唾液穩定試劑的製作方法
2023-05-29 16:16:36
專利名稱：：唾液穩定試劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種唾液穩定試劑。
背景技術：
：人類幾乎所有系統在生理紊亂和疾病感染時體液都會出現某些變化，包括血液、尿液、唾液、淚液、汗液和精液等。這些改變可以通過可溶性離子、酶和其他蛋白質的常見特徵加以證實，也可以由特異性免疫球蛋白、抗原和核酸的存在加以證實。檢測這些體液的特異性改變也就提供一種診斷的手段，在需要的時候可以幫助臨床醫生作出特異性治療的決定。目前，大多數疾病的診斷依靠分析血液或尿液，但血液的採集必須採用侵入式手段如針刺，採血過程中有不安全因素存在，一定程度上在操作使用中可能會給受檢對象帶來血液交叉汙染的可能，而在進行大面積人群篩查傳染性疾病檢測中更存在著諸多不方便操作因素。而尿液中分析物濃度也不能經常反應血中分析物的活性。尿液抗體檢測試劑(酶聯法)的準確性在實驗室的條件下綜合準確性可以達到96%--97%，在非實驗室條件下，尿液檢測的準確性將得不到保障，甚至會出現同一個人、同一天檢測有兩種不同檢測結果的情況。除了血液，相對於其他體液而言，唾液是最合適的樣品來源，其特點是容易採集、隱私性強、穩定以及量可以滿足要求。在未來檢測人體傳染性疾病標本中人體唾液標本將逐漸替代人體血液標本。這是從創傷性的血液檢測人體傳染性標本過渡到非創傷性檢測人體傳染性標本的一次革命性改進，其意義除了避免因採集血液標本時發生的血液交叉汙染事件、為特殊傳染性疾病在特種場合下進行快速初步篩査提供了更為便利的測試手段外，還有利於預防控制特殊傳染性疾病的傳播。唾液的獲得是非侵入性的直接方式。唾液成分很複雜，其中99%是水，有機物主要是唾液澱粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，無機物有鈉、鉀、鈣、氯和硫氰離子等，還可含有一些外源物質，如微生物，藥物和毒物。故唾液除用於口腔內環境和唾液腺功能檢査外，尚可用於某些全身性、代謝性、傳染性疾病的實驗診斷以及藥物的監測、藥物中毒的急診檢驗等。含免疫球蛋白的唾液還可用於各種疾病的診斷，特別是檢測對病原菌產生的抗原具有特異性的IgG，可預示感染或新近的接觸。由於唾液中被分析物含量較低，為了保證唾液取樣後能長期保存且不影響檢測結果，有必要對唾液中的被分析物進行穩定。
發明內容本發明的目的在於針對唾液成分的複雜性，提供一種能長時間穩定唾液中被分析物的唾液穩定試劑。本發明的目的是這樣實現的本發明由緩衝液、防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉組成，緩衝液的濃度為0.01-0.1mol/L，pH值為7.1-7.3，防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉的用量按其質量與緩衝液的體積比為，防腐劑為0.01%-4%W/V，蛋白穩定劑為0.1%-5%W/V，氯化鈉為0.5-5%W/V;唾液穩定試劑的pH值為7.1-7.3。本發明中的緩衝液優選磷酸鹽緩衝液(PBS)、巴比妥緩衝液、巴比妥一氯化鈉緩衝液、硼砂—氯化鈣緩衝液或枸櫞酸—磷酸氫二鈉緩衝液。本發明中的防腐劑優選脫氫醋酸鈉、硫柳汞、雙乙酸鈉、醋酸鈉、丙酸鈣、羥苯乙酯中的一種或多種。本發明中的蛋白穩定劑優選氨基己酸、葡萄糖、麥芽糖、牛血清白蛋白(BSA)中的一種或幾種。本發明的唾液穩定試劑主要用於穩定唾液中被分析物，被分析物可以是一種特異的免疫球蛋白例如IgG，特異的免疫球蛋白來自於HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、麻疹、腮腺炎或風疹等。所述被分析物還可以是一種腫瘤標誌物。本發明的技術效果是唾液是源自口腔內各種腺的分泌物的複雜混合物，其中很多組分是各種酶、免疫球蛋白和粘蛋白以及細胞碎片與細菌。由於唾液比較粘稠，其粘度使唾液的流動性降低，延長了檢測時抗原抗體的結合，有可能導致錯誤的檢測結果，為了不影響被分析物如IgG或腫瘤標誌物等的檢出，本發明通過緩衝液來改變唾液的粘度，並將緩衝液的PH值控制在7.l-7.3之間。唾液中含有細菌不利於唾液樣本的長期保存，本發明在緩衝液中加入一定量的防腐劑可以有效抑制唾液樣本中的細菌生長。在唾液樣本保存的過程中，為了提高被分析物的再生，本發明加入一定量的氯化鈉可以提高免疫球蛋白摺疊的修復。本發明中的蛋白穩定劑可以保護被分析物不被降解，以達到長期保存唾液中被分析物的目的。圖1是HIV抗體在不同溶液中隨時間變化的曲線圖。具體實施例方式實施例一按常規方法配製濃度為0.01mol/L、PH值為7.2的磷酸鹽緩衝液(即PBS)500ml，然後在該磷酸鹽緩衝液中加入5g的氯化鈉(其用量為1%W/V，按其質量與緩衝液的體積比來計算，以下所說的用量均是按此方式計算)、0.5g的雙乙酸鈉(用量為0.19&W/V)和lg的氨基己酸(用量為0.2y。W/V)，然後用氫氧化鈉或鹽酸調pH值為7.2，即得pH值為7.2的唾液穩定試劑。本發明的唾液穩定試劑室溫保存。利用唾液收集裝置收集HIV(或HBV、HCV)待檢唾液，並將收集的唾液按1:1的體積比加入上述所配製的唾液穩定試劑中，唾液中被分析物可在室溫中保存一個月。為了檢測唾液穩定試劑的功效，我們以水+HIV陽性唾液和HIV陽性抗體作為對照，用ELISA方法檢測了唾液穩定試劑在33天內對唾液中HIV抗體的穩定情況。33天內IO次測得的吸光值(OD)見下表和圖1。complextableseeoriginaldocumentpage8可見HIV陽性唾液在加入唾液穩定試劑後抗體活性得到了很好的保護。實施例二按常規方法配製濃度為0.01mol/L、pH值為7.2的巴比妥緩衝液500ml，然後在該緩衝液中加入10g的氯化鈉(其用量為2%W/V)、10g的脫氫醋酸鈉(用量為2%W/V)和0.5g的牛血清白蛋白(BSA)(用量為0.W。W/V)，然後用氫氧化鈉或鹽酸調pH值為7.2，即得pH值為7.2的唾液穩定試劑。實施例三按常規方法配製濃度為0.1mol/L、pH值為7.1的硼砂一氯化鈣緩衝液500ml，然後在該緩衝液中加入2.5g的氯化鈉(其用量為0.5%W/V)、20g的硫柳汞(用量為4%W/V)和25g的葡萄糖(用量為5%W/V)，然後用氫氧化鈉或鹽酸調pH值為7.1，即得pH值為7.1的唾液穩定試劑。實施例四按常規方法配製濃度為0.05mol/L、pH值為7.3的枸櫞酸—磷酸氫二鈉緩衝液500ml，然後在該緩衝液中加入25g的氯化鈉(其用量為5%W/V)、0.05g的羥苯乙酯(用量為0.01%W/V)和5g的麥芽糖(用量為1%W/V)，然後用氫氧化鈉或鹽酸調pH值為7.3，即得pH值為7.3的唾液穩定試劑。權利要求1.一種唾液穩定試劑，其特徵在於由緩衝液、防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉組成，緩衝液的濃度為0.01-0.1mol/L，pH值為7.1-7.3，防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉的用量按其質量與緩衝液的體積比為，防腐劑為0.01％-4％W/V，蛋白穩定劑為0.1％-5％W/V，氯化鈉為0.5-5％W/V；唾液穩定試劑的pH值為7.1-7.3。2.根據權利要求1所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、巴比妥緩衝液、巴比妥一氯化鈉緩衝液、硼砂一氯化鈣緩衝液或枸櫞酸一磷酸氫二鈉緩衝液。3.根據權利要求1所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述防腐劑選自脫氫醋酸鈉、硫柳汞、雙乙酸鈉、醋酸鈉、丙酸轉、羥苯乙酯中的一種或多種。4.根據權利要求1所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述蛋白穩定劑選自氨基己酸、葡萄糖、麥芽糖、牛血清白蛋白中的一種或幾種。5.根據權利要求1至4任一權利要求所述的唾液穩定試劑，其特徵在於用於穩定唾液中被分析物。6.根據權利要求5所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述被分析物是一種特異的免疫球蛋白，來自於HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、麻疹、腮腺炎或風疹。7.根據權利要求6所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述特異的免疫球蛋白是IgG。8.根據權利要求5所述的唾液穩定試劑，其特徵在於所述被分析物是一種腫瘤標誌物。全文摘要本發明為一種唾液穩定試劑，由緩衝液、防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉組成，緩衝液的濃度為0.01-0.1mol/L，pH值為7.1-7.3，防腐劑、蛋白穩定劑、氯化鈉的用量按其質量與緩衝液的體積比為，防腐劑為0.01％-4％W/V，蛋白穩定劑為0.1％-5％W/V，氯化鈉為0.5-5％W/V；唾液穩定試劑的pH值為7.1-7.3。本發明可以長期保存唾液中被分析物。文檔編號G01N33/50GK101196515SQ20071012557公開日2008年6月11日申請日期2007年12月28日優先權日2007年12月28日發明者方強宗申請人:深圳長今生物科技有限公司