高血壓易感基因組的鑑定的製作方法

2023-12-02 20:50:21

專利名稱：高血壓易感基因組的鑑定的製作方法
技術領域：
本發明涉及包含能夠用於判定高血壓發病風險的SNP的遺傳標記、能夠作為用 於檢測該遺傳標記的引物或探針使用的高血壓發病風險判定用多核苷酸、使用該SNP的 高血壓發病風險判定方法、用於該SNP的分型的高血壓發病風險判定用微陣列、及用於 該高血壓發病風險判定方法的試劑盒等。本申請要求2008年2月21日在日本申請的日本特願2008-040208號的優先權， 並將其內容援引於此。
背景技術：
高血壓是例如冠狀動脈疾病、腦中風、慢性腎病等的主要發病原因，高血壓的 預防在社會和公共衛生上是很重要的。高血壓是通過很多原因而誘發發病的多因素疾 病，將這些誘發高血壓的原因稱作危險因素(風險因素，riskfactor)。高血壓的危險因素 主要大致分為環境因素和遺傳因素，認為它們的相互作用發揮著重要的作用。危險因素中，作為環境因素，例如可列舉出年齡的增長、肥胖、壓力、過量攝 取鹽分等。另一方面，作為遺傳因素，已知有各種高血壓易感基因。這裡，「高血壓易 感基因」是指，由於具有所述基因而引發高血壓的危險率上升的基因。也就是說，可判 斷的是，具有高血壓易感基因的人與不具有高血壓易感基因的人相比，更容易罹患高血 壓。並且認為，在高血壓那樣的多因素疾病中，其易感基因很多是表現為單核苷酸多態 性(SNP)等多態性的等位基因(等位基因)。迄今為止，作為含有基因多態性的高血壓易感基因，報告有血管緊張素原、 α-內收蛋白、β 2腎上腺素受體、糖蛋白Ia(GPIa)、趨化因子受體2 (CCR2)、載脂蛋 白C (ApoC-III)、G-蛋白β 3亞基(GP β 3)、腫瘤壞死因子α (TNF α )、胰島素受體底 物1 (IRS-I)、糖蛋白Ib α (GPIb α )、C-型利鈉肽(CNP)、血紅素氧合酶1 (HMOX-l)、 SCNNlA等各種基因(例如參照專利文獻1 4。)。此外，近年來，報告了 CYP17 基因(rs6162)多態性、EXOSC3基因(rs7158)多態性、ACCNl基因(rs28933)多態 性、KCNMB4 基因(rs710652)多態性、KCNIP2 基因(rs755381)多態性、ATP2A3 基 因(rs887387)多態性、RAC2 基因(rs929023)多態性、CD3EAP 基因(rs967591)多態 性、CALCR 基因(rsl042138)多態性、ATPlOD 基因(rsl058793)多態性、GNA14 基因 (rsl801258)多態性、PTHRl 基因(rsl869872)多態性、ATP2B1 基因(rs2070759)多態 性、HLA-DMB 基因(rs2071556)多態性、SLC13A1 基因(rs2140516)多態性、SLC2A11 基因(rs2236620)多態性、GNAI2基因(rs2236943)多態性、CACNA2D2基因(rs2236957) 多態性、PRKWNK1基因(rs2255390)多態性、SLC22A7基因(rs2270860)多態性、 KCNNl 基因(rs2278993)多態性、SLC21A6 基因(rs2291075)多態性、CACNA1E 基因 (rs2293990)多態性、SLC26A8 基因(rs2295852)多態性、ERCCl 基因(rs2298881)多態 性、DLGAP2 基因(rs2301963)多態性、COL4A1 基因(rs2305080)多態性、GUCAlC 基因(rs2715709)多態性、ATPlOC 基因(rs3736186)多態性、HCN4 基因(rs3743496)多態性、PTPRT基因(rs3746539)多態性、FGF2基因(rs3747676)多態性、CHGA基因 (rs3759717)多態性、PPP1R1B 基因(rs3764352)多態性、ADORAl 基因(rs3766554)多 態性、RGS19IP1基因(rs3815715)多態性、RGS20基因(rs3816772)多態性有望作為高 血壓易感基因多態性(例如參照專利文獻5。)。高血壓的治療是為了防止由高血壓誘發的冠狀動脈疾病等的發病而以降低血壓 為目的。治療方法主要大致分為通過改善飲食生活等生活習慣來減輕高血壓的危險因 素、和降壓治療劑的給藥療法。通常，判斷各患者的風險，根據該判定結果和實際的 血壓，決定降壓目標和治療方法。例如，首先，將收縮期血壓/舒張期血壓為140 159/90 99mmHg分類為輕症高血壓，將160 179/100 109mmHg分類為中症高血 壓，將MSO/^llOmmHg分類為重症高血壓後，考慮除血壓以外的危險因素而判斷風險。 例如，將為輕症高血壓且不具有其他危險因素的患者判斷為低風險組，將為輕症高血壓 且具有一些危險因素的患者判斷為中等風險組，將為輕症高血壓但具有糖尿病等危險性 高的危險因素的患者判斷為高風險組。通常，為低風險組和中等風險組時，首先，進行 一定時期的生活習慣的改正，其後在血壓沒有充分降低的情況下進行給藥療法，但對於 高風險組的患者，與一定時期的生活習慣的改正同時進行給藥療法。即，即使血壓為相 同程度，也未必是相同的治療方法，根據各患者的風險而適當選擇治療方法。因此，正 確評價高血壓發病的風險是非常重要的。

大部分的危險因素各自單獨未必是高血壓發病的誘因。特別是作為遺傳因素的 高血壓易感基因的情況下，認為是所具有的多個高血壓易感基因相互影響，結果誘發了 高血壓。因此，在高血壓發病的風險評價中，所具有的高血壓易感基因的數量越多，則 判斷為越高風險組。因此認為，通過調查儘可能多的高血壓易感基因的有無，從而能夠 更準確地評價高血壓發病的風險，但已報告有很多高血壓易感基因，對它們全部進行檢 查從評價的迅速性及經濟性的觀點出發並不優選。另外，該基因存在與否和高血壓發病 的相關性因高血壓易感基因的不同而不同，因此，以相關性比較低的高血壓易感基因作 為風險評價的判斷資料時，無法得到可靠性高的評價。專利文獻1 日本特開2004-222503號公報專利文獻2:日本特開2004-113094號公報專利文獻3 日本特開2004-33051號公報專利文獻4:日本特開2004-24125號公報專利文獻5:日本特開2007-143504號公報

發明內容
發明要解決的問題S卩，為了準確地評價高血壓發病的風險，優選使用與高血壓易感基因高血壓發 病的相關性高的有用的高血壓易感基因作為遺傳標記，更優選組合使用現實中臨床上能 夠測定的範圍內的數個有用的高血壓易感基因作為遺傳標記。然而，對於迄今為止報告 的高血壓易感基因，雖然觀察到了存在與否和高血壓發病具有相關性，但相關的程度不 充分，另外，幾乎不存在能夠進一步提高風險評價的可靠性的高血壓易感基因的組合。本發明的目的在於提供包含存在與否和高血壓發病的相關性充分高且能夠用於高血壓發病的風險判定的SNP的遺傳標記、能夠作為用於檢測該SNP的引物或探針使 用的高血壓發病風險判定用多核苷酸、使用該SNP的高血壓發病風險判定方法、用於該 SNP的分型的高血壓發病風險判定用微陣列、及用於該SNP的分型的高血壓發病風險判 定用試劑盒等。用於解決問題的方案本發明人等為了解決上述問題而進行了深入研究，結果發現，以從8924人採集 的基因組DNA為對象，調查病例(高血壓)組和對照(正常血壓)組中的SNP的頻率差並 進行病例對照相關分析，結果是，ATP2B1基因和CYPl 1B2基因的SNP、特別是ATP2B1 基因的 SNP(rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)、SNP (rsl 1105364)、 CYP11B2基因的SNP(rsl799998)作為高血壓的遺傳標記是非常有用的，進而，通過將選 自由這些SNP、及AGT基因的SNP (rs699)所組成的組中的2種以上SNP組合，與各種 SNP單獨相比，能夠更準確地判斷高血壓發病風險，從而完成了本發明。S卩，本發明的第一方案提供一種高血壓的遺傳標記，其特徵在於，由與包含 ATP2B1基因的SNP(單核苷酸多態性)的ATP2B1基因的部分鹼基序列或全部鹼基序 列相同或互補的序列構成，所述SNP為選自由SNP(rslll05378)、SNP (rs2681472)、 SNP(rsl401982)、及SNP(rsl 1105364)所組成的組中的1種以上。 另外，本發明的第二方案提供一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在 於，其具有下述的(a) (f)中任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rslll05378) 的引物或探針使用；(a)序列號5所示的鹼基序列、或序列號5所示的鹼基序列的包含 SNP(rsl 1105378)的部分序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(C)在所述 (a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl 1105378)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得 到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成 的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列；(d)序列號6所示的鹼基序列、或序列號6 所示的鹼基序列的包含SNP(rslll05378)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補的 鹼基序列；(f)在所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP (rsl 1105378)以外的1 數個鹼基 缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d) 或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第三方案提供一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在 於，其具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rs2681472) 的引物或探針使用；(a)序列號12所示的鹼基序列、或序列號12所示的鹼基序列的包含 SNP(rs2681472)的部分序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(C)在所述 (a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得 到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成 的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列；(d)序列號13所示的鹼基序列、或序列號 13所示的鹼基序列的包含SNP(rs2681472)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補 的鹼基序列；(f)在所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基 缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d) 或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第四方案提供一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在於，其具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rsl401982) 的引物或探針使用；(a)序列號19所示的鹼基序列、或序列號19所示的鹼基序列的包含 SNP(rsl401982)的部分序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(C)在所述 (a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得 到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成 的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列；(d)序列號20所示的鹼基序列、或序列號 20所示的鹼基序列的包含SNP(rsl401982)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補 的鹼基序列；(f)在所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基 缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d) 或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第五方案提供一種高血壓的遺傳標記，其特徵在於，其由與包 含CYPl 1B2基因的SNP即SNP(rsl799998)的CYPl 1B2基因的部分鹼基序列或全部鹼基 序列相同或互補的鹼基序列構成。另外，本發明的第六方案提供一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在 於，其具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rsl799998) 的引物或探針使用；(a)序列號26所示的鹼基序列、或序列號26所示的鹼基序列的包含 SNP(rsl799998)的部分序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(c)所述(a) 或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得到的 鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成的 多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列；(d)序列號27所示的鹼基序列、或序列號27 所示的鹼基序列的包含SNP(rsl799998)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補的 鹼基序列；(f)在所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基 缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d) 或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第七方案提供一種高血壓發病風險判定方法，其特徵在於， 其是使用遺傳標記來判斷高血壓發病風險的方法，其具有以下工序(a)對由人個 體採集的核酸的、選自由 SNP(rsl 1105378)、SNP(rs2681472)、SNP(rsl401982)、 SNP (rsl 1105364)、及SNP (rsl799998)所組成的組中的1種以上進行分型的工序；(b)根 據由所述工序(a)得到的分型結果來判斷所述人個體的高血壓發病風險的工序。本發明的第七方案中，所述工序(a)進一步優選為對AGT基因的SNP即 SNP(rs699)進行分型的工序。另外，本發明的第八方案提供一種高血壓發病風險判定用微陣列，其特徵在 於，在固相載體上固定有選自由本發明的第二、第三、第四、及第六方案的高血壓發病 風險判定用多核苷酸所組成的組中的1種以上。本發明的第八方案中，優選進一步 在所述固相載體上固定具有下述的(a) (f) 中的任一鹼基序列、且能夠作為用於檢測SNP(rs699)的引物或探針使用的多核苷酸； (a)序列號33所示的鹼基序列、或序列號33所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的部分 序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(c)所述(a)或(b)的鹼基序列中 除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下 雜交的鹼基序列；(d)序列號34所示的鹼基序列、或序列號34所示的鹼基序列的包含 SNP(rs699)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列;(f)所述(d)或(e) 的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得到的鹼基序列， 且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由該所述(d)或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在 嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第九方案提供一種高血壓發病風險判定用SNP分型試劑盒，其 特徵在於，其包含選自由本發明的第二方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、本發明 的第三方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、本發明的第四方案的高血壓發病風險判 定用多核苷酸、本發明的第六方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、及本發明的第八 方案的高血壓發病風險判定用微陣列所組成的組中的1種以上。

另外，本發明的第十方案提供一種高血壓發病風險判定用SNP分型試劑盒， 其特徵在於，其包含選自由本發明的第二方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、本發 明的第三方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、本發明的第四方案的高血壓發病風險 判定用多核苷酸、本發明的第六方案的高血壓發病風險判定用多核苷酸、本發明的第八 方案的高血壓發病風險判定用微陣列、及具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列且能 夠作為用於檢測SNP(rs699)的引物及探針使用的多核苷酸所組成的組中的1種以上； (a)序列號33所示的鹼基序列、或序列號33所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的部分 序列；(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列；(c)所述(a)或(b)的鹼基序列中 除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序 列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下 雜交的鹼基序列；(d)序列號34所示的鹼基序列、或序列號34所示的鹼基序列的包含 SNP(rs699)的部分序列；(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列;(f)所述(d)或(e) 的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添加而得到的鹼基序列， 且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴 格的條件下雜交的鹼基序列。另外，本發明的第十一方案提供一種ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP 重組載體，其特徵在於，其包含用IoxP序列夾持ATP2B1基因的鹼基序列的全部或一部 分而成的鹼基序列。另外，本發明的第十二方案提供一種ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP 重組小動物，其特徵在於，使用本發明的第十一方案的載體製作得到。另外，本發明的第十三方案提供一種ATP2B1基因局部缺失小動物，其特徵在 於，其通過使選擇性Cre表達轉基因小動物與作為本發明的第十二方案的ATP2B1基因 局部缺失小動物製作用IoxP重組小動物交配而製得，所述選擇性Cre表達轉基因小動物 以選自由下述啟動子所組成的組中的一種啟動子作為Cre重組酶(Cre Recombinase)的表 達啟動子Tie-2啟動子、Tie-I啟動子、Flk-I啟動子、SM22啟動子、SM-MHC啟動 子、Wtl啟動子、PO啟動子、Pax3啟動子、α MHC啟動子、Nkx2.5啟動子、Tbxl啟動 子、四環素誘導(tetracycline-inducible)啟動子、及CMV增強子-雞β-肌動蛋白(CMV enhancer-chicken β ictin)啟動子。
另外，本發明的第十四方案提供一種ATP2B1基因的局部缺失小動物的使用方 法，其特徵在於，使用作為本發明的第十三方案的ATP2B1基因局部缺失小動物作為用於 篩選鈣拮抗藥的試驗動物。發明的效果 作為本發明的第一方案和/或第五方案的高血壓的遺傳標記是包含存在與否和 高血壓發病的相關性充分高的SNP的遺傳標記。因此，通過利用使用了本發明的高血壓 的遺傳標記的本發明的第七方案即高血壓發病風險判定方法，能夠得到可靠性更高的判
定結果。另外，通過利用作為本發明的第二 第四方案及第六方案的高血壓發病風險判 定用多核苷酸、固定有該高血壓發病風險判定用多核苷酸的作為本發明的第八方案的高 血壓發病風險判定用微陣列、具有該高血壓發病風險判定用多核苷酸或該高血壓發病風 險判定用微陣列的作為本發明的第九方案和/或第十方案的高血壓發病風險判定用SNP 分型試劑盒中的任一者，從而能夠準確且簡便地檢測作為本發明的高血壓的遺傳標記的 SNP,能夠高精度且有效地判定高血壓發病風險。
具體實施例方式本發明中，「高血壓」是指，全身的動脈壓一過性或持續地高達可能誘發心血 管系統障礙等障礙的水平的狀態。高血壓的具體的定義沒有特別限定，例如根據日本高 血壓學會制定的《高血壓治療準則2004》(JSH2004)是指收縮期血壓/舒張期血壓為 140/90mmHg以上的狀態。除了在沒有服用降壓藥等的狀態下收縮期血壓為HOmmHg 以上、舒張期血壓為90mmHg以上的情況以外，還包括收縮期血壓不到140mmHg、但 舒張期血壓為90mmHg以上的情況，以及舒張期血壓不到90mmHg、但收縮期血壓為 HOmmHg以上的情況。另外，高血壓主要大致分為原發性高血壓和繼發性高血壓，90% 以上被分類為原發性高血壓，本發明中，優選原發性高血壓。本發明中，「高血壓的遺傳標記」是指成為高血壓的遺傳因素的標記的基因。 本發明的高血壓的遺傳標記包含SNP，作為其等位基因(等位基因)，包含高血壓易感基 因。本發明中，「高血壓發病風險」是指高血壓的易罹患性(容易患高血壓的程 度)。即，本發明中，某些人個體為高風險組是指推測該人個體誘發高血壓的危險率高， 為低風險組是指推測該人個體誘發高血壓的危險率低。本發明中，SNP優選註冊於公共資料庫的SNP，能夠從其參考號(reference number)確定的 SNP。例如有通過 NCBI (National center for Biotechnology Information) 的SNP資料庫(dbSNPBUILD124)的參考號即rs號確定的SNP、通過東京大學醫科學研 究所整理的日本人的SNP的資料庫JSNP (註冊商標)(http://s:np.ims.u-tokyo.ac.jp/indeX_ ja.html)的參考號即IMS-JST號確定的SNP等。作為本發明的第一方案的高血壓的遺傳標記包含SNP，作為等位基因，包含 ATP2B1 (ATPase, Ca2+運輸，質膜1)基因。具體而言，其特徵在於，作為ATP2B基 因的 SNP，由與包含選自由 SNP(rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)、 SNP(rsl 1105364)所組成的組中的1種以上的ATP2B1基因的部分鹼基序列或全部鹼基序列相同或互補的序列構成。該遺傳標記所包含的ATP2B基因的SNP可以為1種，也 可以為2種以上。例如，可以僅為SNPCrsl 1105378)，可以僅為SNP(rs2681472)，可以 僅為 SNP(rsl401982)，也可以僅為 SNP(rsl 1105364)。另外，可以為 SNP(rsl 1105378) 與 SNP (rs2681472)的組合，可以為 SNP (rsl 1105378)與 SNP (rsl401982)的組合， 可以為 SNP (rs2681472)與 SNP (rsl401982)的組合，也可以為 SNP (rsl 1105378)、 SNP(rs2681472)、SNP(rsl401982)與 SNP(rsl 1105364)的組合。ATP2B1是在正常血壓組和高血壓組中表達量顯著增大的酶，ATP2B1基因是公 知的高血壓易感基因。據報導，人的ATP2B1基因(NCBI登錄號NC_000012)中， 例如，啟動子區域存在的SNP(rs2070759)在各多態性的高血壓發病風險中存在顯著差異 (例如，參照專利文獻5。)等，但該結果的顯著性並不足以用於診斷。另一方面，據報 道，在原發性高血壓患者44名(病例組)和正常血壓者40名(對照組)中，對於ATP2B1 基因的所有22個外顯子進行了 SSCP (Single StrandConformation Polymorphism,單鏈構象 多態性)分析和HTXCHeteroduplex，異質性雙鏈構象多態性)分析，結果儘管靈敏度為 100%,但在病例組和對照組中並沒有觀察到顯著差異(例如，參照G.R.Monteith et al.、 Biochemical and biophysicalresearch communications、1997 年、第 230 卷第 2 號、第 344 346頁。)。S卩，本發明人等首次發現如下見解ATP2B1基因為公知的高血壓易感基 因，認為ATP2B1的表達量的多少對於高血壓發病風險很重要，高血壓發病風險根據啟動 子區域以外的SNP等基因多態性的不同而不同。這裡，SNP (rsl 1105378)為T/C多態性，由後述實施例3的結果可知，與正常血 壓組相比較的情況下，高血壓組中，C等位基因的頻率顯著高於T等位基因，作為高血壓 的遺傳標記是有用的。另外，SNP(rs2681472)為G/A多態性，由後述實施例9的結果可知，與正常血 壓組相比較的情況下，高血壓組中，A等位基因的頻率顯著高於G等位基因，作為高血 壓的遺傳標記是有用的。另外，SNP(rsl401982)為A/G多態性，由後述實施例15的結果可知，與正常
血壓組相比較的情況下，高血壓組中，G等位基因的頻率顯著高於A等位基因，作為高 血壓的遺傳標記是有用的。進而，SNP(rsl 1105364)為G/T多態性，由後述實施例21的結果可知，與正常
血壓組相比較的情況下，高血壓組中，T等位基因的頻率顯著高於G等位基因，作為高血 壓的遺傳標記是有用的。作為本發明的第五方案的高血壓的遺傳標記包含SNP，作為等位基因，包含 CYP11B2(細胞色素P450，亞家族XIB2)基因。具體而言，其特徵在於，由與包含 CYPl 1B2基因的SNP即SNP (rsl799998)的CYPl 1B2基因的部分鹼基序列或全部鹼基序 列相同或互補的鹼基序列構成。SNP(rsl799998)為C/T多態性，由後述實施例28的結 果可知，與正常血壓組相比較的情況下，高血壓組中，T等位基因的頻率顯著高於C等 位基因，作為高血壓的遺傳標記是有用的。另外，未有報導指出CYP11B2基因特別地顯 示出與高血壓相關的見解，CYP11B2基因為高血壓易感基因是本發明人等首次發現的見 解。作為本發明的第七方案的高血壓發病風險判定方法是利用作為本發明的第一方案和/或第五方案的高血壓的遺傳標記(以下有時也稱為「本發明的高血壓的遺傳 標記」。)來判定高血壓發病的風險的方法。具體而言，其特徵在於，其包括以下 工序(a)對由人個體採集的核酸的、選自由SNPCrsl 1105378)、SNP(rs2681472)、 SNP(rsl401982)、SNP (rsl 1105364)、及 SNP (rsl799998)所組成的組中的 1 種以上 進行分型的工序；和(b)根據通過所述工序(a)獲得的分型結果來判定所述人個體的 高血壓發病風險的工序。SNP (rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)、 SNP(rsl 1105364)、SNP(rsl799998)中的任意一種的多態性之間，在高血壓的易發病性方 面統計學上都顯著不同，因此能夠由所鑑定的SNP的基因型判定高血壓發病風險。首先，作為工序(a)，對由人個體採集的核酸的、選自由SNP(rsl 1105378)、 SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)、SNP (rsl 1105364)、及 SNP (rsl799998)所組成的組 中的1種以上進行分型。本發明中，「對SNP進行分型」意味著，測定核酸的鹼基序列，檢測SNP，從 而鑑定多態性。例如，鑑定作為判定對象的核酸的SNP(rsl 1105378)為TT型、TC型、
CC型中的哪一者。供於SNP分型的核酸只要是從人個體採集的，則沒有特別限定，可以是血液、 體液等生物試樣(待測物)中所含有的核酸、或者從這些生物試樣等提取的核酸，也可以 是以這些核酸為模板擴增得到的核酸。另外，也可以是利用逆轉錄酶由生物試樣中所含 有的RNA合成的cDNA。SNP的分型方法只要是通常用於SNP的檢測的方法，則沒有特別限定。例 如，可列舉出 Invader(商標、Third WaveTechnologies 公司)法、TaqMan (商標、Applied Biosystems公司)法、MALDI-TOF質譜法、微陣列法、測序法、利用PCR(聚合酶鏈反
應)等鹼基序列擴增法的檢測法等。特別是優選像TaqMan法、PCR法、微陣列法等那 樣的使用與各多態性特異性雜交的引物或探針來檢測SNP的方法。例如，在PCR法中， 以僅與野生型等位基因完全互補的多核苷酸作為野生型引物，以僅與突變型等位基因完 全互補的多核苷酸作為突變型引物的情況下，以包含SNP的核酸作為模板利用各引物進 行PCR，通過是否能夠得到PCR產物，能夠鑑定SNP的基因型。同樣地，以僅與野生 型等位基因完全互補的多核苷酸作為野生型探針，以僅與突變型等位基因完全互補的多 核苷酸作為突變型探針的情況下，通過使用固定有包含SNP的核酸的微陣列並利用各探 針時能否雜交，能夠鑑定SNP的基因型。這些使用對各SNP特異性的探針或引物的方法 與測序法等不同，由於可直接識別SNP，因此可靠性更高，另外，SNP分型所需要的時 間短，且簡便。另外，使用對各SNP特異性的引物進行PCR時獲得的PCR產物的檢測可通過通 常用於檢測和定量PCR產物時的任意方法來進行。例如，可通過電泳來檢測，可以通過 使用SYBR Green等螢光嵌入劑的實時PCR來檢測，也可以通過單分子螢光分析法(single molecule fluorescence analysis)來檢測。能夠作為用於檢測SNP的引物或探針使用的高血壓發病風險判定用多核苷酸， 只要是能夠與包含該SNP的基因的包含該SNP在內的部分區域或其互補鏈雜交的多核苷 酸，則沒有特別限定。另外，高血壓發病風險判定用多核苷酸的鹼基長度、Tm值等可 考慮分型方法、反應條件等適當決定，但作為高血壓發病風險判定用多核苷酸的鹼基長
17度，優選為10 60個鹼基長度，更優選為15 50個鹼基長度。這種高血壓發病風險判定用多核苷酸的設計可採用該技術領域中眾所周知的方 法中的任一者來進行。例如，利用公知的基因組序列數據和通用的引物設計工具，能夠 簡便地設計。作為該引物設計工具，例如有網絡上能夠利用的Primer3等。另外，公知的 基因組序列數據通常能夠在作為國際性的鹼基序列資料庫的NCBI、或DDBJ(DNA Data Bank of Japan)等中獲得。這樣設計的高血壓發病風險判定用多核苷酸可採用該技術領域中眾所周知的方 法中的任一者來合成。例如，可依賴於合成公司來合成，也可以使用市售的合成機獨自 合成。作為用於檢測ATP2B1基因上的SNP(rslll05378)的引物或探針，特別優選使用 具有下述的(a) (f)中任一鹼基序列的、作為本發明的第二方案的高血壓發病風險判定 用多核苷酸(以下稱為「SNP(rsl 1105378)檢測用多核苷酸」。)。(a)序列號5所示的鹼基序列、或序列號5所示的鹼基序列的包含 SNP (rsl 1105378)的部分序列。(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列。(c)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP (rsl 1105378)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。(d)序列號6所示的鹼基序列、或序列號6所示的鹼基序列的包含 SNP (rsl 1105378)的部分序列。(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列。(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP (rsl 1105378)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，具有上述(a) (C)中的任一鹼基序列的SNP(rsl 1105378)檢測用多核苷 酸是能夠檢測SNP (rsl 1105378)的C等位基因(C allele)的多核苷酸，具有上述(d) (f) 中的任一鹼基序列的SNP (rsl 1105378)檢測用多核苷酸是能夠檢測SNP (rsl 1105378)的T 等位基因(Tallele)的多核苷酸。作為用於檢測ATP2B1基因上的SNP(rs2681472)的引物或探針，特別優選使用 具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列的、作為本發明的第三方案的高血壓發病風險判 定用多核苷酸(以下稱為『『SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸」。)。(a)序列號12所示的鹼基序列、或序列號12所示的鹼基序列的包含 SNP (rs2681472)的部分序列。(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列。(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。(d)序列號13所示的鹼基序列、或序列號13所示的鹼基序列的包含 SNP (rs2681472)的部分序列。
(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列。(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另夕卜，具有上述(a) (c)中的任一鹼基序列的SNP(rs2681472)檢測用多核苷 酸是能夠檢測SNP (rs2681472)的A等位基因(Aallele)的多核苷酸，具有上述(d) (f) 中的任一鹼基序列的SNP (rs2681472)檢測用多核苷酸是能夠檢測SNP (rs2681472)的G等 位基因(Gallele)的多核苷酸。作為用於檢測ATP2B1基因上的SNP(rsl401982)的引物或探針，特別優選使用 具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列的、本發明的第四方案即高血壓發病風險判定用 多核苷酸(以下稱為「SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸」。)。(a)序列號19所示的鹼基序列、或序列號19所示的鹼基序列的包含 SNP(rsl401982)的部分序列。(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列。(c)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。(d)序列號20所示的鹼基序列、或序列號20所示的鹼基序列的包含 SNP (rsl401982)的部分序列。(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列。(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另夕卜，具有上述ω (c)中的任一鹼基序列的SNP(rsl401982)檢測用多核苷 酸是能夠檢測SNP(rsl401982)的G等位基因的多核苷酸，具有上述(d) (f)中的任一 鹼基序列的SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸是能夠檢測SNP(rsl401982)的A等位基因 的多核苷酸。另外，作為用於檢測CYP11B2基因上的SNP(rsl799998)的引物或探針，特別優 選具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列的、作為本發明的第五方案的高血壓發病風險 判定用多核苷酸(以下稱為「SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸」。)。(a)序列號26所示的鹼基序列、或序列號26所示的鹼基序列的包含 SNP (rs 1799998)的部分序列。(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列。(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基缺失、
置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。(d)序列號27所示的鹼基序列、或序列號27所示的鹼基序列的包含 SNP(rsl799998)的部分序列。(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列。
(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基缺失、 置換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e) 的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另夕卜，具有上述(a) (c)中的任一鹼基序列的SNP(rs 1799998)檢測用多核苷 酸是能夠檢測SNP(rsl799998)的T等位基因的多核苷酸，具有上述(d) (f)中的任一 鹼基序列的SNP (rs 1799998)檢測用多核苷酸是能夠檢測SNP (rs 1799998)的C等位基因的
多核苷酸。另外，本發明中，「嚴格的條件下」例如可列舉出在5XSSC(150mM氯化 鈉、15mM檸檬酸鈉、pH7.4)+0.3% SDS(十二烷基硫酸鈉)中熱變性後，在65 °C下 雜交4 16小時，分別用常溫的2XSSC+0.1% SDS、及2XSSC各洗滌5分鐘，並用 0.05XSSC衝洗等。此外，工序(a)中使用的高血壓發病風險判定用多核苷酸中，除與檢測對象的 基因的鹼基序列互補或相同的序列以外，還能夠以不阻礙SNP分型的程度具有附加的序 列。作為該附加的序列，例如有限制酶識別序列、提供核酸標記的序列等。另外，為了 易於檢測和分析SNP分型結果，各高血壓發病風險判定用多核苷酸中能夠以不阻礙SNP 分型的程度添加標記物。該標記物只要是通常用於標記多核苷酸的化合物，則沒有特別 限定。作為該標記物，例如有放射性同位素、螢光物質、化學發光物質、生物素等低分 子化合物等。另外，由人個體採集的核酸、高血壓發病風險判定用多核苷酸等在SNP分型中 的用量沒有特別限定，能夠以通常的用量使用。另外，聚合酶等酶、核苷酸、反應用緩 衝液等沒有特別限定，能夠以通常的用量使用通常進行SNP分型時使用的物質。接下來，作為工序(b)，根據通過工序(a)獲得的分型結果來判定所述人個體的 高血壓發病風險。例如，高血壓發病風險可利用下述表2、8、14、20、25等的比值比 (oddsratio)來判定。此外，可以利用對本發明的高血壓的遺傳標記進行薈萃分析(Meta analysis)而得到的比值比來判定，可以利用對本發明的高血壓的遺傳標記進行隊列研究 而得到的相對危險度(風險比)來判定，也可以採用其他現有公知的統計方法並利用經統 計學處理的值來判定。具體而言，利用SNP(rslll05378)的分型結果時，可按照CC型、TC型、TT型 的順序判定風險由高到低。此外，SNP(rslll05378)為TT型時，可判定為低風險組；為 TC型或CC型時，可判定為高風險組。利用SNP(rs2681472)的分型結果時，可按照AA型、AG型、GG型的順序判 定風險由高到低。此外，SNP(rs2681472)為GG型或AG型時，可判定為低風險組；為 AA型時，可判定為高風險組。利用SNP(rsl401982)的分型結果時，可按照GG型、AG型、AA型的順序判 定風險由高到低。此外，SNP(rsl401982)為AA型時，可判定為低風險組；為AG型或 GG型時，可判定為高風險組。利用SNP(rslll05364)的分型結果時，可按照TT型、TG型、GG型的順序判 定風險由高到低。此外，SNP (rsl 1105364)為GG型時，可判定為低風險組；為TT型或 TG型時，可判定為高風險組。
另一方面，利用SNP(rsl799998)的分型結果時，可按照TT型、CT型、CC型 的順序判定風險由高到低。此外，SNP(rsl799998)為CC型或CT型時，可判定為低風 險組；為TT型時，可判定為高風險組。另外，組合本發明的遺傳標記時，與單獨時相比，能夠更準確地判定高血壓發 病風險。例如，SNP(rsl 1105378)為TT型，SNP (rsl799998)為CC型或CT型時，可判 定為低風險組；SNPCrsl 1105378)為TC型或CC型，SNP (rsl799998)為TT型時，可判 定為高風險組。另外，SNP (rs2681472)為GG型或AG型，SNP (rsl799998)為CC型或 CT型時，可判定為低風險組；SNP(rs2681472)為AA型，SNP (rsl799998)為TT型時， 可判定為高風險組。SNP(rsl401982)為AA型，SNP (rsl799998)為CC型或CT型時， 可判定為低風險組；SNP (rsl401982)為AG型或GG型，SNP (rsl799998)為TT型時， 可判定為高風險組。SNP(rsl 1105364)為GG型，SNP (rsl799998)為CC型或CT型時， 可判定為低風險組；SNP(rsl 1105364)為TT型或TG型，SNP (rsl799998)為TT型時， 也可判定為高風險組。此外，本發明的遺傳標記也能夠與其他高血壓的遺傳標記組合使用。組合 的遺傳標記沒有特別限定，也可以組合公知的高血壓的遺傳標記。特別優選與具有 如下特徵的高血壓的遺傳標記組合，所述高血壓的遺傳標記的特徵在於，其由與包含 AGT (encoding Angiotensinogen,血管緊張肽原)基因的 SNP 即 SNP (rs699)的 AGT 基因 的部分鹼基序列或全部鹼基序列相同或互補的序列構成。AGT基因是具有多個SNP的公知的高血壓易感基因。SNP(rs699)為M/T多
態性，由後述實施例28的結果可知，與正常血壓組相比較的情況下，高血壓組中，T等 位基因的頻率顯著高於M等位基因，作為高血壓的遺傳標記是有用的。因此，例如， SNP(rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險組；為TT型時，可判定為高風險組。 另外，本申請說明書中，M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr)。這裡，作為鹼基序 列，MM型為TT型所表現出的多態性，MT型為TC型所表現出的多態性，TT型為CC 型所表現出的多態性。SNP(rs699)的分型能夠與 SNP(rsl 1105378)、SNP(rs 1799998)同樣地使用公知 的SNP分型法來進行，優選的是，使用由與包含SNP (rs699)的AGT基因的部分鹼基序列 或全部鹼基序列相同或互補的序列構成的多核苷酸作為引物或探針，通過SNP分型法來 鑑定SNP。作為能夠作為用於檢測AGT基因上的SNP(rs699)的引物或探針使用的多核 苷酸，優選具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列的多核苷酸(以下稱為「SNP(rs699) 檢測用多核苷酸」。)。(a)序列號33所示的鹼基序列、或序列號33所示的鹼基序列的包含SNP (rS699) 的部分序列。(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列。(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。(d)序列號34所示的鹼基序列、或序列號34所示的鹼基序列的包含SNP (rs699) 的部分序列。
(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列。(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。另外，具有上述(a) (C)中的任一鹼基序列的SNP(rs699)檢測用多核苷酸為 能夠檢測SNP(rs699)的T等位基因的多核苷酸，具有上述(d) (f)中的任一鹼基序列 的SNP(rs699)檢測用多核苷酸為能夠檢測SNP(rs699)的M等位基因的多核苷酸。例如，根據SNP(rsl 1105378)和 SNP(rs699)的分型結果，SNP(rsl 1105378)為 TT型，SNP(rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險組；SNP (rsl 1105378)為TC 型或CC型，SNP(rs699)為TT型時，可判定為高風險組。另外，根據SNP (rs2681472) 和 SNP(rs699)的分型結果，SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型，SNP(rs699)為 MM 型或 MT型時，可判定為低風險組；SNP(rs2681472)為AA型，SNP (rs699)為TT型時，可判 定為高風險組。另外，根據SNP(rsl401982)和SNP(rs699)的分型結果，SNP (rsl401982) 為AA型，SNP(rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險組；SNP (rsl401982)為AG 型或GG型，SNP(rs699)為TT型時，可判定為高風險組。進而，根據SNP (rsl 1105364) 和 SNP(rs699)的分型結果，SNP(rsl 1105364)為 GG 型，SNP(rs699)為 MM 型或 MT 型時，可判定為低風險組；SNP(rslll05364)為TT型或TG型，SNP(rs699)為TT型 時，可判定為高風險組。此外，根據SNP (rsl 799998)和SNP (rs699)的分型結果， SNP (rsl799998)為CC型或CT型，SNP (rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險 組；SNP(rsl799998)為TT型，SNP (rs699)為TT型時，可判定為高風險組。進而，通過組合作為本發明的第一方案的高血壓的遺傳標記、作為本發明的第 五方案的高血壓的遺傳標記、以及由包含SNP(rs699)的AGT基因構成的高血壓的遺傳標 記這3種遺傳標記，從而能夠獲得可靠性非常高的風險評價。例如，SNP(rsl 1105378) 為 TT 型，SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型，SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型時，可 判定為低風險組；SNP (rsl 1105378)為TC型或CC型，SNP (rsl799998)為TT型， SNP(rs699)為TT型時，可判定為高風險組。另外，SNP (rs2681472)為GG型或AG型， SNP (rsl799998)為CC型或CT型，SNP(rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險 組；SNP(rs2681472)為 AA 型，SNP (rsl799998)為 TT 型，SNP (rs699)為 TT 型時，可判 定為高風險組。進而，SNP(rsl401982)為AA型，SNP (rsl799998)為CC型或CT型， SNP(rs699)為MM型或MT型時，可判定為低風險組；SNP (rsl401982)為AG型或GG 型，SNP (rsl799998)為TT型，SNP (rs699)為TT型時，可判定為高風險組。另外，組合這3種遺傳標記，根據高風險多態性的數目、低風險多態性的數目 等，也能夠進行更精細的風險評價。例如，高風險多態性的數目越多，則能夠判定高血 壓發病風險越高。另外，低風險多態性的數目越少，則能夠判定高血壓發病風險越高。 此外，高風險多態性的數目越少，則也能夠判定高血壓發病風險越低，低風險多態性的 數目越多，則也能夠判定高血壓發病風險越低。具體而言，以SNP(rsl 1105378)的 CC 型、SNP(rsl799998)的 TT 型、 SNP(rs699)的TT型分別作為高風險多態性，能夠按照這些高風險多態性的個數為3個、 2個、1個、0個的順序來判定風險由高到低。另外，以SNP(rs2681472)的AA型、SNP (rs 1799998)的TT型、SNP (rs699)的TT型分別為高風險多態性，能夠按照這些 高風險多態性的個數為3個、2個、1個、0個的順序來判定風險由高到低。進而，以 SNP(rsl401982)的 GG 型、SNP (rsl799998)的 TT 型、SNP(rs699)的 TT 型分別作為高
風險多態性，能夠按照這些高風險多態性的個數為3個、2個、1個、0個的順序來判定風 險由高到低。另外，以SNP(rsl 1105378)的 TT 型、SNP(rs 1799998)的 CC 型、SNP(rs699)的 MM型分別作為低風險多態性，能夠按照這些低風險多態性的個數為0個、1個、2個、 3個的順序來判定風險由高到低。另外，以SNP(rs2681472)的GG型、SNP(rs 1799998) 的CC型、SNP(rs699)的MM型分別作為低風險多態性，能夠按照這些低風險多態性的 個數為0個、1個、2個、3個的順序來判定風險由高到低。進而，以SNP(rsl401982)的 AA型、SNP(rs 1799998)的CC型、SNP (rs699)的MM型分別作為低風險多態性，也能 夠按照這些低風險多態性的個數為0個、1個、2個、3個的順序來判定風險由高到低。此外，例如，以SNP(rsl 1105378)為 TT 型，SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型，SNP(rs699)為MM型或MT型的情況作為第一組；以SNP(rsl 1105378)為TC型 或CC型、SNP (rsl799998)為CC型或CT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況， SNP (rsl 1105378)為 TT 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 TT 型的 情況，或者，SNP (rsl 1105378)為 TT 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699)為 MM 型或MT型的情況作為第二組；以SNP (rsl 1105378)為TC型或CC型、SNP (rsl799998) 為CC型或CT型、SNP(rs699)為TT型的情況，SNP(rsl 1105378)為TC型或CC型、 SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型的情況，或者 SNP (rsl 1105378) 為TT型、SNP (rsl799998)為TT型、SNP (rs699)為TT型的情況作為第三組；以 SNP (rsl 1105378)為 TC 型或 CC 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP(rs699)為 TT 型的情 況作為第四組；在所述工序(b)中，能夠按照所述第四組、所述第三組、所述第二組、 所述第一組的順序判定風險由高到低。另外，以SNP(rs2681472)為 GG 型或 AG 型、SNP(rsl799998)為 CC 型 或CT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第一組；以SNP (rs2681472)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型的情況， SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699) 為TT型的情況，或者SNP (rs2681472)為GG型或AG型、SNP (rsl799998)為TT型、 SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第二組；以SNP (rs2681472)為AA型、 SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699)為 TT 型的情況，SNP(rs2681472) 為AA型、SNP (rsl799998)為TT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況，或者 SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP(rs699)為 TT 型的 情況作為第三組；以 SNP(rs2681472)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699) 為TT型的情況作為第四組；所述工序(b)中，能夠按照所述第四組、所述第三組、所述 第二組、所述第一組的順序判定風險由高到低。進而，以SNP(rsl401982)為 AA 型、SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型、 SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第一組；以SNP (rsl401982)為AG型或 GG 型、SNP (rs 1799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型的情況，SNP(rsl401982)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699)為 TT 型的 情況，或者 SNP(rsl401982)為 AA 型、SNP (rs 1799998)為 TT 型、SNP (rs699)為 MM 型或MT型的情況作為第二組；以SNP (rsl401982)為AG型或GG型、SNP (rsl799998) 為CC型或CT型、SNP(rs699)為TT型的情況，SNP(rsl401982)為AG型或GG 型、SNP(rs 1799998)為TT型、SNP(rs699)為MM型或MT型的情況、或者以 SNP(rsl401982)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP(rs699)為 TT 型的情況作為 第三組；以 SNP (rsl401982)為 AG 型或 GG 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699) 為TT型的情況作為第四組；在所述工序(b)中，也能夠按照所述第四組、所述第三組、 所述第二組、所述第一組的順序判定風險由高到低。此外，工序(b)中的高血壓發病風險的判定也可以組合通過工序(a)得到的分型 結果、和除遺傳標記以外的1個以上高血壓的危險因素來進行。作為除遺傳標記以外的 危險因素，例如有人個體的性別、年齡、BMI值、腦血管疾病的有無、心臟病的有無、 吸菸的有無、飲酒量、總膽固醇值、HDL膽固醇值、中性脂肪值、空腹時血糖值等。利用微陣列法來進行工序(a)中的SNP分型時，優選採用作為本發明的第八方 案的高血壓發病風險判定用微陣列，即優選的是，在固相載體上固定有SNP(rslll05378) 檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸、SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、 SNPCrsl 1105364)檢測用多核苷酸和SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸中的至少1種。作 為本發明的第八方案的高血壓發病風險判定用微陣列，優選為固定有SNP(rsl 1105378) 檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸和SNP (rsl401982)檢測用多核 苷酸中的至少1種以及SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸的微陣列；更優選固定有 SNP(rsl 1105378)檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸、SNP(rsl401982) 檢測用多核苷酸和SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸中的任一者的微陣列。另外，作為本發明的第八方案的高血壓發病風險判定用微陣列，進一步優 選在固相載體上固定有SNP(rslll05378)檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用 多核苷酸、SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、SNP(rslll05364)檢測用多核苷酸、 SNP(rs 1799998)檢測用多核苷酸和SNP(rs699)檢測用多核苷酸中的至少1種的微陣列； 更優選固定有SNPCrsl 1105378)檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸、 SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸和SNP (rsl799998)檢測用多核苷酸中的至少1種以及 SNP(rs699)檢測用多核苷酸的微陣列。進一步優選固定有SNP(rsl 1105378)檢測用多 核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸和SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸中的至少 1種、以及SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸和SNP(rs699)檢測用多核苷酸的微陣列； 特別優選固定有SNP(rslll05378)檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸、 SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸和SNP(rs699)檢測 用多核苷酸中的任一者的微陣列。另外，本發明中，微陣列是指在固相載體上按照能夠確定位置的方式固定有作 為探針的多核苷酸的檢測裝置，固定化有探針(多核苷酸)的載體自身可以為分散性，只 要是能夠按照檢測時能確定位置的方式固定在2維的固相載體上的狀態即可。另外，通過將用於工序(a)中的SNP分型的高血壓發病風險判定用多核苷 酸等製成試劑盒，從而能夠更簡便地進行工序(a)的SNP分型。例如，作為用於選自由 SNP(rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)、SNP (rsl 1105364) 及SNP (rsl799998)所組成的組中的1種以上SNP的分型的SNP分型試劑盒，優選 像作為本發明的第九方案的高血壓發病風險判定用SNP分型試劑盒那樣包含選自由 SNP (rsl 1105378)檢測用多核苷酸、SNP (rs2681472)檢測用多核苷酸、SNP (rsl401982) 檢測用多核苷酸、SNP(rsl 1105364)檢測用多核苷酸、SNP(rsl799998)檢測用多核 苷酸及在固相載體上固定有SNP(rslll05378)檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢 測用多核苷酸、SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、SNP (rsl 1105364)檢測用多核苷 酸和SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸中的至少1種的微陣列所組成的組中的1種以 上。此外，作為在選自由 SNP(rsl 1105378)、SNP(rs2681472)、SNP(rsl401982)、 及SNP (rsl799998)所組成的組中的1種以上SNP和SNP (rs699)的分型中使用的SNP 分型試劑盒，優選像作為本發明的第十方案的SNP分型試劑盒那樣，包含選自由下 述多核苷酸和微陣列所組成的組中的1個以上SNP(rsl 1105378)檢測用多核苷酸， SNP (rs2681472)檢測用多核苷酸，SNP (rsl401982)檢測用多核苷酸，SNP (rsl 1105364) 檢測用多核苷酸，SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸，SNP(rs699)檢測用多核苷酸， 在固相載體上固定有SNP (rsl 1105378)檢測用多核苷酸、SNP (rs2681472)檢測用 多核苷酸、SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、SNP(rslll05364)檢測用多核苷酸、 SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸的微陣列，以及在固相載體上固定有SNP(rsl 1105378) 檢測用多核苷酸、SNP(rs2681472)檢測用多核苷酸、SNP(rsl401982)檢測用多核苷酸、 SNP(rsl 1105364)檢測用多核苷酸、SNP(rsl799998)檢測用多核苷酸以及SNP(rs699)檢 測用多核苷酸的微陣列。此外，使用特徵在於包含用IoxP序列夾持ATP2B1基因的鹼基序列的全部或 一部分而成的鹼基序列的ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組載體，能夠制 作ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組小動物。特別優選使用包含下述鹼基 序列的ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組載體，來製作ATP2B1基因局部 缺失小動物製作用IoxP重組小動物，所述鹼基序列中，包含選自由SNP (rsl 1105378)、 SNP(rs2681472)、SNP(1401982)、SNP(rsl 1105364)所組成的組中的 1 個以上 SNP 的 ATP2B1基因區域被IoxP序列夾持。進而，通過使該ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組小動物與以適當 的啟動子作為Cre重組酶的表達啟動子的選擇性Cre表達轉基因小動物交配，從而能夠 製作ATP2B1基因局部缺失小動物。作為Cre重組酶的表達啟動子，例如優選為選自由 Tie-2啟動子、Tie-I啟動子、Flk-I啟動子、SM22啟動子、SM-MHC啟動子、Wtl啟動 子、PO啟動子、Pax3啟動子、α MHC啟動子、Nkx2.5啟動子、Tbxl啟動子、四環素誘 導啟動子(tetracycline-inducible promoter)及CMV增強子-雞β-肌動蛋白啟動子(CMV enhancer-chicken β -actin promoter)所組成的組中的一個啟動子。這樣製作的ATP2B1基因局部缺失小動物優選呈現出高血壓症狀。另外，該 ATP2B1基因局部缺失小動物能夠優選作為用於篩選鈣拮抗藥的試驗動物使用，也能夠作 為具有ATP2B1基因的基因多態性及表達異常的疾病的模型小動物使用。
25實施例下面示出實施例對本發明進行更詳細的說明，但本發明並不限定於以下的實施 例。[實施例1]用於SNP分型的核酸的調製以8924個一般地區居民作為對象，為了調查SNP的基因型與高血壓的關係而進 行了回顧性隊列研究。這些對象者從橫浜(1811人)、滋賀(3730人)、愛媛(3383人)召集。首先，使用作為DNA 提取試劑盒的 QIAamp DNA Blood Kit (QIAGEN GmbH
制)，從由對象者採集的末梢血中的白細胞提取各人的基因組DNA。將所得基因組DNA 用 GenomiPhi DNAAmplification Kit (GE HEALTHCARE JAPAN CORPORATION 制)進行 擴增。將擴增獲得的DNA用bufferAE(QIAGEN GmbH制)稀釋至50倍，供於SNP分型。[實施例2]ATP2B1基因上的SNP(rsl1105378)的分型以各對象者的完成擴增後的基因組DNA作為模板，通過TaqMan探針法對 ATP2B1基因上的SNPCrsl 1105378)進行分析。具體而言，在實施例1中得到的DNA溶 液 2.0 μ L 中添力口 2.5 μ L 的 TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems Inc.制)、 0.05 μ L對rslll05378的各多態性特異性的TaqMan Pre-DesignedSNP基因分型分析(Assay ID ； C—32174448_10、AppliedBiosystems Inc.制)、0.45 μ L 的蒸餾水，調製反應溶液 後，供於利用PCR法的延伸反應。延伸反應中，在52°C下加熱2分鐘，接著在95°C下加 熱10分鐘後，重複60次下述過程在95°C下加熱15秒鐘、在60°C下加熱1分鐘。延 伸反應後，用7900HT Fast實時PCR系統(Applied Biosystems Inc.制)測定螢光強度，從 而對基因多態性進行分型。[實施例3]rsl1105378多態性與高血壓的相關性以一般地區居民為對象，通過相關分析(關聯方法(association method))對實施 例2中鑑定的SNP的基因型與高血壓的相關性進行分析。[表1]
年齡(歲)57±14性別(男/女)4616/4308體重指數(kg/m2)23±3收縮期血壓(mmHg)132±21舒張期血壓(mmHg)79±12降壓藥(有/無)1684/7240高血壓(有/無)3828/5096總膽固醇(mg/dL)202 ±3權利要求
1.一種高血壓的遺傳標記，其特徵在於，其由與包含ATP2B1基因的SNP (單核苷酸 多態性)的ATP2B1基因的部分鹼基序列或全部鹼基序列相同或互補的序列構成，所述 SNP 為選自由 SNP(rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、SNP (rsl401982)及 SNP (rsl 1105364) 所組成的組中的1種以上。
2.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為選自由 SNP(rsl 1105378)及SNP(rs2681472)所組成的組中的1種以上。
3.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為選自由 SNP(rsl 1105378)及SNP(rsl401982)所組成的組中的1種以上。
4.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為選自由 SNP(rs2681472)及SNP(rsl401982)所組成的組中的1種以上。
5.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為 SNP (rsl 1105378)。
6.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為 SNP (rs2681472)。
7.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為 SNP(rsl401982)。
8.根據權利要求1所述的高血壓的遺傳標記，其特徵在於，所述SNP為 SNP (rsl 1105364)。
9.一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在於，其具有下述的(a) (f)中的 任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rslll05378)的引物或探針使用，(a)序列號5所示的鹼基序列、或序列號5所示的鹼基序列的包含SNP(rsl1105378) 的部分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl 1105378)以外的1 數個鹼基缺失、置 換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的 鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號6所示的鹼基序列、或序列號6所示的鹼基序列的包含SNP(rslll05378) 的部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl1105378)以外的1 數個鹼基缺失、置 換或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的 鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
10.—種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在於，其具有下述的(a) (f)中的 任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rs2681472)的引物或探針使用，(a)序列號12所示的鹼基序列、或序列號12所示的鹼基序列的包含SNP(rs2681472) 的部分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號13所示的鹼基序列、或序列號13所示的鹼基序列的包含SNP(rs2681472) 的部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs2681472)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
11.一種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在於，其具有下述的(a) (f)中的 任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rsl401982)的引物或探針使用，(a)序列號19所示的鹼基序列、或序列號19所示的鹼基序列的包含SNP(rsl401982) 的部分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號20所示的鹼基序列、或序列號20所示的鹼基序列的包含SNP(rsl401982) 的部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl401982)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
12.—種高血壓的遺傳標記，其特徵在於，其由與包含CYP11B2基因的SNP即 SNP(rsl799998)的CYPl 1B2基因的部分鹼基序列或全部鹼基序列相同或互補的鹼基序列 構成。
13.—種高血壓發病風險判定用多核苷酸，其特徵在於，其具有下述的(a) (f)中的 任一鹼基序列，且能夠作為用於檢測SNP(rsl799998)的引物或探針使用，(a)序列號26所示的鹼基序列、或序列號26所示的鹼基序列的包含SNP(rsl799998) 的部分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號27所示的鹼基序列、或序列號27所示的鹼基序列的包含SNP(rsl799998) 的部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rsl799998)以外的1 數個鹼基缺失、置換 或添加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼 基序列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
14.一種高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，該方法用遺傳標記來判定高血壓發病風險，其具有以下工序(a)對由人個體採集的核酸的、選自由SNP(rsl 1105378)、SNP (rs2681472)、 SNP(rsl401982)、SNP(rsl 1105364)及 SNP(rsl799998)所組成的組中的 1 種以上進行分型的工序，(b)根據通過所述工序(a)得到的分型結果來判定所述人個體的高血壓發病風險的工序。
15.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(a)是 進一步對AGT基因的SNP即SNP(rs699)進行分型的工序。
16.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，按照SNP(rsl 1105378)為CC型、TC型、TT型的順序判定風險由高到低。
17.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，按照SNP(rs2681472)為AA型、AG型、GG型的順序判定風險由高到低。
18.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，按照SNP(rsl401982)為GG型、AG型、AA型的順序判定風險由高到低。
19.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，按照SNP(rsl 1105364)為TT型、TG型、GG型的順序判定風險由高到低。
20.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl 1105378)為TT型時，判定為低風險組；為TC型或CC型時，判定為高風 險組。
21.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rs2681472)為GG型或AG型時，判定為低風險組；為AA型時，判定為高風險組。
22.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl401982)為AA型時，判定為低風險組；為AG型或GG型時，判定為高風險組。
23.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl 1105364)為GG型時，判定為低風險組；為TT型或TG型時，判定為高風險組。
24.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl799998)為CC型或CT型時，判定為低風險組；為TT型時，判定為高風險組。
25.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rs699)為MM型或MT型(M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定 為低風險組；為TT型時，判定為高風險組。
26.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP (rsl 1105378)為TT型，SNP(rsl799998)為CC型或CT型時，判定為低風險組， SNP (rsl 1105378)為TC型或CC型，SNP (rsl799998)為TT型時，判定為高風險組。
27.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP (rs2681472)為GG型或AG型，SNP (rsl799998)為CC型或CT型時，判定為低風險組，SNP(rs2681472)為AA型，SNP (rsl799998)為TT型時，判定為高風險組。
28.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl401982)為AA型，SNP(rsl799998)為CC型或CT型時，判定為低風險組， SNP(rsl401982)為AG型或GG型，SNP (rs 1799998)為TT型時，判定為高風險組。
29.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl 1105378)為 TT 型，SNP (rs699)為 MM 型或MT 型(M 為蛋氨酸(Met)，T 表 示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組，SNPCrsl 1105378)為TC型或CC型，SNP(rs699) 為TT型時，判定為高風險組。
30.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP (rs2681472)為GG型或AG型，SNP (rs699)為MM型或MT型(M為蛋氨 酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組，SNP (rs2681472)為AA型， SNP (rs699)為TT型時，判定為高風險組。
31.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl401982)為 AA 型，SNP(rs699)為 MM 型或 MT 型(M 為蛋氨酸(Met)，T 表 示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組，SNP (rsl401982)為AG型或GG型，SNP (rs699) 為TT型時，判定為高風險組。
32.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl799998)為CC型或CT型，SNP(rs699)為MM型或MT型(M為蛋氨 酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組，SNP (rsl799998)為TT型， SNP(rs699)為TT型時，判定為高風險組。
33.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl 1105378)為 TT 型，SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型，SNP(rs699)為 MM型或MT型(M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組， SNP(rsl 1105378)為 TC 型或 CC 型，SNP (rsl799998)為 TT 型，SNP (rs699)為 TT 型時， 判定為高風險組。
34.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rs2681472)為 GG 型或 AG 型，SNP (rs 1799998)為 CC 型或 CT 型，SNP (rs699) 為MM型或MT型(Μ為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組， SNP(rs2681472)為 AA 型，SNP (rsl799998)為 TT 型，SNP (rs699)為 TT 型時，判定為高風險組。
35.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，所述工序(b) 中，SNP(rsl401982)為 AA 型，SNP(rs 1799998)為 C C 型或 CT 型，SNP(rs699)為 MM型或MT型(M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))時，判定為低風險組， SNP(rsl401982)為 AG 型或 GG 型，SNP (rsl799998)為 TT 型，SNP (rs699)為 TT 型時，判定為高風險組。
36.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP(rsl 1105378)的 CC 型、SNP (rsl799998)的 TT 型、SNP (rs699)的 TT 型(T 表示蘇 氨酸(Thr))分別作為高風險多態性，所述工序(b)中，按照所述高風險多態性的個數為 3個、2個、1個、0個的順序判定風險由高到低。
37.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP (rs2681472)的 AA 型、SNP (rs 1799998)的 TT 型、SNP(rs699)的 TT 型(T 表示蘇 氨酸(Thr))分別作為高風險多態性，所述工序(b)中，按照所述高風險多態性的個數為 3個、2個、1個、0個的順序判定風險由高到低。
38.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP(rsl401982)的 GG 型、SNP(rsl799998)的 TT 型、SNP(rs699)的 TT 型(T 表示蘇 氨酸(Thr))分別作為高風險多態性，所述工序(b)中，按照所述高風險多態性的個數為 3個、2個、1個、0個的順序判定風險由高到低。
39.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP(rsl 1105378)的 TT 型、SNP(rs 1799998)的 CC 型、SNP(rs699)的 MM 型(M 表示 蛋氨酸(Met))分別作為低風險多態性，所述工序(b)中，按照所述低風險多態性的個數 為0個、1個、2個、3個的順序判定風險由高到低。
40.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP (rs2681472)的 GG 型、SNP (rs 1799998)的 CC 型、SNP (rs699)的 MM 型(M 表示蛋 氨酸(Met))分別作為低風險多態性，所述工序(b)中，按照所述低風險多態性的個數為 0個、1個、2個、3個的順序判定風險由高到低。
41.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP(rsl401982)的 AA 型、SNP (rsl799998)的 CC 型、SNP (rs699)的 MM 型(M 表示蛋 氨酸(Met))分別作為低風險多態性，所述工序(b)中，按照所述低風險多態性的個數為 0個、1個、2個、3個的順序判定風險由高到低。
42.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP(rsl 1105378)為 TT 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 MM 型或 MT型(M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))的情況作為第一組，以 SNP(rsl 1105378)為 TC 型或 CC 型、SNP(rs 1799998)為 CC 型或 CT 型、 SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型的情況，SNP (rsl 1105378)為 TT 型、SNP (rs 1799998) 為CC型或CT型、SNP(rs699)為TT型的情況，或者，SNP(rsl 1105378)為TT型、 SNP (rsl799998)為TT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第二組，以 SNP(rsl 1105378)為 TC 型或 CC 型、SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型、 SNP(rs699)為 TT 型的情況，SNP(rsl 1105378)為 TC 型或 CC 型、SNP(rsl799998) 為TT型、SNP(rs699)為MM型或MT型的情況，或SNP(rsl 1105378)為TT型、 SNP(rsl799998)為TT型、SNP(rs699)為TT型的情況作為第三組，以 SNP(rslll05378)為 TC 型或 CC 型、SNP(rsl799998)為 TT 型、SNP(rs699)為 TT型的情況作為第四組，所述工序(b)中，按照所述第四組、所述第三組、所述第二組、所述第一組的順序 判定風險由高到低。
43.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699)為 MM型或MT型(M為蛋氨酸(Met)，T表示蘇氨酸(Thr))的情況作為第一組，以 SNP(rs2681472)為 AA型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 MM型或 MT 型的情況，SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型，SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699)為 TT 型的情況，或 SNP (rs2681472)為 GG 型或 AG 型、SNP (rs 1799998) 為TT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第二組，以 SNP(rs2681472)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 TT 型的情況，SNP(rs2681472)為 AA 型、SNP(rsl799998)為 TT 型、SNP(rs699)為 MM 型或MT型的情況，或SNP (rs2681472)為GG型或AG型、SNP (rsl799998)為TT型、 SNP(rs699)為TT型的情況作為第三組，以 SNP(rs2681472)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699)為 TT 型的情 況作為第四組，所述工序(b)中，按照所述第四組、所述第三組、所述第二組、所述第一組的順序 判定風險由高到低。
44.根據權利要求15所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，以 SNP (rsl401982)為 AA 型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP (rs699)為 MM 型或 MT型(M為蛋氨酸(Met)、T表示蘇氨酸(Thr))的情況作為第一組，以 SNP(rsl401982)為 AG 型或 GG 型、SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型、 SNP (rs699)為 MM 型或 MT 型的情況，SNP (rsl401982)為 AA型、SNP (rsl799998)為 CC 型或 CT 型、SNP(rs699)為 TT 型的情況，或 SNP (rsl401982)為 AA 型、SNP (rsl799998) 為TT型、SNP (rs699)為MM型或MT型的情況作為第二組，以 SNP(rsl401982)為 AG 型或 GG 型、SNP(rsl799998)為 CC 型或 CT 型、 SNP(rs699)為 TT 型的情況，SNP(rsl401982)為 AG 型或 GG 型、SNP(rsl799998) 為TT型、SNP(rs699)為MM型或MT型的情況，或SNP(rsl401982)為AA型、 SNP(rs 1799998)為TT型、SNP (rs699)為TT型的情況作為第三組，以 SNP (rsl401982)為 AG 型或 GG 型、SNP (rsl799998)為 TT 型、SNP (rs699)為 TT 型的情況作為第四組，所述工序(b)中，按照所述第四組、所述第三組、所述第二組、所述第一組的順序 判定風險由高到低。
45.根據權利要求14所述的高血壓發病風險判定方法，其特徵在於，其通過組合選 自由所述人個體的性別、年齡、BMI值、腦血管疾病的有無、心臟病的有無、吸菸的有 無、飲酒量、總膽固醇值、HDL膽固醇值、中性脂肪值、空腹時血糖值所組成的組中的 1種以上環境因素、和通過所述工序(a)得到的分型結果來進行。
46.—種高血壓發病風險判定用微陣列，其特徵在於，在固相載體上固定有選自由 權利要求9、10、11及13所述的高血壓發病風險判定用多核苷酸所組成的組中的1種以 上。
47.根據權利要求46所述的高血壓發病風險判定用微陣列，其特徵在於，進而在 所述固相載體上固定有具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列、且能夠作為用於檢測 SNP(rs699)的引物或探針使用的多核苷酸，(a)序列號33所示的鹼基序列、或序列號33所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的部 分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述ω或(b)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添 加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序 列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號34所示的鹼基序列、或序列號34所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的 部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添 加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼基序 列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
48.—種高血壓發病風險判定用SNP分型試劑盒，其特徵在於，其包含選自由權利要 求9所述的高血壓發病風險判定用多核苷酸、權利要求10所述的高血壓發病風險判定用 多核苷酸、權利要求11所述的高血壓發病風險判定用多核苷酸、權利要求13所述的高血 壓發病風險判定用多核苷酸及權利要求46所述的高血壓發病風險判定用微陣列所組成的 組中的1種以上。
49.一種高血壓發病風險判定用SNP分型試劑盒，其特徵在於，其包含選自由權利要 求9所述的高血壓發病風險判定用多核苷酸、權利要求10所述的高血壓發病風險判定用 多核苷酸、權利要求11所述的高血壓發病風險判定用多核苷酸、權利要求13所述的高血 壓發病風險判定用多核苷酸、權利要求46所述的高血壓發病風險判定用微陣列、權利要 求47所述的高血壓發病風險判定用微陣列、及具有下述的(a) (f)中的任一鹼基序列且 能夠作為用於檢測SNP(rs699)的引物及探針使用的多核苷酸所組成的組中的1種以上，(a)序列號33所示的鹼基序列、或序列號33所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的部 分序列，(b)與所述(a)的鹼基序列互補的鹼基序列，(C)所述(a)或(b)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添 加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(a)或(b)的鹼基序 列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列，(d)序列號34所示的鹼基序列、或序列號34所示的鹼基序列的包含SNP(rs699)的 部分序列，(e)與所述(d)的鹼基序列互補的鹼基序列，(f)所述(d)或(e)的鹼基序列中除SNP(rs699)以外的1 數個鹼基缺失、置換或添 加而得到的鹼基序列，且由該鹼基序列構成的多核苷酸能夠與由所述(d)或(e)的鹼基序 列構成的多核苷酸在嚴格的條件下雜交的鹼基序列。
50.—種ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組載體，其特徵在於，其包含用 IoxP序列夾持ATP2B1基因的鹼基序列的全部或一部分而成的鹼基序列。
51.—種ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組小動物，其特徵在於，其通過 使用權利要求50所述的載體製作得到。
52.—種ATP2B1基因局部缺失小動物，其特徵在於，其通過使選擇性Cre表達轉基 因小動物與權利要求48所述的ATP2B1基因局部缺失小動物製作用IoxP重組小動物交配 而製得，所述選擇性Cre表達轉基因小動物以選自由下述啟動子所組成的組中的一種啟動子作為Cre重組酶的表達啟動子Tie-2啟動子、Tie-I啟動子、Flk-I啟動子、SM22啟動 子、SM-MHC啟動子、Wtl啟動子、PO啟動子、Pax3啟動子、α MHC啟動子、Nkx2.5 啟動子、Tbxl啟動子、四環素誘導啟動子及CMV增強子-雞β-肌動蛋白啟動子。
53.根據權利要求52所述的ΑΤΡ2Β1基因局部缺失小動物，其特徵在於，其呈現出高 血壓症狀。
54.—種ΑΤΡ2Β1基因的局部缺失小動物的使用方法，其特徵在於，使用權利要求53 所述的ΑΤΡ2Β1基因局部缺失小動物作為用於篩選鈣拮抗藥的試驗動物。
55.—種ΑΤΡ2Β1基因的局部缺失小動物的使用方法，其特徵在於，使用權利要求53 所述的ΑΤΡ2Β1基因的局部缺失小動物作為具有ΑΤΡ2Β1基因的基因多態性及表達異常的 疾病的模型小動物。
56.根據權利要求55所述的ΑΤΡ2Β1基因的局部缺失小動物的使用方法，其特徵在 於，所述基因多態性為選自由 SNP(rslll05378)、SNP(rs2681472)、SNP(rsl401982)、 及SNP(rsl 1105364)所組成的組中的1種以上。
全文摘要
本發明提供包含能夠用於判定高血壓發病的風險的SNP的遺傳標記、能夠作為用於檢測該遺傳標記的引物或探針使用的多核苷酸、使用該SNP的高血壓發病風險判定方法、用於該SNP的分型的微陣列及用於該高血壓發病風險判定方法的試劑盒。
文檔編號C12N15/09GK102016031SQ20098011406
公開日2011年4月13日 申請日期2009年2月20日 優先權日2008年2月21日
發明者三木哲郎, 上島弘嗣, 中村保幸, 名倉潤, 喜多義邦, 小原克彥, 平和伸仁, 梅村敏, 田原康玄 申請人:公立大學法人橫濱市立大學, 國立大學法人滋賀醫科大學, 國立大學法人愛媛大學