海灣扇貝染色體的製備方法與流程

2024-04-02 09:40:05

本發明涉及一種海灣扇貝染色體的製備方法。

背景技術：

基因定位在基因組研究中佔有很重要的地位，既有助於基因序列的測定，又有利於對基因結構和功能的研究，以進一步提示生物的遺傳信息。基因的染色體定位方法多種多樣，它可分為基因的遺傳作圖和物理作圖，而物理作圖中最傳統的是螢光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）。FISH 通過特定分子的螢光標記探針在細胞內與染色體上特定的互補核酸序列原位雜交，通過激發雜交探針的螢光來檢測信號。由於螢光染料收到一定波長（即激發波長）的光激發後會發射螢光（即發射波長），所以就濾光鏡選擇合適的激發波長的光，即可顯示某一特定的螢光染料，於是就可以直接顯示染色體上的基因序列間的相互位置關係。染色體製備作為基因定位的第一步，就顯得尤為重要。

技術實現要素：

針對上述問題，本發明旨在提供一種海灣扇貝（Argopecten irradias）染色體的製備方法。

一種海灣扇貝染色體的製備方法，步驟如下：

（1）濃縮收集海灣扇貝擔輪幼蟲於1.5mL離心管中，以0.01%秋水仙素處理樣品0.5-1.5h；

（2）濾掉秋水仙素，用70-80 mM KCl 溶液進行低滲處理20-40min；

（3）向離心管中加滿Carnoy's固定溶液進行固定，並置於30-50rpm搖床上不斷搖晃混勻，每隔15-30min更換一次固定液，共計三次；

（4）室溫5000-10000rpm 離心0.5-1.5min，棄上清液後用適量的50%乙酸溶液對材料進行解離，將細胞解離液在事先45-55℃預熱的載玻片上懸空滴片；

（5）將滴好的載玻片置於45-55℃烘箱5-15 min 後，室內乾燥1-2 天，即可使用。

所述秋水仙素的濃度為質量體積濃度，溶劑為海水。

所述的Carnoy's固定溶液成分為：體積比3：1的酒精：冰乙酸。

步驟（4）中懸空高度為15-40cm。

所述50%乙酸中的比例為體積比。

染色體的製備是基因定位的基礎，只有製備出高質量的染色體才可以進行基因定位，由於細胞分裂中染色體變化的特殊性，只有在細胞分裂的後期才可以製備得到分散良好的染色體，而這個時期非常短，因此就必須選擇細胞分裂旺盛的組織來進行染色體製備。本發明選擇了細胞分裂最為旺盛的擔輪幼蟲時期進行染色體的製備，製備成功率非常高，每張載玻片上可找到6-8個處於分裂相的染色體。且本發明的方法簡單易行，適合大批量製備。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。

一種海灣扇貝染色體的製備方法，步驟如下：

（1）濃縮收集海灣扇貝擔輪幼蟲於1.5mL離心管中，以0.01%秋水仙素處理樣品0.5-1.5h；

（2）濾掉秋水仙素，用70-80 mM KCl 溶液進行低滲處理20-40min；

（3）向離心管中加滿Carnoy's固定溶液進行固定，並置於30-50rpm搖床上不斷搖晃混勻，每隔15-30min更換一次固定液，共計三次；

（4）室溫5000-10000rpm 離心0.5-1.5min，棄上清液後用適量的50%乙酸溶液對材料進行解離，將細胞解離液在事先45-55℃預熱的載玻片上懸空滴片；

（5）將滴好的載玻片置於45-55℃烘箱5-15 min 後，室內乾燥1-2 天，即可使用。

所述秋水仙素的濃度為質量體積濃度，溶劑為海水。

所述的Carnoy's固定溶液成分為：體積比3：1的酒精：冰乙酸。

步驟（4）中懸空高度為15-40cm。

所述50%乙酸中的比例為體積比。