一種發酵法製備棘白菌素b的方法及菌株的製作方法
2023-05-29 11:55:46 2
一種發酵法製備棘白菌素b的方法及菌株的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一株構巢麴黴菌突變株——構巢麴黴（Aspergillus?nidulans）ZJB09223，以及採用該菌株發酵法製取棘白菌素B的方法。該菌株保藏於中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢市，武漢大學，郵編430072，保藏編號為CCTCC?NO：M?2012300，保藏日期為2012年07月25日。本發明通過LiCl/紫外/亞硝酸鈉複合誘變結合抗性篩選方式獲得了一種構巢麴黴Aspergillus?nidulans突變株ZJB09223；該突變株能夠高效生產棘白菌素B，且培養方便，製備棘白菌素B的過程也較為簡便高效，能得到高純度的棘白菌素B，具有很好的應用前景。
【專利說明】一種發酵法製備棘白菌素B的方法及菌株
(一)【技術領域】
[0001]本發明涉及一株構巢麴黴菌突變株-構巢麴黴(Aspergillus nidulans)
ZJB09223,以及利用所述的構巢麴黴ZJB09223發酵法製備棘白菌素B的方法。
(二)【背景技術】
[0002]棘白菌素B (Echinocandin B)是ー種具有環狀六肽核心和脂肪酸側鏈結構天然環狀脂肽類化合物。化學名是，分子式為C52H81N7O16，分子量為1060，結構式如下:
[0003]
【權利要求】
1.一株構巢麴黴菌突變株-構巢麴黴(Aspergillus nidulans)ZJB09223,保藏於中國典型培養物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學，郵編430072，保藏編號為CCTCC NO:M2012300，保藏日期為2012年07月25日。
2.利用權利要求1所述的構巢麴黴ZJB09223發酵法製備棘白菌素B的方法，所述方法包括: (1)種子培養:將構巢麴黴ZJB09223接種至種子培養基，25~30°C培養24~48h，獲得種子液；所述種子培養基組成如下:葡萄糖0.5~1.5%，甘油0.5~5%，棉籽粉I~10%，溶劑為蒸餾水，PH值自然； (2)發酵培養:步驟(1)種子液以I~10%體積比接種至發酵培養基，20~30°C、220~280rpm下培養7~12天，得到發酵液，發酵液經分離純化得到所述棘白菌素B ;所述發酵培養基組成如下:甘油0.5~5%，蛋白腖0.5~5%，L-脯氨酸0.1~0.5%，甘露醇I~10%，黃豆餅粉I~10%，鳥氨酸0.1~0.5%,花生油0.5~5%，K2HP043H200.2~2%，MgS047H200.01% ~0.1%，MnPO4H2O0.01% ~0.1%，FeSOJH2OO? 005%, CaCl20.01% ~0.1%，CuSO4.5H200.01%~0.1%，溶劑為蒸餾水，pH值自然。
3.如權利要求2所述的方法，其特徵在於所述分離純化方法如下:發酵液離心，分別收集沉澱和上清液；上清液經異丁醇充分萃取後收集異丁醇萃取相；沉澱用異丁醇浸提，離心收集異丁醇液相；合併異丁醇相，濃縮，加入5~10倍異丁醇相體積的こ酸乙酯，(TC下過夜結晶，過濾，得到棘`白菌素B晶體。
【文檔編號】C12N1/14GK103555591SQ201310477670
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月12日 優先權日:2013年10月12日
【發明者】鄭裕國, 鄒樹平, 牛坤, 鍾偉, 毛健, 沈寅初 申請人:浙江工業大學