消化系統腫瘤診斷試劑盒的製作方法
2023-12-09 04:19:36 3
專利名稱：消化系統腫瘤診斷試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明屬生物試劑技術領域。具體涉及一種消化系統腫瘤診斷試劑盒。
正如《臨床檢驗雜誌》1997年第15卷第1期第57頁報導的試驗性肝癌的大鼠，血清中GPDA活性大約為健康鼠的2倍，而肝癌組織的勻漿和微粒體大部分的GPDA比活性都顯著低於健康鼠；而用肝癌組織製取的細胞液部分的GPDA比活性，顯著高於用正常肝組織製取者。說明肝癌時血清GPDA的升高，是由於微粒體內酶向外釋放增多引起，與血清γ-GT升高是由於合成增多引起的機制不同。
胃癌病人血清GPDA明顯下降，儘管下降機理不明，但這種現象已為諸多報導證實。饒有趣味的是，用六種不同的x-Pro-p-NA作底物，測定正常人和胃癌病人的血清GPDA，儘管不同底物測得的GPDA活性水平相差十分明顯，但每種底物各自測得的胃癌病人血清GPDA活性均值，都只有正常人的一半左右。近年若干報導採用較高濃度底物，提高了GPDA活性的絕對值，但沒有改變正常人和胃癌病人血清GPDA活性均值的倍比關係。
其他良性胃腸道病變，血清GPDA也可略有下降。下降幅度較大的為胃潰瘍，依次為慢性胃炎和十二指腸球部潰瘍。如果以正常對照組的(X-3S)為界限，低於此值為陽性，則胃潰瘍、慢性胃炎和十二指腸球部潰瘍的陽性率依次為18.4％、6.2％和0％，遠低於胃癌的陽性率(72.5％)。良性病變時血清GPDA活性下降，可否作為癌變的早期信號，尚有待研究。但是，對血清GPDA顯著下降者，應該結合臨床警惕胃癌的可能。肺癌、賁門癌和食管癌病人血清GPDA活性也有不同程度下降，下降幅度依次順序減小。如果胃癌和上述器官癌出現肝轉移時，GPDA活性可明顯升高。胃癌切除後，血清GPDA有回升趨勢。
GPDA測定試劑中的主原料，即底物——甘氨醯脯氨醯對硝基苯胺對甲苯磺酸(GPN)，配製成液體試劑後極不穩定，只能當天使用，否則必須在零攝氏度以下冰凍保存，臨用前復融混勻，一次使用，不能反覆凍融，給實際應用帶來很大不便，稍有疏忽極易影響測定結果的準確性。目前市場上的乾粉或乾粉加液體的試劑盒，都普遍存在這一弊端。
本發明試劑盒既可作連續監測法，也可在加入終止液後作兩點比色法使用；工作試劑吸光度R1與R2以9∶1混合後A405nm≤1.0(水校零)精密度CV≤5％線性範圍≤638U/L本發明首次研製成功了以GPN為底物，穩定的全液體型GPDA測定試劑盒。
血清中GPDA測定的臨床應用價值甘氨醯脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的生理功能尚不清楚，但由於能特異地水解N-末端為甘氨醯脯氨醯的肽鍵，而膠原分子中恰恰富含這種結構成份，因此推測在膠原肽的降解中起著作用。健康成人血清中GPDA水平比較恆定，而在某些病理狀態下，可出現升高或降低。觀察血清中GPDA水平的變化，對疾病的診斷和監護具有價值。
血清中GPDA測定的臨床意義主要在於1.對肝癌和其他肝膽系統疾病的診斷價值肝癌病人血清中GPDA活性顯著升高。曾有報導，血清GPDA＞200U/L(健康組為77.5±17.1U/L)的20例病人中，除一例總膽管結石外，其餘十九例均為肝癌。
原發性肝癌(PHC)病人血清中GPDA升高的陽性率達83％左右，轉移性肝癌可高達87.5％。兩類病人血清GPDA升高的程度接近，約為健康人的1.5-2.5倍；但也有報導轉移性肝癌病人可升高達健康對照組的三倍以上。
PHC病人血清GPDA活性與AFP不相關，且若干AFP陰性的亞臨床期PHC病人，血清GPDA活性已見升高，說明GPDA與AFP有良好的互補作用。但是亞臨床期PHC病人血清GPDA的升高程度和升高陽性率，均顯著低於臨床期病人，反映了血清GPDA水平與PHC的病情有關。
急性肝炎、慢活肝、肝硬變、阻塞性黃疸等，血清GPDA可有不同程度升高，升高幅度不及肝癌病人。但是，重症肝炎、酒精性肝炎時，血清GPDA升高可甚於肝癌病人。
肝血管瘤病人的血清GPDA活性，均在正常參考範圍之內。因此有人主張，影象學診斷為佔位性病變者，如果血清GPDA升高，應該排除肝血管瘤。
2.胃癌和其他消化道疾病、肺癌病人血清GPDA的活性水平胃癌病人血清中GPDA活性明顯下降，僅及健康人組的一半左右；也有報導大約70％以上的胃癌病人，可下降到健康對照組的X-3S水平以下。胃癌切除後，血清GPDA有回升趨勢。
賁門癌、食管癌和肺癌病人，血清GPDA可有不同程度下降。
胃癌和上述其他器官癌發生肝轉移時，血清GPDA可顯著升高。動態觀察血清GPDA活性的變化，有助於監護上述器官的病情以及是否發生肝轉移。
良性胃腸道病變，血清GPDA也可略有下降，下降幅度較大的為胃潰瘍，依次為慢性胃炎和十二指腸球部潰瘍。如果以低於正常對照組的X-3S為陽性界限，則這三種疾病的陽性率依次為18.4％、6.2％、和0％。
3.急性淋巴細胞性白血病、淋巴肉瘤、何杰金氏病和系統性紅斑狼瘡病人，以及病程在15個月以上的類風溼關節炎病人，血清GPDA活性可顯著低於健康人。
權利要求
1.一種消化系統腫瘤診斷試劑盒，其特徵在於該試劑盒是由試劑1和試劑2組成的，其中試劑1為0.5-3.7％Tris、0-300mmol/L和0-0.1％的NaN3；試劑2為0-1.3％CAPSO、0-50mmol/L或0-0.02％海藻糖0-0.5mmol/L、5-50％乙二醇或30-70％丙三醇、0-2％牛血清蛋白、0.2-1.9％GPN、5-40mmol/L和0-0.1％NaN3。
全文摘要
本發明屬生物試劑技術領域。本發明公開了一種消化系統腫瘤診斷試劑盒。該試劑盒是以甘氨醯脯氨醯對硝基苯胺對甲苯磺酸(GPN)為底物的全液體型測定血清甘氨醯脯氨酸二肽氨基肽酶活性，用於肝癌、胃癌的診斷和監護。本發明的試劑盒穩定性好，有很高的臨床價值。
文檔編號G01N33/96GK1428436SQ01139260
公開日2003年7月9日 申請日期2001年12月27日 優先權日2001年12月27日
發明者張抗 申請人:張抗