一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方法
2023-05-30 06:36:51 1
一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方法。其配方在於，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈黴素。製備時採用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法製備的卵黃抗體口服液不僅使生產過程中損失少、免疫活性物質強多、生物活性高、無臨床副作用，同時，含有蛋清中大量的各種蛋白質，可以減少口服時對抗體的不良影響。
【專利說明】一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於豬用生物製品【技術領域】，涉及一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方 法。
【背景技術】
[0002] 豬瘟俗稱"爛腸瘟"，是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV)引起的一種急 性、發熱、接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性。主要特徵是高溫、微血管變性而引起全 身出血、壞死、梗塞。豬瘟於1885年首先在美國發現，隨後傳播到世界各大洲。1903年美國 獸醫學家德希尼茲和多賽特鑑定該病的病原是黃病毒科的瘟病毒屬（Pestivirus)中的豬 瘟病毒，主要通過直接接觸或接觸汙染的媒介物而發病；消化道、鼻腔黏膜和破裂的皮膚均 是感染途徑。
[0003] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相當於哺乳動物IgG，但結構 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構象。卵黃抗體具有很多優越性。（1)由於鳥 類與哺乳類動物種系發生學的差距，鳥類更適於生產抗哺乳動物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會激發補體系統，不與抗哺乳動物抗原的抗體發生反應，不與哺乳動物和細菌的Fc 受體結合，這在免疫診斷中具有重要意義。（2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白，在貯存、生產、加工、攝食及消化過程中保證其穩定性是非常關鍵的。多項試驗表明，IgY 具有較好的穩定性，耐酸、耐鹼、耐熱。卵黃抗體較易保存，4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個月對抗體活性無明顯影響。
【發明內容】
[0004] 本發明提供一種豬瘟病卵黃抗體口服液及其製備方法，解決注射用的豬瘟病卵黃 抗體使用不方便的問題。
[0005] 本發明的目的是通過以下形式實現的： 一種豬瘟病卵黃抗體口服液，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體的全蛋水 溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單位/毫升 口服液的青鏈黴素。
[0006] 製備步驟是： 1) 採用豬瘟細胞滅活疫苗對雞隻進行強化免疫：採用三次免疫程序，每次間隔10天， 每隻雞每次疫苗用量為2ml，當抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然後加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水,鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻後，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，然後靜置10-12h，過濾； 其中辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈黴素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0· 2-0. 3) : (0· 2-0. 3) : (0· 01-0. 02)，青鏈黴素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
[0007] 步驟4)過濾時依次通過I. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
[0008] 本發明通過對高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理後得到澄清卵黃抗體口 服液。本發明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中，可以直接在臨床上進行口服使用，蛋清中含 有大量的各類蛋白質，可充分利用高免蛋的價值，提高動物機體的免疫力和應激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影響的優點。
【具體實施方式】 [0009] 實施例1 : 一種豬瘟病卵黃抗體口服液的配方包括以下原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液105 L、辛 酸0. 2 L、甲醛0. 3 L、硫柳汞0. 02 L，以及1000單位/毫升口服液的青鏈黴素。
[0010] 其製備方法包括以下步驟： 1)採用市售的豬瘟細胞滅活疫苗進行強化免疫，每隻雞每次疫苗用量為2ml，每次間隔 10天，進行三次免疫程序，當抗體效價達到I :256時，開始收集高免蛋。
[0011] 2)將收集高免蛋整理，0. 2%新潔爾滅消毒，備用。
[0012] 3)水稀釋法酸化處理：將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內進行充分乳化，乳化時 間7min，然後將乳化後的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍，混勻，放置4°C環境中18小時靜置沉澱，取上清液；其中，鹽酸酸化 水是在水中加入鹽酸使其PH值達到4. 2。
[0013] 4)辛酸處理；將步驟3)的上清液，即含卵黃抗體的全蛋水溶液進行稱量，升溫到 25°C，加入辛酸，充分混勻lh，然後靜置IOh ;其中，按體積比，上層清液：辛酸=105 :0. 2 ; 5) 對步驟4)所得澄清液依次用I. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過濾，留取濾液； 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈黴素；按體積比，含卵黃抗體的全蛋全 蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=105 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈黴素在該口服液中的含量為1000 單位/毫升； 7) 分裝，保存。
[0014] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期，做了以下試驗：將本品保存在 37°C培養箱中，保存24個月，分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 後，用瓊脂擴散(AGP)法，測定每個時間點取樣品的卵黃抗體效價變化，結果見表1。
[0015] 表1.常溫放置口服液不同時間段效價的變化
【權利要求】
1. 一種豬瘟病卵黃抗體口服液，其特徵在於：包括以下按照體積比計算的原料：含 卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括 800-1000單位/暈升口服液的青鏈黴素。
2. -種如權利要求1所述豬瘟病卵黃抗體口服液的製備方法，其特徵在於具體步驟 是： 1) 採用豬瘟細胞滅活疫苗對雞隻進行強化免疫：採用三次免疫程序，每次間隔10天， 每隻雞每次疫苗用量為2ml，當抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然後加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻後，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，然後靜置10-12h，過濾； 其中辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈黴素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈黴素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
3. 根據權利要求2所述的豬瘟病卵黃抗體口服液的製備方法，其特徵在於：步驟4) 過濾時依次通過1. 〇mm、〇. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
【文檔編號】A61P31/14GK104491861SQ201410762716
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月14日 優先權日:2014年12月14日
【發明者】徐進, 劉應鵬, 郭俊清 申請人:鄭州后羿製藥有限公司