軍曹魚精子超低溫保存方法

2023-06-24 01:37:21 1

專利名稱：軍曹魚精子超低溫保存方法
技術領域：
本發明屬於水產養殖技術領域，特別是一種軍曹魚精子超低溫保存方法。
背景技術：
目前，軍曹魚養殖生產所需的苗種全部來自於人工繁育，而人工繁殖經常會出現 雌雄魚成熟不一致或性比不當導致精子不能充分利用的問題。而且，魚類精子質量、數量存 在季節性變化，導致階段性受精率不足。因此，開發應用精子保存技術，有助於提高軍曹魚 精子利用率，增加苗種繁育量，提高經濟效益。 關於魚類精子的保存， 一般分為常溫、低溫和超低溫等三種方法。常溫保存可將精 子壽命延長几分鐘至幾小時；低溫保存可將精子壽命延長几天至十幾天；超低溫保存則是 在-196t:條件下，讓精子的運動和代謝完全停止，理論上可以無限期的保存，解凍復活後恢 復授精能力。國外研究者已經對大西洋比目魚、大菱鮃、虹鱒、金頭鯛、尖吻鱸、大西洋鱈等 少數幾種海水魚類的精子超低溫保存技術開展了研究。國內的相關研究主要側重於鯽魚、 南方鯰、鯉魚等淡水魚類。迄今，國內外關於軍曹魚精子超低溫保存方面的研究尚未見報 道。

發明內容
本發明的目的是為了克服上述現有技術存在的不足，提供一種軍曹魚精子超低溫 保存方法。
為了實現上述發明目的，本發明採取的技術方案是該軍曹魚精子超低溫保存方
法是將採集的新鮮精液按體積比l : 3的比例與精子保存液逐步稀釋並混和均勻，在20秒
內完成，然後平置於液氮液面上預冷5分鐘，預冷溫度-70 -S(TC，然後再放入-196 t:的
液氮中長期保存；使用時將保存的精子在37 4(TC溫度下解凍，時間3 4秒，再移入精
子活化液中活化，然後進行授精。 所述精子保存液的配方及配製方法 精子保存基液的配方NaCl 65 75mmol/l、KCl 1. 45 1. 5mmol/l、CaCl22. 5 2. 7mmol/l、NaHC03 20 25mmol/l、 MgCl2 5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmo1/1 ;小 牛血清9. 4 10mg/ml，按配方製備精子保存基液，然後調ffl值至7. 8，再加入9 10%體 積的抗凍劑，得到精子保存液； 所述活化液配方為NaCl 7. 6 8g/l， KC1 0. 4 0. 45g/l， CaC12 2H200. 18 0. 19g/l， NaHC03 0. 35 0. 4g/l MgS04 0 . 09 0. 10g/l， KH2P04 0 . 06 0. 07g/l， Na2HP04 0. 045 0. 05g/l， D-glucose 0.8 1.2g/l。 所述活化液配方為NaCl 8g/l， KC1 0. 4g/l， CaC12 2H20 0. 185g/l， NaHC03 0. 35g/l， MgS04 0 . 098g/l， KH2P04 0 . 06g/l， Na2HP04 0 . 048g/l， D-glucose lg/l。
所述抗凍劑為二甲亞楓。 本發明的軍曹魚精子超低溫保存方法，有助於提高軍曹魚精子利用率，增加苗種繁育量，提高經濟效益。該技術不僅可以用於魚類人工繁育，對於開展魚類資源恢復與重建 也具有重要的意義。


圖1是本發明技術流程圖。
具體實施例方式
準確配製精子保存基液和精子活化液，精子保存液的配方及配製方法先配製精 子保存基液，精子保存基液的配方氯化鈉(NaC1)65 75mmol/l、氯化鉀(KC1) 1. 45 1. 5mmol/l、氯化牽丐(CaCl2)2. 5 2. 7mmol/l、碳酸鈉(NaHC03) 20 25mmol/l、氯化鎂(MgCl 2)5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmol/l、小牛血清9. 4 10mg/ml，按配方製備精子 保存基液，用lmo1/1的碳酸氫鈉將精子保存基液的pH值調至7. 8，再加入9 10%體積的 二甲亞楓作為抗凍劑，得到精子保存液。 精子活化液的配方所述活化液配方為氯化鈉(NaCl) 8g/1 ，氯化鉀(KCl)O. 4g/ 1 ，氯化牽丐(CaC12 2H20) 0. 185g/l ，碳酸氫鈉(NaHC03) 0. 35g/l ，硫酸鎂(MgS04) 0. 098g/l ，磷 酸二氫鉀(KH2P04)0 . 06g/l，磷酸氫二鈉(Na2HP04)0 . 048g/l，D-葡萄糖(D-glucose) lg/1 。
將精子保存液置於碎冰上，將採集的新鮮精液按l : 3比例與精子保存液逐步稀 釋並混和均勻，應在20秒內完成，平置於液氮液面上預冷5分鐘，預冷溫度約-80°C ，然後再 投入-196t:的液氮中長期保存。應用時，將保存的精子在4(TC左右溫水中解凍3-4秒，再 移入裝有精子活化液的容器中渦旋2-3秒以混和均勻，立即進行授精。
權利要求
一種軍曹魚精子超低溫保存方法，其特徵是將採集的新鮮精液按體積比1∶3的比例與精子保存液逐步稀釋並混和均勻，在20秒內完成，然後平置於液氮液面上預冷5分鐘，預冷溫度-70～-80℃，然後再放入-196℃的液氮中長期保存；使用時將保存的精子在37～40℃溫度下解凍，時間3～4秒，再移入精子活化液中活化，然後進行授精。
2. 據權利要求1所述軍曹魚精子超低溫保存方法，其特徵是所述精子保存液的配方及 配製方法精子保存基液的配方NaCl 65 75,1/1、 KC1 1. 45 1. 5,1/1、 CaCl22. 5 2. 7mmol/l、NaHC03 20 25mmol/l、 MgCl2 5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmo1/1 ;小 牛血清9. 4 10mg/ml，按配方製備精子保存基液，然後調ffl值至7. 8，再加入9 10%體 積的抗凍劑，得到精子保存液。
3. 據權利要求1所述軍曹魚精子超低溫保存方法，其特徵是所述活化液配方為NaCl 7. 6 8g/l， KC1 0. 4 0. 45g/l， CaCl2 2H20 0. 18 0. 19g/l， NaHC03 0. 35 0. 4g/ 1 MgS04 0 . 09 0. 10g/l， KH2P04 0 . 06 0. 07g/l， Na2HP040. 045 0. 05g/l， D-glucose 0. 8 1. 2g/l。
4. 據權利要求3所述軍曹魚精子超低溫保存方法，其特徵是所述活化液配方為NaCl 8g/l，KCl 0. 4g/l，CaCl2 *2H20 0. 185g/l， NaHC03 0. 35g/l， MgS04 0 . 098g/l， KH2P04 0 . 06g/ l，Na2HP04 0 . 048g/l， D-glucose lg/l。
5. 據權利要求2所述軍曹魚精子超低溫保存方法，其特徵是所述抗凍劑為二甲亞楓。
全文摘要
本發明屬於水產養殖技術領域，特別是一種軍曹魚精子超低溫保存方法，該方法是將採集的新鮮精液按體積比1∶3的比例與精子保存液逐步稀釋並混和均勻，在20秒內完成，然後平置於液氮液面上預冷5分鐘，預冷溫度-70～-80℃，然後再放入-196℃的液氮中長期保存；使用時將保存的精子在37～40℃溫度下解凍，時間3～4秒，再移入精子活化液中活化，然後進行授精。本發明的軍曹魚精子超低溫保存方法，有助於提高軍曹魚精子利用率，增加苗種繁育量，提高經濟效益。該技術不僅可以用於魚類人工繁育，對於開展魚類資源恢復與重建也具有重要的意義。
文檔編號A01N1/02GK101711522SQ20091019358
公開日2010年5月26日 申請日期2009年10月28日 優先權日2009年10月28日
發明者周暉, 張建東, 施鋼, 湯保貴, 潘傳豪, 陳剛, 黃建盛 申請人:廣東海洋大學