗方法
[0070]2.1.1、造模與給藥方式
[0071]將實驗小鼠隨機分組，分別為對照組、陽性組、硫磺菌提取物高劑量組、中劑量組、低劑量組和三氫化松苓酸B低劑量組和高劑量組，每組10隻。連續灌胃給藥5天。
[0072]2.1.2、檢測指標與檢測方法
[0073](I)末次給藥後Ih後，將各組小鼠右耳上、下兩面分別均勻塗抹二甲苯20μ I致炎，左耳作為空白對照，20min後處死小鼠，剪下雙耳，用6mm直徑的打孔器衝下耳片，隨即在電子天平稱重並記錄。用右耳重量減去左耳重量作為腫脹度，並計算腫脹率。
[0074]計算公式:
[0075]耳腫脹度=左耳片重(g)_右耳片重(g)
[0076]腫脹率=(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度X 100%
[0077](2)採用SPSS11.5統計軟體對數據處理。先進行數據的正態分布檢驗，方差齊性檢驗，組間比較採用方差分析。計量數據用均數土標準差(I 土S)表示，組間差異用單因素方差分析，多個樣本均數間每兩個均數的比較採用Q檢驗。P〈0.05說明有差異，P〈0.01為有顯著性差異。
[0078]2.2、實驗結果
[0079]硫磺菌酒精提取物對二甲苯所致小鼠急性耳腫脹的影響(見表1)
[0080]表1硫磺菌醇取物及TAB對小鼠耳廓腫脹的影響Ci ±S，N = 8)
【權利要求】
1.一種硫磺菌提取物，其特徵在於:所述的提取物中含有三氫化松苓酸B的重量百分含量為1-12%。
2.根據權利要求1所述的硫磺菌提取物，其特徵在於:它是硫磺菌子實體的有機溶劑提取物；優選地，所述的有機溶劑是95%乙醇。
3.根據權利要求1或2任意一項所述的硫磺菌提取物，其特徵在於:該提取物的高效液相指紋圖譜有4個特徵峰，各特徵峰的保留時間為(m1n):峰1:33.11±0.1 ;峰2:35.13±0.1 ;峰 3:50.46±0.1 ;峰4:52.21±0.1 ； 色譜條件為:液相色譜柱:十八烷基鍵合矽膠為填料；流動相:10% -100%的乙腈水，50m1n ；100% 乙臆 8m1n ;檢測波長:210nm。
4.根據權利要求1-3任意一項所述的硫磺菌提取物，其特徵在於:該提取物的指紋圖譜紋圖譜具有8個特徵峰，各特徵峰的保留時間為(m1n):峰1:34.57+0.1 ;峰2:36.27+0.1 ;峰 3:37.13+0.1 ；峰 4:39.03+0.1 ；峰 5:42.30+0.1 ；峰 6:49.14+0.1 ；峰7:50.93+0.1 ;峰 8:52.15+0.1 ； 色譜條件為:液相色譜柱:十八烷基鍵合矽膠為填料；流動相:10% -100%的乙腈水，50m1n ；100% 乙臆 8m1n ;檢測波長:254nm。
5.根據權利要求3或4所述的硫磺菌提取物，其特徵在於:所述的指紋圖譜如圖2或圖4所示。
6.權利要求1-5任意一項所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備抗炎的藥物或/保健食品中的用途。
7.權利要求1-5任意一項所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備治療急慢性風溼性、類風溼性關節炎或急慢性肝炎或乳腺炎的藥物中的用途。
8.權利要求1-5任意一項所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備減少PGE2炎症介質釋放的藥物中的用途。
9.權利要求1-5任意一項所述的硫橫菌提取物或三氫化松苓酸B在製備COX2抑制劑的藥物中的用途。
10.根據權利要求8或9所述的用途，其特徵在於:所述的藥物是治療胃炎、腸炎消化系統炎症；宮頸炎、等生殖系統炎症；尿道炎、腎炎泌尿系統炎症；急慢性咽炎、肺炎呼吸系統炎症的藥物。
【文檔編號】A61K36/07GK103961379SQ201410205411
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月15日 優先權日:2014年5月15日
【發明者】汪鋆植, 孫文軍, 楊進, 武玲, 羅華軍, 程凡, 賀海波, 李偉 申請人:神農架天潤生物科技有限責任公司, 三峽大學