二聚兔耳風萜a在製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物中的應用的製作方法
2023-06-23 10:45:46 3
專利名稱：二聚兔耳風萜a在製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物，具體涉及大頭兔耳風提取物在製藥中的應用，尤其涉及化合物二聚兔耳風萜A在製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物中的應用。
背景技術：
NF- κ B細胞核轉錄因子最早是從B細胞的核抽提物中發現的一種能與免疫球蛋白κ鏈基因的增強子κΒ序列(GGGACTTTCC)特異性結合的核蛋白因子，因而稱為NF-κ B。 此因子與κ序列的特異性結合後，促進κ輕鏈基因的表達。但後來越來越多的證據表明， 這一因子可啟動眾多基因轉錄。調節包括細胞因子和炎症介質在內的眾多蛋白質表達，從而參與調節細胞的生理、病理反應。NF-KB的異常激活和很多疾病相關，例如惡性腫瘤、白血病、自身免疫性疾病、腎臟疾病、心腦血管疾病、各種炎症、神經變形性疾病、眼科疾病發生時，其病變細胞均存在 NF- κ B的異常激活。因此NF- κ B已成為一個重要的藥物作用靶點。針對NF- κ B激活途徑中的不同環節為靶點進行拮抗，可以治療與之相關的疾病。在白血病、實體瘤等的細胞中，NF-K B往往通過遺傳學改變或信號轉導異常而持續性激活。近年來的研究發現，NF-K B在白血病、實體瘤等的發生發展過程中具有重要且複雜的作用。總的來說，NF-K B的異常激活可導致一系列與惡性腫瘤相關基因的異常表達，從而抑制惡性細胞凋亡、促進腫瘤新生血管形成、誘導惡性腫瘤細胞耐藥等。NF-K B已成為抗腫瘤、白血病藥物研究的一個重要靶點，NF-κ B抑制劑的研究為白血病治療提供了一種新的選擇，將NF- κ B抑制劑和傳統放化療配合應用。由於其本身即有的抗白血病活性，又能顯著降低白血病細胞對化療藥物的耐藥性，因而，在白血病治療方面有著很好的應用前景。兔耳風屬(AinsliaeaDC)植物是菊科(Compositae)帚菊木族(Mutisieae Cass) 中的一屬，全世界70餘種，中國有44種4變種，約佔總數的37. 5%，主要分布在長江流域及西南華南各省。兔耳風屬植物藥用種類較多，已廣泛用於治療感冒咳喘、風溼痺痛、跌打損傷、泌尿系統疾病等症。《上海市藥材標準》、《江西省中藥材標準》、《雲南省藥品標準》、《衛生部藥品標準》均有收載。對兔耳風屬植物的化學成分研究始於20世紀80年代，主要集中在杏香兔耳風和械葉兔耳風上。但對大頭兔耳風(Ainsliaea macrocephala)化學成分的研究幾乎沒有。據報導兔耳風屬植物主要含有倍半萜內酯、倍半萜苷、留體、三萜類化合物， 研究表明倍半萜內酯具有很好的抗腫瘤活性。且現代藥理及臨床應用表明該屬植物有很好的抗炎作用。大頭兔耳風產於中國雲南西北部和四川西南部，生於山坡林緣、針葉林下或山脊灌叢中，海拔沈00 3100米，為多年生草本。《中國植物志》對大頭兔耳風的形態特徵進行了詳細的描述。化合物二聚兔耳風萜A(Ainsliaidimer A)是從生長於中國雲南麗江的
大頭兔耳風中提取分離得到的，其化學結構式I如下
權利要求
1. 二聚兔耳風萜A在製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物中的應用，其特徵在於，二聚兔耳風萜A的化學結構式如下
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述二聚兔耳風萜A通過下列方法製備(1)提取將大頭兔耳風全草，粉碎，以80 95%乙醇回流提取1 3次，每次1 2 小時，提取液減壓濃縮成流浸膏，加水稀釋後先以石油醚萃取，再以乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部位；(2)分離將上述乙酸乙酯部位應用矽膠柱層析，以體積比為20 0 4 1的氯仿-甲醇系統梯度洗脫，薄層層析檢測，收集含二聚兔耳風萜A的流分，再經葡聚糖凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇洗脫，最後經C18反相柱層析，以體積比為4 6 6 4的甲醇-水進行洗脫，薄層層析檢測，得二聚兔耳風萜A。
3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述藥物是由二聚兔耳風萜A作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
全文摘要
本發明提供了化合物二聚兔耳風萜A在製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物中的應用。本發明人採用凝膠遲滯電泳分析(EMSA)檢測NF-κB的活性、免疫發光法檢測NF-κB在細胞中的分別、Western blot法檢測二聚兔耳風萜A作用HL-60細胞中NF-κB的表達、Western blot法檢測二聚兔耳風萜A作用後淋巴瘤細胞CA46細胞中凋亡相關蛋白的表達、ELISA法檢測二聚兔耳風萜A對HL-60細胞分泌VEGF的影響等實驗。結果顯示，二聚兔耳風萜A對腫瘤細胞異常激活的NF-κB活性有很好的抑制作用。因此，可以作為活性成分，用於製備細胞核轉錄因子抑制劑藥物。本發明所述藥物可作為治療NF-κB因子異常激活引起動物和人的白血病、自身免疫性疾病、腎臟疾病、心腦血管疾病、各種炎症、神經變形性疾病、眼科疾病的新用途，為治療這些疾病提供了新的途徑，有較大的臨床應用價值。
文檔編號A61K31/365GK102319239SQ20111019110
公開日2012年1月18日 申請日期2011年7月8日 優先權日2011年7月8日
發明者劉慧 , 單磊, 張衛東, 徐希科, 李慧梁, 柳潤輝, 沈雲亨, 蘇娟 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學