皺紋盤鮑精子冷凍保存方法
2023-09-22 16:39:30 2
專利名稱：皺紋盤鮑精子冷凍保存方法
技術領域：
本發明涉及一種皺紋盤鮑精子的保存方法，尤其是一種保存期長、存活率高、運輸 方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法。
背景技術：
皺紋盤鮑(Haliotis discushannai)的營養價值較高，被稱為「軟黃金」，在國際市 場上每噸售價達4 6萬美元，為此，皺紋盤鮑的人工繁殖或增養殖發展迅速。但是由於多 年人工繁殖導致苗種質量下降，人工育苗期間稚鮑剝離後大量死亡、單位面積和總體出苗 率降低，不但嚴重影響了養成用苗，而且養殖成鮑也會出現死亡現象。為解決苗種質量下降 的問題，每年需從原產地選取雄性種鮑，採集其精子後再與養殖地雌性種鮑所產的卵子人 工受精。長途運輸種鮑不但佔用空間大、運輸成本高，而且會造成種鮑死亡，同時還存在著 檢疫繁瑣等問題。另外從種質資源保護的角度考慮也需要建立精子庫，以進行遺傳學方面 的研究。
發明內容
本發明是為了解決現有技術所存在的上述技術問題，提供一種保存期長、存活率 高、運輸方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法。本發明的技術解決方案是一種皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，其特徵是將按如下 步驟進行a.用消毒的自然海水將活力90%以上的精子稀釋至8X IO8 11 X IO8個/ml，得 到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1 2混合併裝入冷凍管中，冰箱內4°C預冷 10 15min，置於液氮罐內液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、 二甲基亞碸及煮沸消毒海水混合製成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8%、二甲基亞 碸10%、水82%，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2. 5g/100ml，海藻糖的 加入量為0. 95g/100ml。本發明所保存的皺紋盤鮑精子保存期長、運輸方便，解凍後成活率可達70%、受精 率達40 %，可避免長途運輸種鮑所存在的佔用空間大、運輸成本高、種鮑死亡及檢疫繁瑣等 問題，可用於皺紋盤鮑精子庫的建立、鮑的引種和雜交，利於皺紋盤鮑的種質資源保護。
具體實施例方式a.用消毒的自然海水(現有養殖皺紋盤鮑用海水)將活力90%以上的精子稀釋 至8 X IO8 11 X IO8個/ml，得到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1 2混合併裝入冷凍管中，冰箱內4°C預冷 10 15min，置於液氮罐內液氮面上方8cm處保持15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘 油、二甲基亞碸及煮沸消毒 海水混合製成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8%、二甲基亞碸10%、水82%，再向混合液中加入蔗糖(天津市科密歐化學試劑有限公司產品)及 海藻糖(國藥集團化學試劑有限公司產品)，蔗糖的加入量為2. 5g/100ml，海藻糖的加入量 為 0. 95g/100ml。 需要使用精子時，將冷凍管從液氮罐中取出，置於20°C水中解凍。解凍後精子成活 率70%，將精子與卵子人工受精，受精率為40%。
權利要求
一種皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，其特徵是將按如下步驟進行a.用消毒的自然海水將活力90％以上的精子稀釋至8×108～11×108個/ml，得到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1∶2混合併裝入冷凍管中，冰箱內4℃預冷10～15min，置於液氮罐內液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、二甲基亞碸及煮沸消毒海水混合製成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8％、二甲基亞碸10％、水82％，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2.5g/100ml，海藻糖的加入量為0.95g/100ml。
全文摘要
本發明公開一種保存期長、存活率高、運輸方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，按如下步驟進行用消毒的自然海水將活力90％以上的精子稀釋至8×108～11×108個/ml，得到精子稀釋液；將精子稀釋液與抗凍液按體積比1∶2混合併裝入冷凍管中，冰箱內4℃預冷10～15min，置於液氮罐內液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、二甲基亞碸及煮沸消毒海水混合製成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8％、二甲基亞碸10％、水82％，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2.5g/100ml，海藻糖的加入量為0.95g/100ml。
文檔編號A01N1/02GK101828546SQ20101017880
公開日2010年9月15日 申請日期2010年5月21日 優先權日2010年5月21日
發明者劉志丹, 李霞, 王 琦, 秦豔傑 申請人:大連水產學院