一種hiv免疫原及其製備的製作方法

2023-08-03 13:32:46 3

專利名稱：一種hiv免疫原及其製備的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種引起廣譜中和抗體的HIV免疫原及其製備的疫苗，特別涉及一種具有廣譜保護作用的新型HIV疫苗。
背景技術：
愛滋病是全球所面臨的最重大挑戰之一，嚴重危害社會進步與經濟增長，已造成 6000多萬人被感染，其中3000萬人已經死亡，目前存活的感染者約為3320萬，其中90%以上的病例發生在發展中國家。迄今為止，在各國政府與國際組織強有力的支持下，世界上先後開展了 100多個臨床試驗，但尚未有一個成功上市的愛滋病疫苗。愛滋病疫苗研製困難的一個主要原因是由於愛滋病病毒的特殊性，即HIV-I具有高度的變異性。以往的疫苗所選擇的抗原表位主要是自然感染中的優勢抗原表位，而這些抗原表位是HIV-I中變異頻率最高的位點。因此， 以這些抗原構建的疫苗誘導出的抗體具有延遲性，無法中和已經發生突變的HIV-I。因此，在愛滋病疫苗研究中所存在的一個重要問題是如何通過保守免疫原設計來誘導具有廣譜保護作用的新疫苗。

發明內容
為了解決現有技術中由於HIV變異頻率高而導致的抗體無法中和已經突變的HIV 的問題，本發明提供了一種HIV免疫原，包括一種分枝肽序列，所述分枝肽序列中至少一個分枝包括HIV的4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。4E10、2F5和Z13抗原表位序列分別為目前分離得到的廣泛中和抗體4E10抗體、2F5抗體和Z13抗體所識別的抗原表位序列，識別高度保守的HIV-lgp41近膜端外部區(membrane proximal external region, MPER)。不論HIV病毒如何變異，其gp41近膜端外部區MPER基本保持保守，所以針對該區域設計的免疫原產生的抗體能夠避免由於病毒的變異導致的無法中和的問題。其中4E10 能以較低的濃度中和HIV-I原始病毒株在內22株病毒株的全部亞型病毒，2F5可中和大約 67%左右的病毒。同時本發明的免疫原由於具有分枝肽結構，包含多個分枝，分子量較大， 能夠增強該免疫原的免疫原性，而不需要另外的載體蛋白。本發明中，優選4E10表位序列。 更優選所述分枝肽有3至4個分枝均包括4E10表位序列。在一個實施方式中，本發明所述HIV免疫原的上述分枝肽序列可進一步包括Th細胞表位序列。所述Th細胞表位序列包括PADRE。通過B、T細胞雙信號識別，有助於增強機體對抗原的免疫應答，並能產生廣譜的保護作用。在一個實施方式中，上述HIV免疫原的分枝肽序列也可進一步包括破傷風毒素 830-843序列和/或口蹄疫病毒200-213序列，以增強其免疫原性。上述HIV免疫原，其中所述分枝肽至少部分分枝被選自乙醯基、醯胺基、烷基羰基和鏈烯基羰基組成的組中的至少一種修飾基團修飾。優選乙醯基和/或醯胺基。所述烷基羰基可用通式CH3(CH2)nCO-表示，其中η可為1-16中的任意整數，優選10、12、14和16。所述鏈烯基羰基可用通式R(CH2)mCO-表示，其中R為烯基、二烯基或三烯基，例如，CH3(CH2) m』 CH = CH-, CH3CH2CH = CHCH2CH = CH_、CH3CH2CH = CHCH2CH = CHCH2CH = CH ；m 和 m，可為 1-10中的任意整數，優選7。上述修飾基團可與所述分枝肽的N末端α -氨基、C末端α-羧基或任一胺基酸的側鏈基團共價連接。優選N末端α-氨基。在所述分枝肽的末端或側鏈添加修飾基團以保護所述分枝肽，防止過早被酶解而影響其免疫原性。根據一個實施方式，所述HIV免疫原中所述分枝肽的核心骨架為賴氨酸構成的多分枝核心骨架或利用二硫鍵構成的多分枝核心骨架。所述分枝肽可包括3-8個分枝。下文中，將所述多分枝核心骨架用MAP表示，分枝數用過跟在MAP之後的數字表示，例如「MAP4」
權利要求
1.一種HIV免疫原，包括一種分枝肽序列，所述分枝肽序列中至少一個分枝包括HIV的 4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。
2.如權利要求1所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽序列進一步包括Th細胞表位序列、破傷風毒素830-843序列和/或口蹄疫病毒200-213序列。
3.如權利要求1-2中任一項所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽至少部分分枝被選自乙醯基、醯胺基、烷基羰基和鏈烯基羰基組成的組中的至少一種修飾基團修飾。
4.如權利要求1-3中任一項所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽的核心骨架為賴氨酸構成的多分枝核心骨架或利用二硫鍵構成的多分枝核心骨架。
5.如權利要求1-4中任一項所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽包括3-8個分枝。
6.如權利要求1-5中任一項所述的HIV免疫原，其中所述HIV的4E10和/或2F5和/ 或Z13抗原表位序列、Th細胞表位序列、以及破傷風毒素830-843序列和/或口蹄疫病毒 200-213序列分別通過柔性序列與所述分枝肽的核心骨架連接。
7.如權利要求6所述的HIV免疫原，其中所述柔性序列包括甘氨酸組成的序列、賴氨酸組成的序列、6-氨基己醯基組成的序列或它們的組合。
8.如權利要求7所述的HIV免疫原，其中所述核心骨架為三個賴氨酸組成的四分枝骨架，所述抗原表位序列為N末端乙醯基化或醯胺化的4E10抗原表位序列，所述柔性序列為 KKKK-6-氨基己醯基，連在4E10抗原表位序列C末端，所述抗原表位序列通過6-氨基己醯基與所述核心骨架相連。
9.一種HIV疫苗，包括如權利要求1-8中任一項所述的免疫原。
10.如權利要求9所述的HIV疫苗，進一步包括佐劑，所述佐劑包括氫氧化鋁佐劑、短小棒狀桿菌、脂多糖、細胞因子或明礬，或為油佐劑或水型佐劑。
全文摘要
本發明涉及一種引起廣譜中和抗體的HIV免疫原及其製備的疫苗。該免疫原包括包括一種分枝肽序列，該分枝肽序列中至少一個分枝包括HIV的4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。本發明的免疫原能夠激發針對HIV病毒的廣譜中和抗體，克服了現有技術中因為HIV高變異性導致的現有疫苗誘發抗體的延遲性的問題。
文檔編號A61P31/18GK102532280SQ20101057806
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月8日 優先權日2010年12月8日
發明者單亞明, 孔維, 張麗雙 申請人:吉林大學