一種具有誘導抗性的木黴菌株及其應用的製作方法
2023-05-29 17:31:56
專利名稱：一種具有誘導抗性的木黴菌株及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及ー種具有誘導抗性的木黴菌株及其應用。
背景技術：
化學農藥的大量使用在保障糧食增產增收的同時，也引起了嚴重的環境汙染。隨著人們對化學農藥危害認識的逐漸加強，對環境相容性好的生物農藥的篩選和使用日益受到重視。木黴菌屬於半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，廣泛存在於土壤、根圍、葉 圍、種子等生態環境中，由於木黴菌的廣泛適應性、抑菌廣譜性以及多機制性，本黴被普遍認為能夠代替多種化學農藥的生防因子。早在1932年，Weidling就發現木素木黴對立枯絲核菌等病原菌有拮抗作用，之後經多年的研究，發現該菌對18個屬30多種植物病原菌具有拮抗作用，如立枯絲核菌、錸刀菌、齊整小核菌、核盤菌、疫黴菌、腐黴菌、鏈格孢菌、灰黴菌、毛盤菌、輪枝孢菌、黒星菌等，能有效防治由這些病原真菌引起的立枯病、黃萎病、青枯病、蘋果輪紋病、灰黴病等植物病害。目前成功開發出多種木黴製劑，其中Topshield、Rootshield等土壤處理劑,可以有效地防治作物土傳病害。黃瓜灰黴病是由灰葡萄孢cinerea / /^)引起的一種常見黃瓜病害，該病的發生嚴重影響黃瓜的產量與品質。目前，灰黴病防治主要依賴多菌靈、速克靈等化學藥劑，但由於病菌抗藥性迅速產生，導致農藥用量不斷加大，從而引起農產品和環境的嚴重汙染。利用木黴防治黃瓜灰黴病是一種比較有效的生物防治方法，對降低化學農藥的汙染具有良好的作用。然而，由於木黴製劑是使用的木黴活體，用於防治灰黴病時在葉面噴施後其存活受多種環境因素的影響，致使其對防治葉面病害的效果不理想。因此，有針對性的篩選具有誘導抗性的木黴菌株，使木黴在土壌中施用達到防治葉面病害的效果，是解決目前木黴製劑存在的技術瓶頸的ー種方案。
發明內容
本發明的目的之ー在於提供ー種能夠誘導黃瓜產生對灰黴病系統抗性作用的木黴菌株，本發明的目的之ニ在於提供該木黴菌株在防治黃瓜灰黴病中的應用。為達到上述目的，本發明採取的技術方案
技術方案一
一種具有誘導抗性的木黴菌株(Trichoderma amazonicum)Tr-92,於2012年5月9日保存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區北辰路I號2院)，保藏號為CGMCC No. 6087。技術方案ニ
所述的木黴菌株在防治黃瓜灰黴病中的應用，其是用滅菌草炭吸附所述木黴菌株的分生孢子，使其在滅菌草炭中的含量為O. IXIO9-IXiO9 cfu/g，製成木黴菌劑，將所述木黴菌劑溝施入黃瓜根部土壌，使用劑量為Ikg/畝。
本發明的木黴菌株是通過大量篩選工作篩選得到的，該菌株對黃瓜灰黴病菌具有較強的誘導抗病性；該木黴菌株的微生物菌劑原料易得，使用簡單方便，可減輕黃瓜灰黴病的發病率，降低病情指數，防病效果在50%以上。
具體實施例方式以下結合優選實施例對本發明的技術方案進行詳細地闡述。以下實施例僅僅用於說明和解釋本發明，而不構成對本發明技術方案的限制。實施例I木黴菌株的分離
從植物病害嚴重的土壤中採集土壤樣品，在實驗室內從該土壤樣品中分離出木黴菌，在PDA培養基上進行多次分離純化，得到木黴純培養菌落後，分別在PDA試管斜面中保存。
具體步驟上述土壤樣品來自多年重茬種植、病害嚴重的大棚土壌，將該土壤經梯度稀釋後塗布於木黴選擇性培養基中，培養基的成分如下=MgSO4 ·7Η20 O. 2g/L ；Κ2ΗΡ04 0.9g/L ；KC1 0. 15 g/L ；NH4NO3 I. 0 g/L ;葡萄糖 3. 0 g/L ;氯黴素 0. 25 g/L ;敵磺鈉 0. 3 g/L ；五氯硝基苯0.2 g/L;玫瑰紅0.15 g/L;瓊脂15 g/L，餘量為水；
將分離出的木黴經多次純化得到木黴純培養菌株後，分別在PDA試管斜面保存。實施例2具有誘導抗性木黴菌株的篩選
具體步驟木黴菌株的培養，將篩選出的木黴菌株分別接種到PDA平板中，30°C恆溫培養5天，用無菌水衝洗木黴平板得到木黴孢子懸液，用血球計數板計數並調整其濃度為106cfu/ml ;將保存的灰黴病菌接種到PDA平板，24°C恆溫培養7_10天使用，用無菌水衝洗灰黴菌平板得到灰黴菌孢子懸液，用血球計數板計數並調整其濃度為106cfu/ml。挑選籽粒飽滿的黃瓜種子用無菌水衝洗3次，經55°C恆溫水浴浸泡15min後用溼潤紗布包好放在培養皿中30°C催芽，待大部分種子出芽後挑取出芽情況一致的種子播種於裝有滅菌蛭石的直徑IOcm的塑料花盆中，每盆2粒種子，於20-24°C培養室(光照黑暗周期為16h :8h)進行培養，黃瓜幼苗長出5片真葉後，進行誘導處理。用無菌注射器將木黴孢子懸浮液5ml注入黃瓜植株根部土壌中，以加入5ml滅菌水的為對照。木黴誘導接種48h後，向黃瓜葉片上噴灑灰黴病菌孢子液，接種後保溼培養24h (溼度>90%)。待對照組葉面普遍發病後記錄並統計病情指數，計算防病效果。計算公式如下
病情指數％ = Σ (各級病葉數X病級數)バ調查總葉數X最高病級數)X 100防病效果％ =(對照病情指數一處理病情指數)/對照病情指數X 100。比較各菌株的防病效果，效果最好的木黴菌株(標記為TR-92)為具有誘導抗性能力的木黴菌株(其防病效果見表I )，表I中木黴TR-92對灰黴病菌的防病效果為56.0%。這一結果說明，木黴TR-92施入黃瓜根部，能夠誘導黃瓜幼苗葉部產生抗灰黴病的能力，從而降低了葉部灰黴病的發生。表I木黴誘導對黃瓜幼苗病情指數的影響
權利要求
1.一種具有誘導抗性的木黴菌株(7>icAoofe/maTr_92,其特徵在於其保藏號為 CGMCC No. 6087。
2.權利要求I所述的木黴圃株在防治黃瓜灰黴病中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特徵在於用滅菌草炭吸附所述木黴菌株的分生孢子，使其在滅菌草炭中的含量為0. IXIO9-IXiO9 cfu/g，製成木黴菌劑，將所述木黴菌劑溝施入黃瓜根部土壤，使用劑量為Ikg/畝。
全文摘要
本發明提供了一種保藏號為CGMCCNo.6087的木黴菌株(Trichodermaamazonicum)，還提供了該木黴菌株在黃瓜灰黴病防治中的應用。本發明提供的保藏號為CGMCCNo.6087的木黴菌株對黃瓜灰黴病具有較好的誘導抗性，將該菌株製成的微生物菌劑應用在蔬菜種植環境中後，通過該木黴在土壤中的定植和繁殖，特別是在黃瓜根部中的定植，能夠誘導黃瓜對灰黴病的抗病性，降低黃瓜生產過程中化學農藥的施用。
文檔編號A01P3/00GK102676403SQ20121017075
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月29日 優先權日2012年5月29日
發明者尹淑麗, 崔冠慧, 張麗萍, 張根偉, 李書生, 杜曉哲, 段普凡, 王淑霞, 程輝彩, 黃亞麗 申請人:河北省科學院生物研究所