一種以豆餅粉為主要原料生產枯草芽孢桿菌菌劑的方法
2023-06-19 12:13:41 2
專利名稱：一種以豆餅粉為主要原料生產枯草芽孢桿菌菌劑的方法
技術領域：
本發明屬於工業微生物發酵工程技術領域，具體地說涉及一種枯草芽孢桿菌菌劑的生產方法。
背景技術：
近年來，養殖業飛速發展，抗生素及其它化學藥物在集約化大規模生產過程中的大量使用，雖然達到了增產與抗病目的，但抗生素的長期濫用不僅引起了病原菌的抗藥性， 而且抗生素殘留直接威脅著人類的健康。抗生素殘留已成為我國多種養殖產品的國際貿易壁壘，使我國出口企業蒙受巨大的經濟損失。近年來國家採取嚴厲的手段，嚴格限制抗生素或禁止某些抗生素的使用，並積極尋求其替代品。抗生素替代品(如微生態製劑、寡糖、抗菌肽等)的研製成為各國學者的研究熱點。微生態製劑很早就開始使用，二十世紀以來在世界各地得到迅速發展，到80年代初已有多種微生態製品投放市場，而且數量和品種不斷擴大。同一時期我國研製成功的芽孢桿菌類、乳酸菌類和酵母菌類的獸用微生態製劑，作為飼料添加劑被廣泛使用。枯草芽孢桿菌是一種好氧菌，除了能產生蛋白酶、脂肪酶、澱粉酶等，還可以分泌抗菌素，是我國農業部允許可以作為飼料級微生態添加劑的兩種芽孢桿菌之一，其已被越來越多地研製成飼用微生態製劑。除此之外，枯草芽孢桿菌更作為一種重要的工業菌種已經被廣泛的使用於畜牧業、醫藥工業、植物病害防治以及環境保護等領域，故具有廣泛的發展前景，顯示出巨大的社會效益和生態效益。目前，生產枯草芽孢桿菌菌劑均以澱粉、玉米粉等糧食作物為主要原料，經過發酵過程生產出微生態製劑。在專利一種地衣芽孢桿菌菌株及其所產生的細菌素的用途 (CN200510061554. 3)中，生產細菌素的培養基為LB培養基，其主要成分是價格昂貴的蛋白腖和酵母提取物。但是，近年來，由於糧食作物價格不斷上升，導致發酵產品成本上漲。本申請發明人通過實驗發現農副產品豆餅粉對生產微生態製劑的各種桿菌和黴菌有促進生長作用，用作生產原料，可大大減少澱粉、葡萄糖、玉米粉、酵母提取物/酵母浸膏、蛋白腖等糧食的用量，使其生產成本降低。
發明內容
針對以上技術中原料成本過高的不足之處，本發明的目的在於採用廉價的豆餅粉為主要發酵原料生產枯草芽孢桿菌菌劑，使本方法不但保持了上述技術的優點，而且使生產成本大幅度下降。—種採用豆餅粉為主要發酵原料生產枯草芽孢桿菌菌劑的方法，其特徵在於發酵過程包括以下步驟1、以豆餅粉為主要原料製成培養基溶液；2、將枯草芽孢桿菌菌種接入所說的培養基溶液中培養；其特徵在於所說的培養基溶液中還包括葡萄糖和氯化銨。
本發明所採用的技術方案為把傳統的發酵培養基(LB培養基)更改為以豆餅粉為主要原料添加適量的葡萄糖和氯化銨，多次分批發酵實驗證明，該發酵液中的活菌數平均為3. 68億cfu/ml，與LB培養基中的活菌數平均數3. 8億cfu/ml相差不大，而且菌體生長狀態一致。本發明培養基中各組分的重量百分含量分別為豆餅粉2-4%葡萄糖0.1-0. 5%氯化銨0.05-0. 15%餘量為水實驗證明，發酵培養基(即豆餅粉2-4 % ；葡萄糖0. 1-0. 5 % ；氯化銨 0. 05-0.15% ；餘量為水)中各組分的改變對發酵水平影響不大，且菌體粗壯整齊，使5L發酵罐的發酵水平達到平均3. 75億cfu/ml的水平，在產品質量不變的情況下，大大降低了生產成本。
具體實施例方式實施例一採用如下配比的(以重量計)培養基豆餅粉2%葡萄糖0.1%氯化銨0.05%餘量為水培養條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發酵周期為36小時，在5L的發酵罐中發酵，採用平板稀釋法測定活菌數，重複三次取平均值，活菌數可達3. 68億cfu/ml，而LB培養基的活菌數為3. 75億cfu/ml，而且菌體生長狀態一致，大小均勻，粗壯整齊。實施例二採用如下配比的(以重量計)培養基豆餅粉4%葡萄糖0.5%氯化銨0.15%餘量為水培養條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發酵周期為36小時，在5L的發酵罐中發酵，採用平板稀釋法測定活菌數，重複三次取平均值，活菌數可達3. 7億cfu/ml，而LB培養基的活菌數為3. 8億cfu/ml，而且菌體生長狀態一致，大小均勻，粗壯整齊。實施例三採用如下配比的(以重量計)培養基豆餅粉3%葡萄糖0.3%
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氯化銨0. 1 %餘量為水培養條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發酵周期為36小時，在5L的發酵罐中發酵，採用平板稀釋法測定活菌數，重複三次取平均值，活菌數可達3. 75億cfu/ml，而LB培養基的活菌數為3. 82億cfu/ml，而且菌體生長狀態一致，大小均勻，粗壯整齊。
權利要求
1.一種以豆餅粉為主要原料生產枯草芽孢桿菌菌劑的方法，其特徵在於包括以下步驟1)以豆餅粉為主要原料製成培養基溶液；2)將枯草芽孢桿菌菌種接入所述的培養基溶液中培養，其特徵在於所述的培養基溶液中同時需要加入葡萄糖和氯化銨。
2.如權利要求1所述的培養基，其特徵在於，以重量百分比計，該培養基中各組分的重量百分含量為豆餅粉2-4% ；葡萄糖0. 1-0. 5% ；氯化銨0. 05-0. 15% ；餘量為水。
3.如權利要求1所述的培養基，其特徵在於，以重量百分比計，豆餅粉的含量最好是 3% ；葡萄糖的含量最好0.3% ；氯化銨的含量最好0. 1% ；餘量為水。
全文摘要
本發明屬於工業微生物，發酵工程技術領域。具體涉及一種以豆餅粉為主要原料生產枯草芽孢桿菌菌劑的發酵培養基，該培養基中各組分的重量百分含量為豆餅粉2-4％；葡萄糖0.1-0.5％；氯化銨0.05-0.15％；餘量為水。本發明培養基能夠促進枯草芽孢桿菌在生長期的大量繁殖，使菌體粗壯整齊，保持產品質量不變的情況下，降低了生產成本。
文檔編號C12N1/20GK102250791SQ20111016140
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月28日 優先權日2011年5月28日
發明者李俊峰, 李峰, 李紅芳, 渠慶忠 申請人:中國菸草山東進出口有限責任公司, 青島科技大學