一種新型卵黃抗體及其製備方法
2023-06-17 05:34:31
一種新型卵黃抗體及其製備方法
【專利摘要】本發明涉及一種新型卵黃抗體及其製備方法屬於業獸用生物製品領域，本發明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精製生產工藝和用途。本發明採用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來，且純化濃縮過程不會對卵黃抗體產生破壞作用，不影響產品生物潔性：其方法包括：蛋雞的免疫、卵黃抗體的提取、卵黃抗體的純化和卵黃抗體的乾燥。所提供卵黃抗體主要用於檢測、預防和治療多類禽流感病毒感染，以及因為毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。
【專利說明】一種新型卵黃抗體及其製備方法【技術領域】
[0001]本發明屬於動保行業獸用生物製品領域，所提供卵黃抗體主要用於檢測、預防和治療多類禽流感病毒感染，以及因為毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。
[0002]禽流感是"禽流行性感冒"的簡稱，是由A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，又稱"真性雞瘟"或"歐洲雞瘟"。臨床主要表現為急性高致死性，產蛋量下降，輕度呼吸系統疾病等。禽流感是全世界範圍內的禽類傳染病，因對養禽業造成的毀滅性經濟損失，而被視為嚴重威脅家禽養殖業的頭號傳染病，100多年來人類尚未發現有效的預防和治療方法。禽流感還是一種禽畜和人共感病，對人類健康存在巨大威脅。
[0003]從2003年12月開始，由H5N1禽流感病毒引起的高致病性禽流感突襲亞洲，在不到2個月的時間內，席捲了韓國、日本、越南、泰國、柬埔寨、寮國、中國和印度尼西亞等8個東亞和南亞國家。此次禽流感流行的規模之大、地理分布範圍之廣、破壞程度之深在人類養禽業歷史上均是史無前例的。當前，禽流感在世界局部地區仍然活躍，疫情範圍裡繼續擴大之勢。據不完全統計，從2003年到現在，僅亞洲各國死亡或淘汰的禽只總數大約，15億隻，全球已有超過1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人數已接近700人。
[0004]當前，已開發出多種治療禽流感的藥物，並制定出許多可行防控方案，且取得顯著效果。但禽流感病毒在傳染過程中，不斷發生變異，使許多之前的有效防控方案失效。本發明所提供的卵黃抗體含多種抗體， 對多種禽流感毒株所引起的感染有效，可降低因為毒株變異而導致防控失敗的機率。
[0005]當前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產品活性低。
【發明內容】
[0006]本發明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精製生產工藝和用途。本發明採用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來，且純化濃縮過程不會對卵黃抗體產生破壞作用，不影響產品生物活性。
[0007]一種新型卵黃抗體及其製備方法，其生產過程如下:
1、挑選高品質蛋雞雞茵進行淨化飼養，為生產免疫蛋做準備；
2、產蛋期開始後，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化疫
苗；
3、收集免疫雞蛋並保存，為提取卵黃抗體做準備；
4、收集蛋黃按1:10的比例加入蒸餾水並攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調節蛋黃液PH值到5.5, IO0C靜置14小時，回收上清液；
5、將含卵黃抗體的蛋黃土清液進行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮將回收的卵黃土清液通過0.45 μ m和0.22 μ m的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.5L/min的流速經過截留分子量分別150KD和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時回收濃縮液；6、將卵黃濃縮液進行冷凍乾燥，製成凍乾粉將回收的卵黃土清液通過0.45 μ m和0.22 μ m的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.5L/min的流速經過截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時回收濃縮液；
7、利用卵黃抗體凍乾粉配製臨床適用的卵黃抗體製品檢測卵黃濃縮液中抗體含量，分別按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性澱粉，混合均勻後無菌分裝到滅菌西林瓶，-400C冷凍乾燥，製成卵黃抗體凍乾粉製劑。
[0008]本方法利用蛋白質的等電點特性，通過沉陣法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結構，充分保護了卵黃抗體的生物活性。所生產的卵黃抗體純度高、活性強。
[0009]本發明所提供的卵黃抗體含多種抗體，用於檢測、預防和治療多類禽流感病毒感染，以及由毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。
實施例[0010]1:蛋雞的免疫
選擇健康蛋雞，在170日齡時進行首免H5、H7、H9型禽流感弱化疫苗，接種方式為胸肌多點注射。並分別在首免14天和28天時進行強化免疫。強化免疫後7天開始檢測免疫雞蛋中卵黃抗體水平，合格後開始收集免疫雞蛋。
[0011]2:卵黃抗體的提取
使用蛋黃篩將蛋黃從免疫雞蛋中分離，按1:10的比例加入蒸餾水並攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調節蛋黃液PH值到5.0，8 OC靜置12小時，回收上清液。
[0012]3:卵黃抗體的純化
將回收的卵黃上清液通過0.45 μ m和0.22 μ m的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.5L/min的流速經過截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時回收濃縮液。
[0013]4:卵黃抗體的乾燥
檢測卵黃濃縮液中抗體含量，分別按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性澱粉，混合均勻後無菌分裝到滅菌西林瓶，-40°C冷凍乾燥，製成卵黃抗體凍乾粉製劑。
[0014]以上實施例僅為了對本發明作進一步的說明，而本發明的範圍不受所舉實施例的局限。
[0015]部分實驗結果報告:一種新型卵黃抗體精製工藝及其用途的試驗報告選用臨床診斷為溫和性禽流感的病雞5500隻，隨機挑選40隻最為空白對照，其餘平均分為A、B兩組。網上平養，保持乾淨，及時通風，做好記錄。飼料參考NRC肉雞飼養標準，配製基礎日糧，自由採食，自由飲水，統一管理。A組添加本卵黃抗體凍乾粉製劑，按1:100的比例兌水飲用組為黃瓦多糖注射液(抗病毒I號注射液)，按每50ml兌水Ikg自由飲用；C組為空白對照組。
【權利要求】
1.一種新型卵黃抗體及其製備方法，其生產過程如下: (1)、挑選高品質蛋雞雞茵進行淨化飼養，為生產免疫蛋做準備； (2)、產蛋期開始後，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化苗； (3)、收集免疫雞蛋並保存，為提取卵黃抗體做準備 (4)、收集蛋黃按1:10的比例加入蒸餾水並攪拌20分鐘，配成均勻蛋黃液，調節蛋黃液PH值到5.5，10°C靜置14小時，回收上清液； (5)、將含卵黃抗體的蛋黃土清液進行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮將回收的卵黃土清液通過0.45μπι和0.22 μ m的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.5L/min的流速經過截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為I/20時回收濃縮液； (6)、將卵黃濃縮液進行冷凍乾燥，製成凍乾粉將回收的卵黃土清液通過0.45 μ m和0.22μπι的串聯過濾系統過濾，再將過濾液4.5L/min的流速經過截留分子量分別為150KD和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為I/ 20時回收濃縮液； (7)、利用卵黃抗體凍乾粉配製臨床適用的卵黃抗體製品。
2.根據權利要求1所述一種新型卵黃抗體，可將卵黃抗體製成粉劑、溶液劑、噴霧劑、注射液、注射用凍乾粉等臨床適用劑型。
【文檔編號】C07K16/02GK103613665SQ201310584165
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月20日 優先權日:2013年11月20日
【發明者】不公告發明人 申請人:青島農業大學