一種藥物組合物在製備增強胰島素敏感性藥物中的應用的製作方法
2023-12-10 03:48:26 4
專利名稱：一種藥物組合物在製備增強胰島素敏感性藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種藥物組合物在製備增強胰島素敏感性藥物中的應用。
背景技術：
胰島素抵抗(insulin resistance，IR)指一定量的胰島素產生生物學效應低於預期正常水平，即胰島素在促進葡萄糖攝取和利用方面受損，機體代償性分泌過多的胰島素，形成高胰島素血症，這樣才能使血糖維持在正常水平。其不僅是2型糖尿病的重要特徵，而且也是多種疾病(包括高血壓、脂代謝異常相關疾病、動脈粥樣硬化相關疾病等)的共同發病基礎，所以十多年來一直是醫學領域的一個研究熱點。
對於2型糖尿病的治療也已由原來的單純的降低血糖，轉變為增加胰島素的敏感性，從而改善胰島素抵抗而達到治療糖尿病的目的。
對於IR的治療，除了已證實的改變不良的生活習慣、戒菸、控制總熱量攝入、降低體重及適當的體育鍛鍊外。藥物治療也非常重要。目前已證實的具有增加胰島素敏感性治療胰島素抵抗的藥物為列酮類藥物，其商品名為「文迪雅」。
目前，對於中藥增加胰島素敏感性治療胰島素抵抗還沒有報導。
發明內容
本發明主要目的在於提供了一種中藥組合物在製備增強胰島素敏感性藥物中的應用。
本發明另一目的在於提供了這種中藥組合物在製備改善由於胰島素功能降低所引起的胰島素抵抗的藥物中的應用。
本發明藥物組合物的處方的組成按重量配比如下天花粉5～40份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份。
優選為天花粉9份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅9份。
更好地，本發明在上述藥物基礎上還可以加入山楂。這是因為山楂酸甘化陰，既可以防辛散太過傷陰，又可苦酸制甜。配伍開鬱清熱具有很好的療效。藥物各組分用量為天花粉10～30份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份、山楂3～15份。
優選為天花粉30份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅15份、山楂9份。
本發明藥物可以採用中藥製劑的常規方法製備成任何常規的製劑。例如將上述原料藥研成散劑衝服，或製成片劑或膠囊口服，或者製成注射劑等。但是這些不能用於限制本發明的保護範圍。
優選地，本發明藥物活性組分的製備方法如下1.取上述重量配比的天花粉10～30份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份；2.加入4倍量的乙醇，回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；3.加入輔料製成任意種藥劑學上可以接受的劑型。
如果與山楂進行組合，則在步驟1的原料藥中加入即可，其餘方法不變。步驟2中乙醇的含量為70～90％，最佳為80％；回流提取溫度為50～80℃，最佳為60℃；回收乙醇的溫度為60-80℃，最佳為70℃；真空乾燥溫度為70-90℃，最佳為80℃。步驟3中本發明的活性組分可以加入製備不同劑型時所需的各種常規輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規的方法製備成任何一種常用的口服或注射製劑。
以下以胰島素抵抗肝胃鬱熱理論為指導，用高脂飼料誘導的胰島素抵抗大鼠作為模型，以胰島素增敏劑羅格列酮作為對照，用高胰島素-正葡萄糖鉗夾技術評價本發明藥物組合物的顆粒劑型(簡稱「降糖顆粒」)對早期胰島素抵抗的改善作用，同時觀察其對肝臟和肌肉組織內甘油三酯水平的影響，從組織細胞水平探討其改善胰島素抵抗的作用機理。
正糖鉗實驗和胰島素耐量試驗的研究結果揭示降糖顆粒對胰島素抵抗有較好的改善作用，同時也能減輕高胰島素血症以及胰島素抵抗所導致的纖溶系統的異常，其對腹腔脂肪的大量積聚的改善和對肝臟、肌肉組織中甘油三酯水平的降低可能是其治療胰島素抵抗的一個重要的作用機理。
一、材料與方法1實驗動物Wistar大鼠，雄性，4-5周齡，體重140g左右，由中國醫學科學院實驗動物研究所提供，飼養於中國醫學科學院實驗動物研究所清潔級動物房。
2實驗試劑與藥物甘油三脂測定試劑盒，購自北京北化康泰臨床試劑有限司；游離脂肪酸測定試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；大鼠胰島素測定試劑盒，購自Linco公司。
降糖顆粒，由天津天士力製藥股份有限公司提供；文迪雅片，由美國葛蘭素史克(中國)投資有限公司提供。
3實驗用儀器Perfusor compact S型微量注射泵購自德國貝朗醫療有限公司；The MEYERN-EVAP Analytical Evaporator(氮氣揮幹器)；LG 721分光光度計，山東高密電子儀器廠出品；DG3022A型酶聯免疫檢測儀，華東電子管廠製造；SureStep Plus快速血糖分析儀，美國強生公司出品；4高脂飼料誘導的胰島素抵抗早期大鼠模型的建立和實驗分組Wistar雄性大鼠50隻適應性餵養2天後(2隻/籠)，模型組50隻給予高脂飼料(每100克飼料總熱量為1959.3千焦，其中脂肪提供熱量佔52％，蛋白質佔15％，碳水化合物佔33％)，對照組繼續給予普通飼料(每100克飼料總熱量為1557.9千焦，其中脂肪提供熱量佔12％，蛋白質佔19％，碳水化合物佔69％)，餵養11周後，模型組再隨機分為4組，即①模型組10隻(給予普通飼料)，②飲食控制組10隻(普通飼料，模型組攝食量的80％)，③文迪雅組10隻(3mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)，④中藥降糖顆粒組10隻(18g生藥/kg體重/日灌胃，普通飼料)。治療各組連續給藥3周，正常對照組、模型組和飲食控制組分別以相應量的生理鹽水連續灌胃三周。
表1飼料基本組成
注脂肪主要為煉豬油5觀察指標及測定方法5.1一般情況實驗開始後，每周測體重一次(早8時)，比較體重變化。每周記錄一次24小時攝食量。
5.2生化指標血糖大鼠尾靜脈取血測定血糖，使用SureStep Plus快速血糖分析儀(美國強生公司出品)測隔夜禁食12小時空腹血糖。
肝功、血脂、基礎胰島素、血清游離脂肪酸三周灌胃結束，隔夜禁食12小時，次晨大鼠眼眶取血3ml，離心取血清，-70℃保存，備測ALT、AST、TG、CHO、LDL-C、HDL-C、基礎胰島素、血清游離脂肪酸，其中轉氨酶及血脂四項用酶法在日立自動生化分析儀上進行；胰島素用放免法測定；游離脂肪酸採用銅試劑顯色比色法。
t-PA及PAI活性灌胃時，隔夜禁食，取大鼠尾靜脈血0.2ml，枸櫞酸鈉抗凝，離心取血漿，-70℃保存，備測t-PA及PAI，採用酶聯免疫法進行t-PA及PAI活性的測定。
5.3胰島素耐量試驗眼眶取血後2-3天，大鼠隔夜禁食12小時，測定空腹血糖後，皮下注射胰島素0.4U/kg，分別於40，90，120min後尾靜脈取血測血糖，記錄數據，描繪血糖下降曲線。
5.4高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗大鼠胰島素耐量試驗後，每組取一隻大鼠開始分批隔夜禁食10小時，稱體重，尾靜脈取血測基礎血糖值，然後以10％水合氯醛(0.4ml/kg)進行腹腔麻醉，麻醉後測大鼠體長、尾長，計算Lee’s指數。按照周水平[108]的方法，分離大鼠右側頸總動脈和左側頸內或頸外靜脈，75IU/ml肝素抗凝，進行插管(美國產硬膜外麻醉用矽膠導管，內徑0.6mm，外徑1mm)，動脈插管以取血測血糖及穩態胰島素，靜脈插管以接微量注射泵以輸注胰島素及葡萄糖。插管完畢後，將大鼠靜置30分鐘後開始試驗，開始時先恆定輸注短效豬胰島素(輸注速率為8mu/kg·min-1，臨用時胰島素用10.5％牛血清白蛋白稀釋)，每5或10分鐘從左頸動脈取血測血糖1次，當血糖下降至基礎血糖+1.0mmol/L時，開始小量輸注20％葡萄糖溶液，並根據血糖水平不斷調整葡萄糖輸注率，使血糖逐漸達到穩態。將所有大鼠血糖都鉗夾在基礎血糖±0.2mmol/L水平，記錄穩態下連續30分鐘內的葡萄糖輸注率，取均值。試驗結束時右頸總動脈放血測穩態胰島素，留取1克肝臟組織和紅色腓腸肌組織，迅速液氮冷凍，-70℃保存，備測組織甘油三脂含量，同時留取胰腺、肝臟、腎周脂肪組織，10％福馬林溶液固定，用於一般形態學檢查。
5.5組織甘油三脂測定室溫下解凍冰凍保存的肝臟或骨骼肌組織，將1g組織用0.86％冰生理鹽水10ml勻漿，取勻漿液1ml，加氯仿∶甲醇(1∶2)的混合液3.75ml，漩渦振蕩器充分混勻2分鐘，再加氯仿1.25ml，再用漩渦振蕩器充分混勻2分鐘，靜置5分鐘後，以2500轉/分鐘的速度離心10分鐘，小心棄掉上層液體及組織塊，用氮氣揮幹氯仿即剩餘的甘油三脂，加甲醇1ml，溶解後用酶比色法測定甘油三脂含量。
6統計方法計數資料以均數±標準差(X±S)表示，組間顯著性差異採用t檢驗。
二、結果1造模階段兩組大鼠的體重與攝食量的變化曲線造模前兩組大鼠的體重均在137-145克之間，組間無明顯差異。自第6周起，兩組體重開始出現差異，高脂飼料餵養的大鼠體重的增長逐漸高於普通飼料餵養的大鼠，至第11周造模結束時，兩組體重的均值分別是387克和421克，統計學有明顯差異。同時，高脂飼料組的熱量攝入明顯高於普通飼料組，前者每天每隻大鼠平均攝入熱量為348千焦，後者為301千焦。見圖1、2。
2各組體重及腹腔脂肪含量的比較灌胃3周，模型組大鼠體重明顯高於正常對照組，解剖結果顯示腹腔脂肪含量也顯著高於正常對照組(P＜0.01)，而飲食幹預組、文迪雅組以及中藥組大鼠的體重及腹腔脂肪含量均顯著低於模型組。結果提示在人為地限制食物熱量攝入後，體重和腹部的脂肪堆積都得到減輕，並且與中、西藥組在控制體重和減少腹腔脂肪方面有相近的療效；在改變飲食結構的前提下，文迪雅組也沒有出現文獻報導的增加體重的作用，雖然文迪雅治療後體重略高於中藥組，但與降糖顆粒組沒有明顯的統計學差異。(表2)表2各組大鼠體重及腹脂含量比較
注與正常組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.013各組基礎血糖和胰島素水平比較如表3所示，模型組基礎血糖水平要輕度高於正常組，且有統計學的差異，但仍在正常範圍；模型組大鼠基礎胰島素水平較正常對照組顯著增高(P＜0.005)，出現高胰島素血症，治療幹預各組基礎胰島素水平較模型組均有不同程度的下降，(均P＜0.01)。且降糖顆粒組基礎胰島素水平較飲食控制組和文迪雅組低，但組間並無明顯統計學差異；如果用李光偉？的胰島素敏感性指數評價各組大鼠的胰島素敏感性，可以看出模型組胰島素敏感性明顯降低(P＜0.005)，幹預治療各組胰島素敏感性指數雖然都有不同程度的回升，但只有中藥組胰島素敏感指數的上升有統計學意義(P＜0.05)。(表3)表3各組基礎血糖和胰島素水平比較
注與正常組比較##P＜0.005；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.014各組胰島素耐量試驗結果比較如圖3所示，模型組血糖下降水平明顯低於正常對照組，胰島素耐量試驗的血糖下降曲線消失，幹預治療各組給藥後血糖曲線都有明顯改善，文迪雅組最為明顯，結果初步提示了降糖顆粒組、文迪雅和飲食控制對胰島素抵抗的治療作用。
5、各組高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗結果比較如表4、圖4所示，在穩態血糖和胰島素相近的情況下，模型組大鼠穩態葡萄糖輸注率明顯低於對照組(P＜0.005)，說明模型組已具有明顯的胰島素抵抗，幹預治療後各組葡萄糖輸注率明顯提高，其中文迪雅組和中藥組尤為明顯，且兩組間比較無統計學差異。
表4各組高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗結果比較
注與正常組比較##P＜0.005；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.0056各組組織內甘油三脂水平比較如表5所示，模型組肝臟和腓腸肌內甘油三脂水平較正常對照組明顯升高(P＜0.01，P＜0.05)，文迪雅組和降糖顆粒組大鼠的肝臟甘油三脂水平較模型組均有統計學意義的顯著降低(P＜0.01)，雖然飲食控制組的肝臟甘油三脂水平也有下降，但無統計學意義。對於肌肉的甘油三脂含量，幹預治療各組都顯示了降低的趨勢，但與模型組比較並沒有統計學的差異。
表5各組組織甘油三脂水平比較
與正常組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.017各組血漿游離脂肪酸水平比較如表6所示，模型組大鼠出現了血漿游離脂肪酸的下降，並與對照組有統計學的差異(P＜0.05)，藥物幹預後，各治療組血漿游離脂肪酸水平較模型組升高，並且也具有統計意義，但均在正常範圍。
表6各組血漿游離脂肪酸水平比較
注與正常組比較#P＜0.05；與模型組比較*P＜0.058各組t-PA和PAI活性的比較如表7所示，模型組大鼠出現纖溶系統的異常，表現為PAI的明顯增高和t-PA的明顯下降，各治療組均明顯降低了PAI水平，並升高了t-PA水平(P均＜0.01)，文迪雅組和中藥組在這方面的療效更為突出。
表7各組t-PA和PAI水平比較
注與正常組比較##P＜0.005；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.019血脂、肝功等生化指標各組肝功以及血脂四項均在正常範圍，且組間無任何統計學差異。
表8各組肝功以及血脂四項的比較
三、結論1、模型組大鼠高脂飼料餵養11周後體重明顯高於對照組，且腹腔內脂肪積聚明顯，類似於人群的腹型肥胖，胰島素水平顯著增高，血糖水平雖仍在正常範圍，但較對照組也有統計學意義的升高，胰島素耐量試驗異常，鉗夾試驗提示模型組穩態葡萄糖輸注率明顯下降，進一步證實其胰島素抵抗的存在。
2、正糖鉗實驗和胰島素耐量試驗兩種方法都證明了本發明降糖顆粒對胰島素抵抗的改善作用，同時減輕了高胰島素血症以及胰島素抵抗所導致的纖溶系統的異常，其對腹腔脂肪的大量積聚的改善和對肝臟、肌肉組織中甘油三酯水平的降低可能是其治療胰島素抵抗的一個重要的作用機理。
圖1體重的變化圖2造模時吸收熱量的變化圖3胰島素耐量試驗圖4鉗夾穩態葡萄糖輸注率具體實施方式
以下通過試驗例來進一步闡述本發明所述藥物的有益效果。
實施例1本發明藥物膠囊的製備取天花粉5g、柴胡10g、枳實3g、生大黃1g、半夏1g、黃芩3g、黃連1g、白芍3g、烏梅5g；加入4倍量80％的乙醇，65℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，70℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例2本發明藥物膠囊的製備取天花粉5g、柴胡10g、枳實3g、生大黃1g、半夏1g、黃芩3g、黃連1g、白芍3g、烏梅5g；山楂3g加入4倍量70％的乙醇，80℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，70℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例3本發明藥物膠囊的製備取天花粉40g、柴胡30g、枳實15g、生大黃6g、半夏12g、黃芩15g、黃連12g、白芍15g、烏梅20g；加入4倍量75％的乙醇，55℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，66℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例4本發明藥物膠囊的製備取天花粉10g、柴胡10g、枳實3g、生大黃1g、半夏1g、黃芩3g、黃連1g、白芍3g、烏梅5g；山楂15g加入4倍量88％的乙醇，61℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，77℃減壓回收乙醇，85℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例5本發明藥物膠囊的製備取天花粉8g、柴胡11g、枳實8g、生大黃2g、半夏5g、黃芩8g、黃連1g、白芍8g、烏梅8g；加入4倍量80％的乙醇，65℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，70℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例6本發明藥物片劑的製備取天花粉12g、柴胡15g、枳實11g、生大黃4g、半夏8g、黃芩11g、黃連8g、白芍11g、烏梅11g；加入4倍量89％的乙醇，51℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，75℃減壓回收乙醇，82℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入澱粉製成膠囊。
實施例7本發明藥物片劑的製備取天花粉12g、柴胡15g、枳實11g、生大黃4g、半夏8g、黃芩11g、黃連8g、白芍11g、烏梅11g；山楂11g；加入4倍量77％的乙醇，63℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，66℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入糊精製成片劑。
實施例8本發明藥物膠囊的製備取天花粉8g、柴胡11g、枳實8g、生大黃2g、半夏5g、黃芩8g、黃連1g、白芍8g、烏梅8g；山楂8g加入4倍量80％的乙醇，65℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，70℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成膠囊。
實施例9本發明藥物顆粒的製備取天花粉8g、柴胡11g、枳實8g、生大黃2g、半夏5g、黃芩8g、黃連1g、白芍8g、烏梅8g；山楂8g加入4倍量80％的乙醇，65℃回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，70℃減壓回收乙醇，80℃真空乾燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物；加入乳糖製成顆粒。
權利要求
1.一種藥物組合物在製備增加胰島素敏感性藥物中的應用，其中主要由下列重量份的原料藥物製成天花粉5～40份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份。
2.權利要求1所述的用途，其中各原料藥物的用量為天花粉9份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅9份。
3.權利要求1所述的用途，其中原料還有山楂。
4.權利要求1或3所述的用途，其中各原料藥的重量比為天花粉10～30份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份、山楂3～15份。
5.權利要求4所述的用途，其中各原料藥的重量比為天花粉30份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅15份、山楂9份。
6.一種藥物組合物在製備改善胰島素抵抗藥物中的應用，其中主要由下列重量份的原料藥物製成天花粉5～40份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份。
7.權利要求6所述的用途，其中各原料藥物的用量為天花粉9份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅9份。
8.權利要求6所述的用途，其中原料還有山楂。
9.權利要求6或8所述的用途，其中各原料藥的重量比為天花粉10～30份、柴胡10～30份、枳實3～15份、生大黃1～6份、半夏1～12份、黃芩3～15份、黃連1～12份、白芍3～15份、烏梅5～20份、山楂3～15份。
10.權利要求9所述的用途，其中各原料藥的重量比為天花粉30份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份、半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅15份、山楂9份。
全文摘要
本發明公開一種藥物組合物在製備增加胰島素敏感性藥物中的應用，該組合物是由天花粉、柴胡、枳實、生大黃等組成。
文檔編號A61P3/10GK1919277SQ200510014830
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月24日 優先權日2005年8月24日
發明者仝小林, 周水平, 段軍 申請人:天津天士力製藥股份有限公司