重組蛋白g的製備及應用的製作方法

2023-06-25 15:55:46 1

專利名稱：重組蛋白g的製備及應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物工程技術領域，涉及一種重組蛋白G的基因及胺基酸序列，以及 含有這種重組蛋白G的載體和轉化的菌株，及其純化方法和親和填料的製備和用途。
背景技術：
鏈球菌蛋白G(Str印tococcal Protein G，SPG)是一種從鏈球菌細胞壁和培 養上清中分離的蛋白質。1973年，Kronvall報導了鏈球菌A、C和G群許多菌株的細胞 壁及培養上清中含有能與IgG Fc片段結合的蛋白質，其特性與金黃色葡萄球菌蛋白 A (Staphylococcus aureus Aprote in, SPA)明顯不同。1984 年，Bjorck 等將其統稱為鏈球 菌蛋白G (SPG)。SPG與SPA雖然都能結合IgG，但分子結構研究表明，它們是完全不同的分子。除 C端有小段胺基酸相同外，兩者的基因序列和蛋白結構並無相同之處。進一步的研究發現， 在G蛋白的C端有3處胺基酸序列相同的結構與IgG結合有關。此外，通過計算蛋白G與 IgG反應的平衡常數並與SPA比較，結果蛋白G對多數IgG的親和常熟較SPA高，表明蛋白 G的結合力比SPA強。對蛋白G與IgG結合譜的研究發現，蛋白G對不同種屬的IgG結合力與SPA有明 顯不同，詳見表1。表1.免疫球蛋白與Protein A和Protein G的結合力
權利要求
1.一種人工重組蛋白G，其特徵是1)包含4個人工重組蛋白G的基因單體重複序列；2)包含his標籤序列。
2.根據權利要求1，所述的重組蛋白G的基因序列為SEQID No 1。
3.根據權利要求1，所述的重組蛋白G的胺基酸序列為SEQID No 2。
4.根據權利要求1，所述的重組蛋白G的基因表達載體為原核表達載體，其特徵為所述 表達載體優先為PBV220。
5.根據權利要求1，所述的重組蛋白G的基因表達宿主為原核細菌，其特徵為所述表達 宿主優先為大腸桿菌。
6.一種重組蛋白G瓊脂糖凝膠，其特徵是以瓊脂糖凝膠為基質，採用環氧法活化載體， 將所述的蛋白G以間隔臂的方式固定在載體表面，從而合成了蛋白G瓊脂糖凝膠。
7.根據權利要求6，所述的瓊脂糖凝膠可以用於抗體分離純化。
全文摘要
本發明屬於生物工程技術領域。本發明是將鏈球菌蛋白G的IgG結合域基因單體根據大腸桿菌密碼子的偏愛性進行優化，將4個單體基因重複插入熱誘導型大腸桿菌載體pBV220，構建了含有該基因的大腸桿菌重組表達載體及其轉化的大腸桿菌DH5α重組菌株和利用此菌株生產重組蛋白G的方法。此菌株所產生的可溶性重組蛋白G達到細菌可溶性蛋白總量的40％以上，經鎳離子螯合層析純化即可將重組蛋白G的純度達到95％以上，該蛋白具有表達量高、成本低、易純化等優點。本發明為獲得質量高且價格便宜的重組蛋白G並用其製備多種抗體分離介質提供一條切實可行的途徑。
文檔編號C12N15/31GK102115493SQ20091024421
公開日2011年7月6日 申請日期2009年12月30日 優先權日2009年12月30日
發明者何新舟, 宮照龍, 曹暉, 許允立 申請人:本元正陽基因技術有限公司