一種植硫肽的類似物及製備方法
2023-05-28 20:26:36 2
一種植硫肽的類似物及製備方法
【專利摘要】一種植硫肽的類似物及製備方法，序列為Phs-Ile-Phs-Thr-Gln；其製備方法，包括：(1)樹脂Gln-王樹脂置於接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液裡；(2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt進行反應後脫去Fmoc基團；(3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt進行反應後脫去Fmoc基團；(4)加入Fmoc-Ile-OH、DIC、HOBt進行反應後脫去Fmoc基團；(5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt進行反應後脫去Fmoc基團；(6)用三氟乙酸／二氯甲烷溶液切割樹脂即可。本發明較天然的植硫肽結構更為穩定，並且具備和天然植硫肽同樣的生理活性。
【專利說明】一種植硫肽的類似物及製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於植物激素領域，具體為一種植硫肽的類似物及製備方法。
【背景技術】
[0002]在植物懸浮細胞培養中存在密度效應，即培養細胞被稀釋到一定程度後很難再繼續分裂。即使在補充植物激素和培養基之後也難以提高其有絲分裂的活性，說明懸浮培養體系中存在一種能夠被培養細胞感受的密度因子。當把低密度的靶細胞和高密度的滋養細胞一起非接觸性共培養，發現低密度的培養細胞可以感受由高密度的培養細胞釋放到細胞外的某種細胞分裂的促進因子。經純化分析後發現這種促進有絲分裂的因子是帶有硫基化修飾的5個或4個胺基酸殘基的多肽化合物，即硫化酪氨酸-異亮氨酸-硫化酪氨酸-蘇氨酸-穀氨醯胺[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]和硫化酪氨酸-異亮氨酸_硫化酪氨酸-蘇氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]被稱為植硫肽PSK_a和PSK_b。植硫肽在納摩爾濃度下就可以刺激細胞增殖，PSK-b的活性只有PSK-a的活性的1/ 10.[0003]植硫肽除了能夠促進植物懸浮細胞的增殖以外，還可以在植物的生長發育的許多方面發揮調節作用。例如，植硫肽可以促進黃瓜黃化葉子葉細胞葉綠素的合成，能促進下胚軸形成不定根，刺激懸浮細胞的葉肉細胞嚮導管細胞的分化，促進密度依賴的體外花粉管的明發等。
[0004]目前植硫肽的來源主要由生物提純得到，生物提純得到的植硫肽不但量少，而且純化分離成本很高，不利於大規模生產和使用。尋求化學的方法合成植硫肽曾有報導用酶法合成(美國科學院院刊，1996，93卷，頁7623)，但這種酶不但難以獲取，而且存在活性不穩定的缺點。
[0005]植硫肽的結構式為:
[0006]硫化酪氨酸-異亮氨酸-硫化酪氨酸-蘇氨酸-穀氨醯胺
[0007][Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]植硫肽a和硫化酪氨酸_異亮氨酸_硫化酪氨酸-蘇氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]植硫肽 b。
[0008]
【權利要求】
1.一種植硫肽的類似物，其特徵是，序列為(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-異亮氨酸-(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-蘇氨酸-穀氨醯胺，既Phs-1le-Phs-Thr-Gln,其化學結構式為:
2.根據權利要求1所述的一種植硫肽的類似物，其特徵是，所述4-甲磺酸基-苯丙氨酸，其結構式為:
3.—種植硫肽的類似物的製備方法，其特徵是，包括以下步驟: (1)將樹脂Gln-王樹脂置於接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液裡； (2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (4)加入Fmoc-1le-0H、DIC、H0Bt在20-30攝氏度下的搖床中反應35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團；(6)用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割樹脂，得到植硫肽類似物Phs-1le-Phs-Thr-Gln。
4.根據權利要求3所述的一種植硫肽的類似物的製備方法，其特徵是，所述Gln-王樹脂載量為0.4毫摩爾/克。
5.根據權利要求3所述的一種植硫肽的類似物的製備方法，其特徵是，所述piperidine-DMF溶液的濃度為20%。
【文檔編號】C07K7/06GK103739668SQ201310730784
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月18日 優先權日:2013年12月18日
【發明者】鄧方坤 申請人:鄧方坤