復元醒腦顆粒製劑及其製備方法和應用與流程
2023-06-29 11:36:11
本發明涉及生物醫藥技術領域，具體地說，涉及一種用於製備復元醒腦顆粒的新型製劑提取工藝、由該工藝製得的復元醒腦顆粒製劑以及該復元醒腦顆粒製劑的用途。
背景技術：
復元醒腦湯是在臨床上使用多年的基礎上研究開發的組方，臨床上以湯劑給病人口服，主要治療腦循環血流量減少引起的中樞神經系統疾病。傳統的湯劑具有製備簡單易行、吸收快、能夠迅速發揮療效等優點，但是湯劑也存在著一些缺點，例如煎液體積大，味苦，攜帶和服用不方便，易發黴、發酵、變質而不能長期儲存，不宜批量生產和質量不易控制等。
顆粒劑能克服湯劑的缺點，具有質量可控，穩定，便於攜帶和服用，使病人樂於接受，易於貯存，可工業化生產等優點。在療效方面有報導認為，單煎與共煎只是不同形式，並非質的區別，某些顆粒劑代替湯劑，還可以達到解決湯劑不易解決的弊病。無論是配方顆粒劑與湯劑的化學成分的對比，還是藥效的分析以及臨床治療作用的比較，均表明配方顆粒劑與中藥湯劑基本相同。
而目前還未見復元醒腦湯的顆粒製劑。建立復元醒腦湯顆粒製劑的製備工藝將更便於該組方的臨床應用。
技術實現要素：
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種針對缺血性腦血管病療效顯著的中藥顆粒製劑及其製備方法和應用。
本發明第一方面提供了一種復元醒腦顆粒製劑，其原料藥重量份組成為：人參200g、水蛭240g、制天南星180g、大黃180g、三七300g，製備方法包括以下步驟：人參、制天南星和三七用乙醇回流提取，濾渣加水蛭和大黃後用水煎煮提取，過濾，合併濾液和醇提液，乙醇沉澱，濃縮製得清膏，濃縮加輔料製成所述的復元醒腦顆粒製劑。
優選地，乙醇回流提取2次；乙醇體積濃度為50％；料液比第一次8倍，第二次6倍；提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘。
優選地，水煎煮提取2次；提取溫度為100℃；料液比第一次10倍，第二次8倍；提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘。
優選地，乙醇沉澱工藝中使用乙醇的體積濃度為70％，時間為20小時，乙醇用量為2倍。
優選地，所述的輔料包括糊精、甘露醇和阿司帕坦，所述的清膏與各輔料重量份配比為：40份清膏輔料用量為糊精90份、甘露醇3份、阿司帕坦0.3份。
本發明另一方面提供了所述的復元醒腦顆粒製劑的製備方法，包括以下步驟：人參、制天南星和三七用乙醇回流提取，濾渣加水蛭和大黃後用水煎煮提取，過濾，合併濾液和醇提液，乙醇沉澱，濃縮製得清膏，濃縮加輔料製成所述的復元醒腦顆粒製劑。
優選地，乙醇回流提取2次；乙醇體積濃度為50％；料液比第一次8倍，第二次6倍；提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘。
優選地，水煎煮提取2次；提取溫度為100℃；料液比第一次10倍，第二次8倍；提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘。
優選地，乙醇沉澱工藝中使用乙醇的體積濃度為70％，時間為20小時，乙醇用量為2倍。
本發明再一方面提供了所述的復元醒腦顆粒製劑在製備治療由腦循環血流量減少引起的中樞神經系統疾病藥中的應用。
所述的由腦循環血流量減少引起的中樞神經系統疾病包括缺血性腦血管病，具體可以是腦梗死等。
本發明優點在於：
1、建立並優化了復元醒腦組方清膏的提取工藝，採用乙醇回流提取人參、制天南星和三七的有效成分，再將濾渣與水蛭、大黃水煎煮提取，最後乙醇沉澱，可以將復元醒腦組方中的有效成分充分提取出來。
2、復元醒腦組方中人參味甘、微苦，性溫、平，具有大補元氣、固脫生津、安神益智的功效，水蛭味鹹苦，性平，破血通經、逐瘀消症，制天南星味苦、辛，性溫，燥溼化痰、祛風止痙、散結消腫，大黃味苦，性寒，清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經，三七味甘、微苦，性溫，化瘀止血、消腫止痛。諸藥合用，共奏破血祛瘀、祛風散結、固本補氣之功效，治療缺血性腦血管病效果顯著。
3、本發明優化了顆粒製劑的輔料配方，得到了無焦屑，粒度均勻，外觀顏色均勻，流動性好，吸溼性小，顆粒重量符合要求的組方。
具體實施方式
下面對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。
實施例1：復元醒腦清膏提取製備方法
1、復元醒腦浸膏1號(水煎煮提取、水沉澱)
稱取：人參200g、水蛭240g、制天南星180g、大黃180g(第一次煎煮1小時後加入)、三七300g，共1100g；加水煎煮兩次，溫度為100℃，料液比第一次10倍，第二次8倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，合併濾液。
減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得到復元醒腦清膏412.10g。
2、復元醒腦浸膏2號(乙醇回流提取、水煎煮提取、水沉澱)
稱取：人參200克、制天南星180克、三七300克，共680克；用50％乙醇回流2次，料液比第一次8倍，第二次6倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，過濾，合併濾液，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味。人參200克、制天南星180克、三七300克回流後的濾渣、水蛭240克、大黃180克，加水煎煮兩次，溫度為100℃，料液比第一次10倍，第二次8倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，過濾，合併濾液和醇提液。
減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得到復元醒腦清膏455.70g。
3、復元醒腦浸膏3號(乙醇回流提取、水煎煮提取、乙醇沉澱)
稱取：人參200克、制天南星180克、三七300克，共680克；用50％乙醇回流2次，料液比第一次8倍，第二次6倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，過濾，合併濾液，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味。將人參200克、制天南星180克、三七300克用乙醇回流後的濾渣、水蛭240克、大黃180克，加水煎煮兩次，溫度為100℃，料液比第一次10倍，第二次8倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，過濾，合併濾液和醇提液，減壓濃縮，再使用70％乙醇沉澱，時間為20小時，乙醇用量為2倍。
減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得到復元醒腦清膏303.10g。
4、復元醒腦浸膏4號(水煎煮提取、乙醇沉澱)
稱取：人參200克、水蛭240克、制天南星180克、大黃180克(第一次煎煮1小時後加入)、三七300克，共1100克；加水煎煮兩次，溫度為100℃，料液比第一次10倍，第二次8倍，提取時間為第一次120分鐘，第二次80分鐘，過濾，合併濾液。
減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得到復元醒腦清膏297.50g。
四種提取工藝提取的復元醒腦浸膏得率比較見表1。
表1四種提取工藝提取復元醒腦幹浸膏得率
實施例2：復元醒腦清膏用於治療缺血性腦血管病的動物實驗
大鼠線栓法製作局部腦缺血模型的藥理實驗是驗證藥物具有防治缺血性腦血管病作用常用的動物實驗，因此用其驗證實施例1的復元醒腦清膏對實驗性動物腦缺血的保護作用。
1動物
健康雄性sd大鼠，體重240～270g，飼養於清潔級動物房。
2藥物
將實驗大鼠進行分組，每組8隻。
假手術組：給予與藥物實驗組等量的生理鹽水，不進行腦缺血手術；
模型組(陰性對照組)：給予與藥物實驗組等量的生理鹽水，並進行腦缺血手術；
藥物1組：復元醒腦清膏1號低劑量；
藥物2組：復元醒腦清膏1號高劑量；
藥物3組：復元醒腦清膏2號低劑量；
藥物4組：復元醒腦清膏2號高劑量；
藥物5組：復元醒腦清膏3號低劑量；
藥物6組：復元醒腦清膏3號高劑量；
藥物7組：復元醒腦清膏4號低劑量；
藥物8組：復元醒腦清膏4號高劑量；
藥物9組：復元醒腦湯組(5g生藥/kg，人參200g、水蛭240g、制天南星180g、大黃180g、三七300g，共1100g，加水煎煮200分鐘，減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得到復元醒腦清膏468.57g)；
低劑量為5g生藥/kg，高劑量為20g生藥/kg。
3實驗方法
實驗大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離並結紮右側頸總動脈近心段、頸外動脈及其分支血管。分離右側頸內動脈，沿著頸內動脈向下分離翼顎動脈，根部結紮該分支。在頸內動脈近端備線、遠端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，扎入尼龍線，栓線進入頸內動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤去動脈夾，紮緊備線，縫合皮膚，術後回籠飼養。以上過程均在室溫恆定情況下進行，以利於評價腦缺血程度。缺血半小時後灌胃給藥。術後24小時進行行為學評分，評分採用單盲法，評分參考zealonga的5分制評分標準，方法為：0分，小鼠正常，無神經損傷症狀；1分，不能完全伸展對側前爪；2分，向外側轉圈；3分，向對側傾倒；4分，不能自發行走，意識喪失。
評分後，斷頭取腦，將大腦平均冠狀分為5片，放於ttc溶液中，37℃溫育10～15min染色。梗死區不著色，正常腦組織染成紅色。用圖像分析軟體測出各區面積，計算梗死區面積佔全腦面積的百分比。
4統計分析
本實驗計量資料以均數±標準差(mean±standarddeviation)表示，spss21統計軟體進行統計分析，多組之間均值比較使用單因素方差分析(one-wayanova)。p<0.05認為結果具有統計學差異。
5實驗結果
由表2可見，復元醒腦清膏1號、2號、3號、4號和復元醒腦湯組均可顯著縮小大鼠腦梗死比例，與模型組相比，差異具有統計學意義(p＜0.05，p＜0.01)。復元醒腦清膏1號、2號、3號和4號的作用均強於復元醒腦湯的作用。各給藥組間比較，1號和3號縮小大鼠腦梗死比例優於2號和4號，3號縮小大鼠腦梗死比例最優，3號低劑量組與1號、2號和4號低劑量組相比，差異具有統計學意義(p＜0.05)，3號高劑量組與1號、2號和4號高劑量組相比，差異具有統計學意義(p＜0.05)。，故選擇復元醒腦清膏3號作為製備顆粒劑原料。
表2復元醒腦清膏對大鼠腦梗死比例的影響
註：*p＜0.05vs模型組，**p＜0.01vs模型組。
實施例3：復元醒腦浸膏3號提取工藝的優化
復元醒腦浸膏3號提取工藝的優化分為三個部分進行。
1乙醇回流提取工藝的優化
1.1人參、制天南星、三七三味中藥飲片，以乙醇為溶媒回流提取，採用l9(34)正交試驗方法對乙醇回流提取工藝進行優化。我們選擇了四個因素，每個因素選擇三個水平進行正交試驗。見表3。
表3乙醇回流提取工藝正交試驗因素水平
1.2乙醇回流提取工藝l9(34)正交試驗
乙醇回流提取工藝l9(34)正交試驗：稱取人參20g，制天南星18g，三七30g，共68g。加入不同濃度和不同倍數的乙醇，加熱回流提取不同次數和不同時間，將各個提取液回收乙醇至盡，減壓濃縮，乾燥。精密稱取乾燥浸膏粉末(過四號篩)0.6g，依照中國藥典2015版三七藥材項下含量測定方法，測定人參皂苷rg1、rb1和三七皂苷r1的含量。見表4。
表4乙醇回流提取工藝l9(34)正交試驗和結果
2水煎煮提取工藝的優化
2.1水蛭、大黃二位中藥飲片，以水為溶媒煎煮提取，採用l9(34)正交試驗方法對水煎煮提取工藝進行優化。在水煎煮提取工藝中，我們選擇了四個因素，每個因素選擇三個水平進行正交試驗。見表5。
表5水煎煮提取工藝正交試驗因素水平表
2.2水煎煮提取工藝l9(34)正交試驗
水煎煮提取工藝l9(34)正交試驗：稱取水蛭24g，大黃18g，共42g。加入不同倍數的水，才用不同溫度，煎煮提取不同次數和不同時間，將各個提取液減壓濃縮，乾燥。精密稱取乾燥浸膏粉末(過四號篩)0.5g，依照中國藥典2015版大黃藥材項下含量測定方法，測定游離蒽醌含量。結果見表6。
表6水煎煮提取工藝l9(34)正交試驗和結果
3乙醇沉澱工藝的優化
3.1人參、制天南星、三七中藥飲片，以乙醇為溶媒回流提取，濾渣加入水蛭、大黃兩位中藥飲片，以水為溶媒煎煮提取，過濾，減壓濃縮，用不同濃度和不同劑量的乙醇沉澱。採用l9(34)正交試驗方法對乙醇沉澱工藝進行優化。在乙醇沉澱工藝中，我們選擇了三個因素，每個因素選擇三個水平進行正交試驗。見表7。
表7乙醇沉澱工藝正交試驗因素水平表
3.2乙醇沉澱工藝l9(34)正交試驗
乙醇沉澱工藝l9(34)正交試驗：稱取人參220g，制天南星198g，三七330g，共748g。加入50％8倍量的乙醇，加熱回流提取120分鐘，過濾；濾渣加入50％6倍量的乙醇，加熱回流提取80分鐘，過濾，合併濾液，回收乙醇至盡。濾渣加入(水蛭264g，大黃198g，共462g)中，加入10倍水，煎煮提取120分鐘，過濾；濾渣加入8倍水，煎煮提取80分鐘，過濾，合併濾液和醇提液，減壓濃縮至相對密度為1.15，分成11份(9份做沉澱工藝l9(34)正交試驗，2份做驗證試驗)。取9份清膏，用不同濃度和不同倍數的乙醇，沉澱不同時間，然後對各個沉澱進行過濾、回收乙醇至盡，減壓濃縮，乾燥。分別精密稱取乾燥浸膏粉末(過四號篩)0.6g、0.5g，依照中國藥典2015版三七藥材項下含量測定方法，測定人參皂苷rg1、rb1，三七皂苷r1的含量。結果見表8。
表8乙醇沉澱工藝l9(34)正交試驗和結果
至此，得到最優的復元醒腦浸膏提取工藝。進一步動物實驗表明，上述實驗號對大腦腦梗死的治療作用最為顯著，均優於其他實驗號(p＜0.05)。
實施例4：復元醒腦顆粒輔料篩選試驗
1根據顆粒固體製劑的要求和輔料的種類，選擇了玉米澱粉、糊精、可溶性澱粉、蔗糖等作為篩選對象。組方量按照100g，復元醒腦清膏40g(幹膏粉10-11g)，輔料90g進行篩選試驗，結果見表9。
表9復元醒腦顆粒輔料篩選表
2復元醒腦顆粒處方篩選試驗
確定輔料糊精後，處方量按照100g，復元醒腦清膏40g，糊精4種不同劑量進行篩選試驗，結果見表10。
表10復元醒腦顆粒處方篩選表
3復元醒腦顆粒處方篩選試驗結果分析
處方1號，輔料糊精用量為130g，甘露醇3g，阿司帕坦0.3g。顆粒溶化性好無焦屑，粒度均勻，外觀顏色不均勻，流動性好，吸溼性小，顆粒重量不符合處方要求。處方2號輔料是糊精用量為90g，甘露醇3g，阿司帕坦0.3g。溶化性較差無焦屑，粒度均勻，外觀顏色均勻，流動性好，吸溼性小，顆粒重量符合處方要求。處方3號輔料是糊精用量為50g，甘露醇3g，阿司帕坦0.3g，清膏多輔料少無法制粒。處方4號輔料是糊精用量為20g，甘露醇3g，阿司帕坦0.3g，清膏多輔料少無法制粒。由此確定復元醒腦顆粒的處方為2號。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本技術領域的普通技術人員，在不脫離本發明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為本發明的保護範圍。