抗Benzonase單克隆抗體、其製備方法和應用的製作方法
2023-07-23 19:58:31
專利名稱：抗Benzonase單克隆抗體、其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域,具體涉及抗Benzonase單克隆抗體、其製備方法和應用。
背景技術：
Benzonase是源於粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)產生的核酸內切酶，能高效地降解所有形式的DNA和RNA (單鏈、雙鏈、線性、環狀)。結構上，該酶由兩個相同的亞基通過兩個二硫鍵連接而成，每個亞基有245個胺基酸,分子量 30kDa。Benzonase有效用於實驗室重組蛋白表達純化以及重組藥物製備過程中核酸的消化、去除。目前，Benzonase的檢測方法之一是利用Benzonase本身的水解活性進行間接進行,但如果Benzonase失去酶解能力就不能檢測出Benzonase ;另外,可以通過ELISA方法檢測Benzonase的含量,但是這種方法使用的抗體是多抗，特異性較差，不能精確定量。
發明內容
本申請的發明人通過研究發現，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原，能夠獲得靈敏、高效、特異的抗Benzonase單克隆抗體。本發明的第一個目的在於提供抗Benzonase單克隆抗體的製備方法。本發明的第二個目的在於提供根據所述方法製備得到的抗Benzonase單克隆抗體。本發明的第三個目的在於提供所述抗Benzonase單克隆抗體的應用。作為本發明的第一個方面，抗Benzonase單克隆抗體的製備方法，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。進一步地，所述方法包括以下步驟A)將Benzonase蛋白或Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原免疫動物；B)將被免疫動物的脾細胞和骨髓瘤細胞融合；C)篩選融合的雜交瘤細胞,獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。其中，所述Benzonase蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO :1所示,所述Benzonase的胺基酸肽段的胺基酸序列如 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQID NO :6、SEQ ID NO 7 中任一項所示。其中，所述載體蛋白選自1(1^、85八、(^八，優選為1(1^。其中，所述動物選自小鼠、大鼠、兔子，優選為小鼠。作為本發明的第二個方面，根據上述方法製備得到的抗Benzonase單克隆抗體。作為本發明的第三個方面,所述抗Benzonase單克隆抗體在檢測Benzonase及其類似物中的應用。
本發明的單克隆抗體的有益效果1、以Benzonase蛋白或Benzonase的胺基酸肽段作為免疫原,所製備的抗體特異地識別核酸內切酶Benzonase及其類似物，能夠通過Western Blotting對Benzonase精確定量，並從分子量上作進一步地確認是否為Benzonase ；2、利用此抗體通過Western Blotting可檢測出每毫升體系中低於Ing或Iunit的 Benzonase ；3、能夠檢測具有酶活或失活的Benzonase。因此，根據本發明的方法獲得的抗Benzonase單克隆抗體特異性好、靈敏度高、適用範圍廣，可用於Benzonase及其類似物的檢測，具有良好的應用前景。
圖1為本發明篩選獲得的14株單克隆抗體與Benzonase的Western Blotting反應。圖2為本發明製備的單克隆抗體與Benzonase的Western Blotting反應,其中，泳道 1-8 對應的 Benzonase 濃度依次為 10ng/ml、5ng/ml、2. 5ng/ml、l. 25ng/ml、0. 625ng/ml、0. 3125ng/ml、0. 15625ng/ml、0. 078125ng/ml。
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用於說明本發明而非用於限定本發明的範圍。實施例1、抗Benzonase單克隆抗體的製備1.1、免疫根據SEQ ID NO 1所示的Benzonase的胺基酸序列設計特異性的多肽，序列如表I所示。表1、設計的多肽序列
權利要求
1.抗Benzonase單克隆抗體的製備方法,其特徵在於，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase 單克隆抗體。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述方法包括以下步驟A)將Benzonase蛋白或Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原免疫動物；B)將被免疫動物的脾細胞和骨髓瘤細胞融合；C)篩選融合的雜交瘤細胞，獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。
3.如權利要求1或2所述的方法,其特徵在於,所述Benzonase蛋白的胺基酸序列如 SEQ ID NO 1 所示。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，所述Benzonase的胺基酸肽段的胺基酸序列如 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO 4, SEQID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO: 7中任一項所示。
5.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述載體蛋白選自KLH、BSA、OVA。
6.如權利要求5所述的方法，其特徵在於，所述載體蛋白為KLH。
7.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述動物選自小鼠、大鼠、兔子。
8.如權利要求7所述的方法，其特徵在於，所述動物為小鼠。
9.如權利要求1-8中任一項所述的方法製備得到的抗Benzonase單克隆抗體。
10.如權利要求9所述的抗Benzonase單克隆抗體在檢測Benzonase及其類似物中的應用。
全文摘要
本發明公開了抗Benzonase單克隆抗體的製備方法，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的胺基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。本發明的方法獲得的單克隆抗體特異性好、靈敏度高，可用於Benzonase及其類似物的檢測。
文檔編號C07K16/40GK103012591SQ20121053762
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者張濤, 尹娟 申請人:武漢吉愛生物技術有限公司