高純度棒柄花苷a的製備及其質量控制方法

2023-12-05 22:36:51

專利名稱：高純度棒柄花苷a的製備及其質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種化合物單體製備領域，具體涉及一種高純度棒柄花苷A的製備及其質量控制方法。
背景技術：
化學對照品又 稱標準品，是中藥質量標準研究、質量檢測和質量控制的實物對照，中藥化學對照品的研究，是中藥標準化研究的一個非常重要的部分，對產品的質量評價，特別是在藥品生產的質量控制中，中藥化學對照品起著極其重大的作用，是中藥質量控制的基礎與核心。棒柄花苷A是一種苯丙素酚糖苷類化合物化學成分，是植物活性成分之一，也是許多植物和藥品標準質量控制的指標性成分。目前尚未有相應的國家藥品標準物質，國內外對棒柄花苷A中藥化學對照品的系統研究未見報導，參照中藥化學對照品(供含量測定用)的技術要求，對棒柄花苷A化學對照品進行研究，建立棒柄花苷A化學對照品的批量提取工藝、純度與含量以及雜質檢查的分析測定方法，從而建立棒柄花苷A化學對照品的技術標準，為其作為中藥化學對照品以及藥材和製劑的質量標準研究提供科學基礎和保證。棒柄花苷A作為植物、藥材及其產品的化學對照品，是質量控制的技術關鍵，眾多企業、科研和檢驗部門都需要高純度的棒柄花苷A對照品，其市場需求很大，由於棒柄花苷A在藥材中的含量低，提取分離技術要求很高、難度很大。本發明進行棒柄花苷A中藥化學標準品製備及其質量控制技術研究，解決高純度棒柄花苷A化學對照品的問題，對中藥現代化的作用是顯而易見的，具有重大的實際意義和學術價值。棒柄花苷A是從棒柄花植物分離得到的活性物質，從公開文獻所知，僅有一篇文獻報導棒柄花苷A的提取分離方法，如:1.題名棒柄花中反式-4- (1-丙烯基)-苯酚-P-D-吡喃葡萄糖苷的化學結構分離鑑定作者劉布鳴盧文杰牙啟康陳家源刊名廣西科學，2005，12 (3) =214-21文摘:取大戟科植物棒柄花Cleidionbrevipetiolatum Pax et HofTm.,粉碎,用水提取數次,濾過,合併濾液,濃縮,過DlOl大孔樹脂層析，用水洗脫，再用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，濃縮，再進行矽膠柱層析，用氯仿、氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，得粗結晶。將粗結晶反覆進行矽膠H柱層析(加壓)用氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，得棒柄花素A結晶。經混合溶劑反覆重結晶，得白色粉末結晶，經理化常數、UV、IR, 1HNMR, 13CNMR, MS等波譜測試和解析，鑑定為反式4- (1-丙烯基)-苯酚-P-D-吡喃葡萄糖苷。上述方法採用傳統的柱層析技術對反式-4- ( 1-丙烯基)_苯酚-P -D-吡喃葡萄糖苷(棒柄花苷A)進行提取分離，分離得率低，生產周期長，提取量小，且純度未達到中藥化學對照品的要求，即純度大於98%，該文獻沒有製備出高純度的棒柄花苷A，也沒有棒柄花苷A純度與質量控制方法，無法滿足高純度棒柄花苷A化學對照品的需要
發明內容
本發明的目的為了克服現有的棒柄花苷A純度低、收率低或生產成本高的不足，以及無系統的棒柄花苷A的提取純化與質量控制方法，提供一種高純度棒柄花苷A的製備及其質量控制方法，該方法製備得到的棒柄花苷A純度高、質量好，可以作為化學對照品或標準品，保證質量控制。本發明是從大戟科棒柄花屬植物棒柄花(Cleidion brevipetiolatum Pax etHoffm.)中經提取、分離、精製、純化而製得的棒柄花苷A，其化學名、分子式、結構式如下:
中文名:棒柄花苷A
化學名:反式-4- (1-烯丙基)-苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷 英文名:trans-4- (1-propenyl) -phenol- β -D-glucopyranoside 分子式:C15H20 O6 結構式如下:
權利要求
1.一種高純度棒柄花苷A的製備方法，其特徵在於:包括以下工藝過程:取大戟科棒柄花葉，粉碎，每公斤棒柄花的乾燥葉子用5 10倍重量的體積濃度50 90%的乙醇回流提取2 8次，濾過，合併濾液，濃縮，回收乙醇，得浸膏，經矽膠柱層析，用氯仿-甲醇梯度洗脫，收集含棒柄花苷A的流分，薄層色譜TLC檢測合併，濃縮，即得純度為重量含量80 90%的棒柄花苷A粗結晶；將粗結晶用製備高效液相色譜法分離純化，色譜柱為C-18柱，利用乙腈-水為流動相洗脫，流速為5 10 mL/min，檢測波長為255nm，柱溫為25°C 35°C，收集棒柄花苷A組分，並對所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測，合併保留時間相同而且純度在重量90% 98%之間和純度大於98%以上的棒柄花苷A，減壓濃縮，得到純度重量90% 98%之間以及大於98%以上的棒柄花苷A ； 所述的氯仿-甲醇體積配比為:100:0 50:50 ; 所述的製備高效液相色譜法的流動相乙腈-水體積配比為:15:85 50:50 ； 所述的分析HPLC條件為:色譜柱為C-18柱；流動相為體積比:乙腈:水溶液=20:80 50:50 ;檢測波長為 255nm ;流速為 0.6 mL/min 1.5mT,/miη。
2.如權利要求1所述的高純度棒柄花苷A的質量控制方法，其特徵在於:採用薄層色譜分析方法或HPLC分析方法，所述的薄層色譜分析方法:薄層板:矽膠G板；3種展開劑系統:體積比:系統(I)醋酸乙酯-石油醚(60 90°C ) (1:1 )，系統(2)苯-丙酮(2:1 )，系統(3)氯仿-甲醇(7:3);點樣:取本品適量，用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一矽膠G板上，按不同的點樣量梯度點樣，點樣量分別為20mg、40mg、60mg、80mg、IOOmg ;置展開缸分別展開，展距:15cm ;定位:噴以10%乙醇磷鑰酸溶液，晾乾，在105°C烘至斑點顯色清晰，置白燈下檢視；結果在薄層色譜中，可見藍色的單一的螢光斑點，3種展開劑系統，5個不同濃度的梯度點樣，均為單一斑點，未見雜質斑點。
3.根據權利要求2所述的高純度棒柄花苷A的質量控制方法，其特徵在於:所述的液相色譜方法:色譜條件:色譜柱C-18,4.6r 250mm, IOmm ;流速:0.6 1.5mL/min ;進樣量:10 20mL ;面積歸一化法定量；系統條件(I)流動相:甲醇-水溶液體積比例30:70 60:40 ;檢測波長:255nm ;系統條件(2)流動相:乙腈-水溶液體積比例15:85 50:50 ;檢測波長:255nm ;系統條件(3)流動相:乙腈-水溶液體積比例15:85 50:50 ;檢測波長:2IOnm ;含量與純度測定:精密稱取於105°C乾燥至恆重的對照品適量，加體積比80%甲醇水溶液製成每ImL含Img的溶液，在測定條件下，進樣20mL，注入液相色譜儀，用2個流動相溶劑系統分別記錄色譜圖至主成分的出峰保留時間的2.5倍以上，用面積歸一化法計算含量，結果系統測定對照品含量在均98%以上；雜質檢查，分別在不同系統記錄的色譜圖中，除溶劑峰外，雜質峰面積總和結果均小於2.0%;峰純度檢測:取對照品適量，按流動相系統，在高效液相色譜儀上，用二極體陣列DAD檢測器進行峰純度檢查，棒柄花苷A的HPLC色譜峰>98%，其色譜峰紫外吸收光譜圖，三維圖譜以及5點光譜圖完全重合，表明為單一純物質峰。
全文摘要
一種以大戟科棒柄花屬植物棒柄花葉為原料，提供一種高純度棒柄花苷A的製備方法、檢測方法與用途，其方法是先將大戟科植物棒柄花葉粉碎，用乙醇加熱回流提取，乙醇提取物經矽膠柱層析，用氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，用薄層色譜檢測，收集含有棒柄花苷A的洗脫液，合併，減壓濃縮，得到棒柄花苷A粗結晶；再用反相矽膠C-18柱製備高效液相法分離，對所收集的每一份洗脫液利用分析型高效液相色譜檢測，合併保留時間相同而且純度在重量90%～98%之間和98%以上的棒柄花苷A組分，減壓濃縮，即可分別得到純度在重量90%～98%之間的棒柄花苷A和純度大於98%的棒柄花苷A組分，並採用薄層色譜和液相色譜進行質量控制。
文檔編號C07H1/08GK103145775SQ20131002296
公開日2013年6月12日 申請日期2013年1月22日 優先權日2013年1月22日
發明者劉元, 劉布鳴, 陳小剛, 黃豔, 宋志釗, 盧文杰, 文志雲 申請人:廣西壯族自治區中醫藥研究院