從藏藥獨一味中提取總環烯醚萜苷的方法及其用途的製作方法
2023-05-26 09:50:06
專利名稱：從藏藥獨一味中提取總環烯醚萜苷的方法及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及中草藥有效成分的提取工藝，尤其涉及一種從藏藥獨一味中提取總環烯醚萜苷的工藝，同時本發明還涉及該提取物作為止血活性成分的應用。
背景技術：
獨一味為唇形科獨一味屬植物獨一味[Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo]的全草或根，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用藥之一。其味苦，微寒、有小毒、入口久則金如土，有麻痺感，具有止血、鎮痛消腫、活血化瘀、補髓、行氣、續筋接骨之功效。《晶珠本草》記載「固精髓，引流黃水」。《青藏高原藥物圖鑑》記載「補髓，止血，治浮腫後流黃水，關節積黃水，骨松質發炎」。
以藏藥獨一味為主要成分研製開發的藥物已見報導(2000版《中國藥典》收載獨一味膠囊)，並實現工業化生產，臨床廣泛應用於各種外科手術後的鎮痛止血及牙科、婦科、關節炎等方面；對藥用獨一味中各成分提取工藝的研究報導的較少。獨一味藥物具有止血功能，但由於其中的止血活性成分一直未能明確，因此止血療效未能充分發揮。
對於天然產物的水溶性成分的提取分離，大孔樹脂吸附法是一種非常有效的工業化生產方法，但利用大孔吸附樹脂柱從獨一味藥物中提取總環烯醚萜苷的工業化生產方法，目前尚未見國內外有關文獻和專利報導。
發明內容
本發明的目的是為了提供一種從傳統藏藥獨一味中提取總環烯醚萜苷的工藝。
本發明的另一目的是提供上述提取物總環烯醚萜苷作為止血活性成分中的應用。
本發明的目的是通過以下措施實現1、一種總環烯醚萜苷的提取方法，包括以下工藝步驟①將乾燥、粉碎的獨一味植物用4-8倍量、濃度為0-95％的乙醇溶液在20-70℃下溫浸提取，過濾、濃縮至浸膏狀；②用10-15倍量、溫度為30-90℃的熱水溶解上述浸膏狀物，冷卻、過濾除去脂溶性成分得提取液；③將提取液緩慢流過經乙醇洗脫處理過的聚醯胺柱，再使母液緩慢流過經乙醇洗脫處理過的大孔樹脂柱；④先以蒸餾水衝洗上述大孔樹脂柱，再用濃度為10-95％的乙醇溶液衝洗大孔樹脂柱，收集乙醇洗脫液、減壓濃縮、真空乾燥得總環烯醚萜苷產物。
步驟①中所述的溫浸提取可反覆多次。
步驟③中，提取液流過聚醯胺柱後，用蒸餾水衝洗聚醯胺柱，並將洗脫液與所述母液混合後，再上所述大孔樹脂柱。
所述提取物總環烯醚萜苷作為止血活性成分的在醫藥上的應用以總環烯醚萜苷為活性成分，配以藥用鋪料，用公知的方法製備成藥劑學上的任何一種劑型。
本發明提取的總環烯醚萜苷作為止血活性成分的藥效可以從以下實驗中體現1、實驗目的應用小鼠斷尾止血法和毛細管凝血法，研究獨一味醇提取物及總環烯醚萜苷的止血作用。
2、實驗條件三級動物實驗室，室溫20～25℃，空調恆溫。
3、實驗對象動物BalB/C小鼠50隻，體重20±2g，由蘭州軍區蘭州總醫院動物實驗科提供，合格證號甘肅省醫動字第1402-0201號。
4、藥材與儀器獨一味醇提取物和獨一味總環烯醚萜苷由實驗室自製，臨用前製成0.1g/ml，0.1g/ml和0.025g/ml的水溶液。雲南白藥，雲南白藥集團股份有限公司，批號20040320，臨用前製成0.1g/ml。一次性定量取血管(20ul，長度為12cm)，天津薊縣四平玻璃儀器廠。
5、實驗方法與結果①對出血時間的影響取小鼠50隻，雌雄各半，隨機分成5組空白對照組、雲南白藥組(2g/kg)、獨一味醇提取物組(2g/kg)、獨一味總環烯醚萜苷高劑量組(2g/kg)、獨一味總環烯醚萜苷低劑量組(0.5g/kg)，每組10隻。空白對照組灌胃給予生理鹽水，其餘各組灌胃給予受試藥物(給藥體積0.4ml/20g)，每天灌胃一次，灌胃前禁食10小時，連續給藥3天。於第3天用藥後1小時，小鼠夾固定，以利剪將小鼠尾尖1/3處橫斷，待血液自行溢出開始計時，每隔30s用濾紙片吸去血滴一次，直至出血自然停止(濾紙吸時無血)為止，計算出血時間和縮短率(與生理鹽水組比較)。結果見表1。
表1獨一味提取物對小鼠出血時間的影響組別劑量 動物數(只)出血時間(min)縮短率(％)生理鹽水組10 24.31±3.33 -----雲南白藥組 2g/kg 10 12.00±4.5**50.64獨一味醇提取物組2g/kg 10 15.20±4.08**37.47總環烯醚萜苷高劑量組2g/kg 10 12.00±2.88**50.64總環烯醚萜苷低劑量組0.5g/kg 10 13.35±5.13**45.08注*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組比較；結果由表1結果可知獨一味醇提取物，獨一味總環烯醚萜苷高劑量組(2g/kg)、獨一味總環烯醚萜苷低劑量組(0.5g/kg)均能顯著縮短小鼠斷尾出血時間，縮短率分別為37.47％、50.64％和45.08％。獨一味總環烯醚萜苷高劑量組、獨一味總環烯醚萜苷低劑量組的止血作用與雲南白藥相近，比獨一味醇提物的止血作用好。
②對小鼠凝血時間的影響取小鼠40隻，分組及給藥同2.1，於末次灌胃給藥後1hr，用一次性定量取血管插入小鼠眥球後靜脈叢取血，至玻璃毛細管內充滿，放平，每隔30s交替從兩端折斷玻璃毛細管一小段，檢查有無血凝絲出現。一旦出現血凝絲，從另一端折斷進行驗證，平均兩端出現血凝絲的時間，即為凝血時間。與生理鹽水組比較，計算縮短率。結果見表2。
表2獨一味提取物對小鼠凝血時間的影響組別劑量 動物數(只)出血時間(min) 縮短率(％)生理鹽水組 10 246.60±71.87 -----雲南白藥組 2g/kg 10 176.50±34.76**28.43獨一味醇提取物組2g/kg 10 189.70±27.70**23.07總環烯醚萜苷高劑量組2g/kg 10 177.25±39.19**28.12總環烯醚萜苷低劑量組0.5g/kg 10 209.90±52.55 14.88注*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組比較結果表2結果表明獨一味醇提取物(2g/kg)，獨一味總環烯醚萜苷高劑量組(2g/kg)、獨一味總環烯醚萜苷低劑量組(0.5g/kg)均能顯著縮短小鼠凝血時間，縮短率分別為23.07％、28.12％和14.88％。獨一味醇提取物(2g/kg)和獨一味總環烯醚萜苷高劑量組(2g/kg)的促凝血作用與雲南白藥相近。
結論6、結論上述兩個藥效學實驗結果表明，獨一味總環烯醚萜苷能顯著縮短小鼠斷尾止血時間和凝血時間，其藥效與雲南白藥相近。
經初步藥效學研究表明本發明的獨一味總環烯醚萜苷具有明顯的縮短出血時間，促進凝血的作用。為進一步的新藥研究提供了合理的工藝方法。
圖1為本發明工藝流程圖具體實施方式
實施例一取獨一味地上部分5kg為原料，將其粉碎，過20目篩，加以25000ml的體積百分濃度為70％的乙醇在50℃下溫浸，攪拌浸提3小時，濾過，藥渣中再加入25000ml的體積百分濃度為70％的乙醇(反覆提取3次)，將濾液合併，濾液減壓濃縮至浸膏狀，再用60℃10000ml熱水溶解，冷卻後過濾除去沉澱。母液上4.5kg經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的聚醯胺(14-30目)柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗聚醯胺柱(流速為10000ml/小時)，從聚醯胺柱中流出的母液和水洗脫液上經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的4.5kg D101大孔樹脂柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，再用20000ml 70％乙醇衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，回收乙醇洗脫液，濃縮，真空乾燥製得環烯醚萜苷含量≥80％的獨一味總環烯醚萜苷，粉碎，即得。
實施例二、取獨一味地上部分5kg為原料，將其粉碎，過20目篩，加以25000ml的體積百分濃度為30％的乙醇在70℃下溫浸，攪拌浸提2小時，濾過，藥渣中再加入25000ml的體積百分濃度為30％的乙醇(反覆提取3次)，將濾液合併，濾液減壓濃縮至浸膏狀，再用10000ml 30℃熱水溶解，冷卻後過濾除去沉澱。母液上4.5kg經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的聚醯胺(14-30目)柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗聚醯胺柱(流速為10000ml/小時)，從聚醯胺柱中流出的母液和水洗脫液上經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的4.5kg D101大孔樹脂柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，再用20000ml 30％乙醇衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，回收乙醇洗脫液，濃縮，真空乾燥製得環烯醚萜苷含量≥80％的獨一味總環烯醚萜苷，粉碎，即得。
實施例三取獨一味地上部分5kg為原料，將其粉碎，過20目篩，加以25000ml的體積百分濃度為50％的乙醇在20℃下溫浸，攪拌浸提3小時，濾過，藥渣中再加入25000ml的體積百分濃度為70％的乙醇(反覆提取3次)，將濾液合併，濾液減壓濃縮至浸膏狀，再用10000ml 90℃熱水溶解，冷卻後過濾除去沉澱。母液上4.5kg經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的聚醯胺(14-30目)柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗聚醯胺柱(流速為10000ml/小時)，從聚醯胺柱中流出的母液和水洗脫液上經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的4.5kg D101大孔樹脂柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，再用20000ml 50％乙醇衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，回收乙醇洗脫液，濃縮，真空乾燥製得環烯醚萜苷含量≥80％的獨一味總環烯醚萜苷，粉碎，即得。
實施例四取獨一味地上部分5kg為原料，將其粉碎，過20目篩，加以25000ml的體積百分濃度為95％的乙醇在60℃下溫浸，攪拌浸提2小時，濾過，藥渣中再加入25000ml的體積、百分濃度為95％的乙醇(反覆提取3次)，將濾液合併，濾液減壓濃縮至浸膏狀，再用10000ml 70℃熱水溶解，冷卻後過濾除去沉澱。母液上4.5kg經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的聚醯胺(14-30目)柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗聚醯胺柱(流速為10000ml/小時)，從聚醯胺柱中流出的母液和水洗脫液上經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的4.5kg D101大孔樹脂柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，再用20000ml 95％乙醇衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，回收乙醇洗脫液，濃縮，真空乾燥製得環烯醚萜苷含量≥80％的獨一味總環烯醚萜苷，粉碎，即得。
實施例五取獨一味地上部分5kg為原料，將其粉碎，過20目篩，加以25000ml的水在60℃下溫浸，攪拌浸提2小時，濾過，(反覆提取3次)，將濾液合併，濾液減壓濃縮至浸膏狀，再用10000ml 70℃熱水溶解，冷卻後過濾除去沉澱。母液上4.5kg經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的聚醯胺(14-30目)柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗聚醯胺柱(流速為10000ml/小時)，從聚醯胺柱中流出的母液和水洗脫液上經乙醇洗脫處理好(以95％乙醇洗脫，直至乙醇洗脫液加蒸餾水不出現渾濁為止，再以蒸餾水洗脫柱子至無醇味，即可。)的4.5kg D101大孔樹脂柱，上樣速度為10ml/分鐘，以30000ml的蒸餾水衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，再用20000ml濃度為10％的乙醇衝洗大孔樹脂柱(流速為10000ml/小時)，回收乙醇洗脫液，濃縮，真空乾燥製得環烯醚萜苷含量≥80％的獨一味總環烯醚萜苷，粉碎，即得。
權利要求
1.一種總環烯醚萜苷的提取方法，包括以下工藝步驟①將乾燥、粉碎的獨一味植物用4-8倍量、濃度為0-95％的乙醇溶液在20-70℃下溫浸提取，過濾、濃縮至浸膏狀；②用10-15倍量、溫度為30-90℃的熱水溶解上述浸膏狀物，冷卻、過濾除去脂溶性成分得提取液；③將提取液緩慢流過經乙醇洗脫處理過的聚醯胺柱，再使母液緩慢流過經乙醇洗脫處理過的大孔樹脂柱；④先以蒸餾水衝洗上述大孔樹脂柱，再用濃度為10-95％的乙醇溶液衝洗大孔樹脂柱，收集乙醇洗脫液、減壓濃縮、真空乾燥得總環烯醚萜苷產物。
2.如權利要求1所述的總環烯醚萜苷的提取方法，其特徵在於步驟①中所述的溫浸提取可反覆多次。
3.如權利要求1或2所述的總環烯醚萜苷的提取方法，其特徵在於步驟③中，提取液流過聚醯胺柱後，用蒸餾水衝洗聚醯胺柱，並將洗脫液與所述母液混合後，再上所述大孔樹脂柱。
4.如權利要求1所述的方法提取的總環烯醚萜苷作為止血活性成分在醫藥上的應用。
5.如權利要求4所述的總環烯醚萜苷的用途，其特徵在於以總環烯醚萜苷為活性成分，配以藥用鋪料製備成藥劑學上的任何一種劑型。
全文摘要
本發明提供了一種從藏藥獨一味中提取總環烯醚萜苷的方法，該方法採用獨一味為原料，以乙醇溶液回流提取，並利用對水溶性成分具有選擇性吸附作用的大孔樹脂進行分離和富集，得到環烯醚萜苷產物，其中總環烯醚萜苷類化合物的含量大於80％。本發明工藝簡便、操作方便、安全、重複性好，可工業化生產。本發明同時還提供了所提取的總環烯醚萜苷作為止血活性成分的應用。
文檔編號C07H1/08GK1660163SQ200410011679
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月29日 優先權日2004年12月29日
發明者賈正平, 李茂星, 張汝學 申請人:賈正平