甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法
2023-05-29 07:59:16
專利名稱：甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物技術領域的方法，具體是一種甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法。
背景技術：
1997年人重組甲狀旁腺激素(1～84胺基酸)已在進行II期臨床試驗，Lilly的甲狀旁腺激素(1～34)產品特立帕肽(Teriparatide Forteo)2002年6月經美國FDA批准用於治療絕經後婦女骨質疏鬆症和原發性骨質疏鬆症。由於甲狀旁腺激素的血漿半衰期很短(20-30min)，不被直接吸收、治療周期長，目前甲狀旁腺激素治療採用每周3～5次皮下注射40～100微克，長時間治療病人難以耐受，上述原因給甲狀旁腺激素用藥治療帶來很大困難，因此需要研究甲狀旁腺激素緩釋劑型。目前有關甲狀旁腺激素緩釋微球，製備方法尚停留於傳統復乳法簡單修改，Christopher Breuer等製備的甲狀旁腺激素緩釋聚乳酸羥基乙酸共聚物微球體外釋放曲線存在嚴重的突釋現象，第一天釋放69％。Peter X.Ma等製備了甲狀旁腺激素聚乳酸羥基乙酸共聚物微球，體外生物活性測試結果顯示24小時的生物學活性下降至6小時的40％。
目前有關PTH緩釋微球的研究尚停留於傳統復乳法簡單修改。經對現有技術的文獻檢索發現，Christopher Breuer等在Journal of Pediatric Surgery(兒童外科雜誌)2005年第40期第81-85頁，文章題名「Development of a parathyroidhormone-controlled release system as a potential surgical treatment forhypoparathyroidism」(甲狀旁腺激素緩釋系統用於治療甲狀旁腺激素功能減退的研究進展)，提出採用甲狀旁腺激素(4.76％，w/w)和聚乳酸羥基乙酸共聚物(95.24％，w/w)製備緩釋微球。將PTH磷酸鹽-生理鹽水溶液逐滴滴加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷中，經渦旋、冰浴超聲形成初乳液，初乳再加至濃度1％PVA溶液中超聲形成復乳，繼續將復乳轉移至3％PVA溶液中，，室溫下攪拌3小時除去二氯甲烷，離心搜集微球，冷凍乾燥得到微球。但是所得到的微球體外釋放曲線存在嚴重的突釋現象，第一天釋放出69％，沒有達到理想的緩釋效果。
發明內容
本發明的目的是針對現有技術中存在的不足，提供一種甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，使其可以改善微球的釋放曲線，提高載藥量，並在製劑、貯存、釋放過程中穩定甲狀旁腺激素。
本發明是通過以下技術方案實現的，本發明所述的甲狀旁腺激素緩釋微球組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％、小分子糖0-10％、緩釋高分子75-95％，其製備方法包括以下步驟a)將甲狀旁腺激素先溶於高分子多糖水溶液中作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，採用磁力攪拌或者勻漿的方式，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿或者磁力攪拌將初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
所述的高分子多糖為葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質酸、海藻酸鹽中的一種或者任意混合；可以在高分子多糖中添加小分子糖，提高幹燥過程中多肽的穩定性。
所述的緩釋高分子選用聚乳酸或乳酸和羥基乙酸的共聚物。
所述的甲狀旁腺激素是由84個胺基酸殘基組成的一條直鏈多肽分子，分子質量9000，氨基端是活性端，與靶組織受體結合後引起生物效應，羧基端不具有生物活性，生物活性部分主要在氨基端1～34；甲狀旁腺激素也可以是由1-34位胺基酸組成的多肽分子。
所述的甲狀旁腺激素與高分子多糖的重量百分比從10/1至1/10。
其內水相與聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相重量百分比從1/2至1/50，優選為1/5至1/10。
步驟b)，將內水相分散於聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相形成初乳時磁力攪拌或者勻漿的速率為2500-10000rpm、時間為2-5分鐘。
步驟c)製備「W/O/W」復乳的外水相溶液的組成重量百分比為聚乙烯醇0.1-5％，氯化鈉0.5-20％，外水相需用二氯甲烷進行飽和吸收。
步驟c)，製備W/O/W復乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為1500-3500rpm、時間為30-50秒。
步驟d)，所用的氯化鈉溶液的濃度為0.5-25％，進一步為5-10％，攪拌時間3-4小時。
本發明以可降解高分子材料聚乳酸-羥基乙酸共聚物為基質，高分子多糖顆粒作為「內親水相」，在內水相中加入高分子多糖可以和緩釋高分子共同調節甲狀旁腺激素的釋放速率，根據治療需要控制釋放速率；在內水相中加入高分子多糖可以阻滯甲狀旁腺激素向外水相洩漏，從而提高微球載藥量；在內水相中加入高分子多糖通過增大粘度降低甲狀旁腺激素分子的可動性，減少聚集現象的發生；高分子多糖與甲狀旁腺激素有很好的生物相容性，可以減少高由於甲狀旁腺激素與高分子的直接接觸而引起的吸附，可以提高甲狀旁腺激素在製劑、貯存、釋放過程中的穩定性。本發明製得的微球可以改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在製劑、貯存、釋放過程中的穩定性、增加微球的載藥量，可持續釋放半個月至三個月且第一天突釋不大於藥物載量的15％，總釋放量接近或不低於藥物載量的85％。
具體實施例方式
實施例1甲狀旁腺激素微球製備及體外釋放實驗a)將甲狀旁腺激素(2％，w/w)先溶於高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(1％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(95％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，採用磁力攪拌10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；
c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
精密稱量10mg微球，加入1mlPBS溶液，於37℃、60rpm氣浴搖床培養，定時取出上清夜並補加緩衝介質，採用microbca的方法測試上清夜中甲狀旁腺激素含量，扣除空白微球讀數，計算微球釋放度。
實驗結果表明甲狀旁腺激素微球組合物平穩緩釋，第一天突釋不大於藥物載量的15％，總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
實施例2a)將甲狀旁腺激素(20％，w/w)先溶於高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(3％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，採用磁力攪拌2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本發明實施例的微球總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
實施例3a)將甲狀旁腺激素(11％，w/w)先溶於高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(2％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(85％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，採用磁力攪拌6250rpm，3.5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。甲狀旁腺激素微球組合物平穩緩釋，第一天突釋不大於藥物載量的15％，總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
實施例4a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶於高分子多糖(20％，w/w)、小分子糖(0％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，勻漿10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本發明實施例製得的微球總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
實施例5a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶於高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(10％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，勻漿2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本實施例製得的微球總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
實施例6a)將甲狀旁腺激素(10％，w/w)先溶於高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(5％，w/w)水溶液200mg作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，勻漿6250rpm，3.5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本實施例製得的微球總釋放量接近或不低於藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現象。
權利要求
1.一種甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵在於，所述的甲狀旁腺激素緩釋微球組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％、小分子糖0-10％、緩釋高分子75-95％，其製備包括以下步驟a)將甲狀旁腺激素先溶於高分子多糖水溶液中作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，採用磁力攪拌或者勻漿的方式，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，採用勻漿或者磁力攪拌將初乳進一步乳化形成W/O/W復乳；d)將上述W/O/W復乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
2.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，所述的高分子多糖為葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質酸、海藻酸鹽中的一種或者任意混合；或者在高分子多糖中添加小分子糖，提高幹燥過程中多肽的穩定性。
3.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，所述的緩釋高分子選用聚乳酸或乳酸和羥基乙酸的共聚物。
4.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，所述的甲狀旁腺激素是由84個胺基酸殘基組成的一條直鏈多肽分子，分子質量9000；或者是包括生物活性部分的氨基端1～34，即34個胺基酸組成的多肽分子。
5.根據權利要求1或者4所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，所述的甲狀旁腺激素與高分子多糖的重量百分比從10/1至1/10。
6.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，其內水相與聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相重量百分比從1/2至1/50。
7.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，步驟b)，將內水相分散於聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相形成初乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為2500-10000rpm、時間為2-5分鐘。
8.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，步驟c)，製備「W/O/W」復乳的外水相溶液的組成重量百分比為聚乙烯醇0.1-5％，氯化鈉0.5-20％，外水相需用二氯甲烷進行飽和吸收。
9.根據權利要求1或者8所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，步驟c)，製備W/O/W復乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為1500-3500rpm、時間為30-50秒。
10.根據權利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，其特徵是，步驟d)，所用的氯化鈉溶液的濃度為0.5-25％，攪拌時間3-4小時固化，使微球。
全文摘要
一種藥物技術領域的甲狀旁腺激素緩釋微球的製備方法，所述的緩釋微球各組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2－20％、高分子多糖2－20％，小分子糖0－10％、緩釋高分子75－95％，製備步驟a)將甲狀旁腺激素先溶於高分子多糖水溶液中作為內水相；b)內水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，將初乳乳化形成W/O/W復乳；d)將W/O/W復乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉後冷凍乾燥。本發明可改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在製劑、貯存、釋放過程中的穩定性、增加微球的載藥量。
文檔編號A61K9/16GK1739795SQ20051002927
公開日2006年3月1日 申請日期2005年8月31日 優先權日2005年8月31日
發明者金拓, 吳飛 申請人:上海交通大學