一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途的製作方法

2023-05-27 15:29:11 4

專利名稱：一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途，特別是含卡那黴素和鈣離子的聚肌胞複合物的抗腫瘤作用。
背景技術：
聚肌胞(PIC)是由人工合成的PolyI和PolyC配對後的雙鏈產物，是一種高效幹擾素誘生劑，具有廣譜抗病毒、刺激吞噬、調整機體免疫、抗腫瘤、抗某些細菌和原蟲感染等功能。國產聚肌胞無明顯毒副作用，已在臨床用於治療病毒感染性疾病。已有大量文獻報導，聚肌胞能夠通過誘生幹擾素和協調免疫細胞的功能來起到對腫瘤的抑制作用，對小鼠肉瘤S180，Lewis肺癌、小鼠肝癌和前列腺癌等都有明顯的抑制作用。一般認為，聚肌胞抗腫瘤的機制主要有如下幾點(1)蛋白激酶激活蛋白激酶的活化依賴dsRNA的長度，一般蛋白激酶的完全激活大約需要80個核苷酸的dsRNA。長鏈dsRNA進入細胞後，細胞內IFN的產生增加，蛋白激酶被激活，活化的蛋白激酶進一步使翻譯起始因子EIF2 α磷酸化失活，造成翻譯的停滯，最終通過凋亡和抑制蛋白合成破壞細胞。(2) RNaseL的激活2』 5』 -寡腺苷酸聚合酶是非特異性核糖核酸酶RNaseL的輔助因子，長鏈dsRNA可以激活2』 5』 -寡腺苷酸聚合酶，而2』 5』 -寡腺苷酸聚合酶又能活化細胞中處於潛伏狀態的RNaseL，後者被活化後可非特異地切割mRNA。只要有長鏈dsRNA的存在它可以降解所有的RNA，抑制所有蛋白質的合成，最終導致細胞死亡。(3)激活腺苷酸環化酶，提高環磷腺苷水平。(4)增強NK細胞和巨噬細胞的活性。(5)促進IL-2、IL-6、IL-8和TNF- α的分泌，協同發揮抗致瘤病毒引起的腫瘤作用。目前，聚肌胞誘導細胞凋亡、抑制腫瘤生長的研究越來越受到重視。然而，聚肌胞易受體內RNA酶的降解而失去作用。因此，研究聚肌胞新的製劑處方，增加聚肌胞的穩定性，使聚肌胞免受RNA酶的降解變得尤為重要。

發明內容
本發明的目的是提供一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途。本發明一方面提供了一種含有卡那黴素和鈣離子的聚肌胞複合物的製備方法，採用了新的製劑配方，在Pic的基礎上加入少量卡那黴素及鈣離子，研製出新的聚肌胞複合物，這種聚肌胞複合物的優點在於有較好的穩定性，可以抵抗RNA酶對其的降解，使其能發揮抗腫瘤作用。PIC是大分子的聚陰離子，卡那黴素是多胺基化合物，帶正電荷，與PIC聚陰離子結合，穩定了 PIC雙鏈結構，可以在一定程度上抵抗核酸酶的降解。通過電子顯微鏡觀察， 聚肌胞加入卡鈉黴素後能形成網狀或樹枝狀結構，說明卡那黴素的加入不僅中和了 Pic聚陰離子的負電荷，而且將PIC短鏈結合成長鏈，形成了一種新的結合物。在PIC中加入鈣離子，可增加其對細胞的通透性和結合力，大大增加誘生的幹擾素產量，可以充分發揮其藥效。本發明另一方面提供了一種聚肌胞複合物的抗腫瘤作用，所述聚肌胞複合物包含聚肌苷酸、聚胞苷酸、卡那黴素和鈣離子。本發明者們進行認真研究後發現，聚肌胞複合物確實對腫瘤有抑制作用，並且無毒性反應。
具體實施例方式本發明涉及含卡那黴素和鈣離子的聚肌胞複合物的抗腫瘤作用研究，通過以下實例具體實施實例1聚肌胞複合物對小鼠肉瘤(S180)的抑制作用(1)實驗方法小鼠肉瘤(S180)離體細胞系液氮復甦後，經多次傳代培養，消化離心，以107 ml的細胞濃度(0. 2ml)接種於健康KM小鼠皮下，15天後形成一釐米大小實體腫瘤，斷頸處死裸鼠，70%酒精浸泡1分鐘，無菌條件下剝離腫瘤，剪切成Imm3大小的組織塊，選擇新鮮無壞死的腫瘤組織，以生理鹽水洗五遍，組織勻漿器輕輕研磨至細胞懸液，150目細胞篩過濾，活瘤細胞計數，配製瘤細胞懸液，細胞濃度為1 X 107ml，每鼠右側腋窩皮下接種 0. Iml(IXlOVml)。(2)實驗結果
動物組編號藥物名稱接種部位體重(g) 瘤重(g)脾重(g)腫瘤抑制率(％) 1號生理鹽水肌肉注射 19. 9 1. 84 0. 16
2號聚肌胞複合物靜脈注射 21.6 0.99 0. 1746. 20
3號聚肌胞複合物肌肉注射 19.97 0.90.1851. 10
4 號fi^jyt 舒脈注射 19.87 L23 O·1433.20實例2聚肌胞複合物對小鼠肝癌(H22)細胞的抑制作用(1)實驗方法小鼠肝癌(H22)離體細胞系液氮復甦後，經多次傳代培養，消化離心，以107ml 的細胞濃度(0. 2ml)接種於健康KM小鼠皮下，15天後形成一釐米大小實體腫瘤，斷頸處死裸鼠，70%酒精浸泡1分鐘，無菌條件下剝離腫瘤，剪切成Imm3大小的組織塊，選擇新鮮無壞死的腫瘤組織，以生理鹽水洗五遍，組織勻漿器輕輕研磨至細胞懸液，150目細胞篩過濾，活瘤細胞計數，配製瘤細胞懸液，細胞濃度為1 X 107ml，每鼠右側腋窩皮下接種 0. lml(lX106/ml)。(2)實驗結果
權利要求
1.一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途，其特徵是採用了新的製劑配方，在聚肌胞的基礎上加入卡那黴素和鈣離子。
2.—種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途，根據權利要求1所述，其特徵是一種含卡那黴素和鈣離子的聚肌胞複合物的製備方法。
3.—種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途，根據權利要求1所述，其特徵是對腫瘤生長具有抑制作用。
全文摘要
本發明涉及一種聚肌胞複合物的製備方法及其新用途。在聚肌胞的基礎上加入卡那黴素和鈣離子，增強了聚肌胞雙鏈RNA的穩定性。經動物實驗結果表明，本發明的聚肌胞複合物具有抑制腫瘤生長的作用。
文檔編號A61K33/06GK102488707SQ20111042006
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者侯本晶, 沈麗麗, 焦月, 王國新, 王智佳 申請人:天津濟命生生物科技有限公司