生產高濃度咯嗪溶液的方法和組合物的製作方法
2023-07-21 12:00:31 1
專利名稱：生產高濃度咯嗪溶液的方法和組合物的製作方法
生產高濃度咯嗪溶液的方法和組合物本申請是申請日為2007年1月24日，申請號為200780001510. 9，發明題目為「生
產高濃度咯嗪溶液的方法和組合物」的分案申請。相關申請的交叉參照依據35U. S.C. § 119(e)，本申請要求2007年1月27日申請的U. S.臨時申請 No. 60/762，684和2007年1月24日提交的US專利申請號一，代理案卷號186412/US/2的權益，在此以其整體引入作為參考。本申請進一步引入2004年11月5日申請的發明名稱為「使用光敏劑和光的峰值波長減少血液和血液製品中汙染」的US專利申請系列No. 10/904, 361，在此以其整體引入作為參考。背景a.領域提供了提高溶液中咯嗪溶解度的方法和組合物，以及滅活生物學流體中病原體的方法和組合物。還提供了一種新型的溶解度提高的核黃素。b.相關技術例如HIV、肝炎和其他的病毒以及細菌這些感染性微生物造成的全血或血液製品的汙染對那些必須接受全血輸血或給予不同血液製品或血液成分的患者造成了嚴重的健康危害。這類血液成分包括紅血細胞、血漿、凝血因子VIII、血纖維蛋白溶酶原，纖連蛋白， 抗凝血酶III，冷沉澱物，人血漿蛋白級分，白蛋白，免疫血清球蛋白，凝血酶原複合物，血漿生長激素和其他從血液分離的成分。一種為受血者提供安全的血液或血液製品的解決方法是在患者體內使用該原料之前篩查血液或血液製品的汙染(在此所用的術語「血液」和「血液製品」可以互換使用)。 當血液製品的測試對於特定的病原體是陽性時，從流通中除去該血液製品並被銷毀。然而， 血液篩查操作可能會因為不適當的特異性和靈敏度而不能檢測到致病性汙染物，例如，篩查血液製品中C肝的存在，當該血液受到西尼羅病毒感染，或篩查該血液製品C肝，但該病毒的存在量低於特定篩查方法檢測的靈敏度時。在這些情況下，血液篩查器將會認為該血液不含有可檢測水平的C肝汙染而讓該血液處於流通中，但事實上該血液製品其實受到西尼羅病毒的汙染或一定水平的C肝汙染，這將會危害受血者的健康。第二種為受血者提供安全血液製品的解決方法是在受血者體內使用前對原料「滅菌」。一種特別有用的血液製品滅菌方法是直接給血液製品添加至少一種光敏劑。一些類型的光敏劑對核酸具有高親和力。通常，血液製品中的核酸與病原體的存在是相聯繫的，這讓光敏劑可以優先靶向血液製品中的病原體。隨後在對於光敏劑適當的波長下對血液製品進行輻照，使吸收的能量從光敏劑轉移至能量接受者，即，能量轉移至病原體的核酸。使用這種處理破壞了血液製品中基本上所有的病原體，否則，受血者將會接受受汙染的血液並且處於受特定病原體感染的危險中。血液製品中光敏劑的有效量或有效水平是確保破壞樣品中病原體的一個重要方面。光敏劑驅動的對微生物破壞的有效性部分基於與微生物有效接觸的光敏劑的含量或濃度，部分基於為了激活化合物並引起微生物殺滅而到達那些光敏劑的「光劑量」。一般而言，將光劑量最大化，以便活化光敏劑，但不會引起對周圍血液或流體產品，即紅細胞、 血小板等的破壞。然而，已經證明了給血液製品提供足量的光敏劑以提供限定體積原料中的病原體的有效殺滅或滅活是困難的。特別地，不同光敏劑的溶解度(以其Ksp來測量)限制了可以加入血液製品中的光敏劑的含量。在製備用於血液製品中的光敏劑時，首先必須將固體光敏劑與溶劑混合以把原料放入溶液中，然後將該溶液以一定的比例加入產品中，該比例不會不利於血液製品的滲透壓。這通常給出了在「滅菌」處理過程中血液製品可以加入多少光敏劑的限制。光敏劑的稀釋量可能導致對病原體的殺滅和處理無效。因此，在血液製品的滅菌處理中使用高濃縮的光敏劑溶液是有益的，該光敏劑溶液以小劑量加入血液製品中，但同時為樣品提供了適當水平的光敏劑來保證病原體滅活。此外，尋找新的光敏劑和光敏劑形式來提供血液製品處理中的新手段。新的光敏劑及其形式可以提供從新化合物至帶有病原體的血液提高的能量轉移以及對於含有血液製品的包含物提供改進的溶解度特徵。面對這樣的背景，產生了本發明的公開內容。發明概述一方面，提供了將水性介質中的咯嗪濃度提高至高於環境溫度和氣壓下的咯嗪典型飽和點的方法。將溫度超過或等於80°C的水性介質加入一定量的咯嗪中以形成超過室溫 (220C )和大氣壓(1個大氣壓)下咯嗪飽和點的咯嗪溶液。然後將該溶液冷卻以產生咯嗪濃度高於環境溫度和氣壓下咯嗪典型飽和點的水性介質。在不同的實施方案中，水性介質可以具有酸性pH(例如，約4至約5的pH)和/或約80°C至約90°C的溫度。水性介質可以包括鹽，如單價鹽。在特定的實施方案中，咯嗪是核黃素。可以將咯嗪溶液進一步滅菌，如在大於1個大氣壓和至少120°C的溫度下。在另一個方面中，提供了核黃素衍生物形式。該核黃素衍生物形式在525nm波長具有等於或小於0. 95的相關係數，和/或在波長500nm以上作為濃度函數的不同於可溶性核黃素的吸光度曲線。在更進一步的實施方案中，通過將核黃素混入具有酸性PH和大於約 80°C溫度的水性介質中，然後冷卻該核黃素溶液的方法製得核黃素衍生物形式。在另一個方面中，提供了用於處理生物流體如血液製品的組合物。在一種變化中， 組合物包括可溶性咯嗪，如核黃素，和單價鹽，可溶性咯嗪至少為120 μ M，超過1個大氣壓和22°C下可溶性咯嗪的飽和點。在進一步的變化中，可溶性咯嗪的濃度至少為500 μ M。在進一步的變化中，可溶性咯嗪為約580μΜ。單價鹽可以提供至少0.9%的鹽濃度。在進一步的變化中，組合物包括碳酸氫鈉，和/或具有約4至約5的pH。在其他方面中，提供了滅活生物流體中病原體的方法。將含有一定濃度的咯嗪溶液的組合物加入生物流體中以滅活病原體。在不同的實施方案中，可溶性咯嗪的濃度至少為100 μ Μ、250 μ Μ、至少為500 μ Μ,或約580 μ Μ。在其他實施方案中，生物流體是血液製品。附圖簡述
圖1Α，1Β和IC說明了根據在此所述的實施方案製備的核黃素衍生物α型的吸光度(附圖A和B)和相關係數(C)特徵。發明詳述
不同的實施方案提供了改良的光敏劑組合物，特別是改良的咯嗪組合物，其具有提高的溶解度，並因此具有提高的濃度。所得到的咯嗪溶液的溶解度和濃度超出了溶液外咯嗪的溶解度和濃度。所得到的咯嗪溶液提供了可以將更大量的咯嗪加入含有病原體的生物流體中，導致提高的病原體滅活。還提供了比未處理的核黃素具有更高飽和點的核黃素衍生物形式。定義提供以下定義來促進理解在此常用的特定術語，但是這不意味著限定本發明公開的範圍。如在此所用的，「生物流體」指的是動物，優選哺乳動物體內發現的任何液體。通常，生物流體不含有大量含有核酸的物質。例如，在此公開的生物流體包括血液製品。「血液製品」指的是血液和全部的血液成分、血液組分和含有來自血液的蛋白質的治療性蛋白組合物。如在此所用的，「咯嗪」指的是所有的咯嗪和異咯嗪，及其天然和合成的衍生物，包括，但不限於7，8- 二甲基-10-核糖醇基異咯嗪(核黃素或維生素B-2) ,7,8,10-三甲基異咯嗪(光黃素)、7，8_ 二甲基咯嗪(光色素)、異咯嗪-腺嘌呤二核苷酸(黃素腺嘌呤二核苷酸[FAD])和咯嗪單核苷酸(例如，黃素單核苷酸[FMN])。如在此所用的，「病原體」指的是可以感染並具有在宿主體內引起疾病潛能的生物體。特別地，病原體本質上通常是細菌或病毒。如在此所述的，術語病原體和微生物可以互換。如在此所用的，術語「病原體的滅活」指的是通過殺死病原體或其他幹擾病原體繁殖的能力來部分或完全防止病原體的複製。如在此所用的，術語「消滅病原體」指的是完全阻止所有的病原體的複製。如在此所用的，「水性介質」指的是其中溶劑為水的任何介質。如在此所用的，「核酸」(「NA」)指的是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)和肽核酸(PNA)，及其修飾的和/或功能化的變型。相似地，在此所用的術語核苷酸包括核糖核酸和脫氧核糖核酸的單個單體以及核苷和核苷酸類似物，以及修飾的核苷酸如標記的核苷酸。核苷酸還包括非天然產生的類似物結構，例如其中糖、磷酸鹽和/或鹼基單位不存在或由其他化學結構代替的那些。術語核苷酸也包括單個肽核酸(PNA)單體(Nielsen等， Bioconjug. Chem. (1994)5(1) :3_7)和鎖核酸(LNA)單體(Braasch 和 Corey，Chem. Biol. (2001)8(1) 1-7)。如在此所用的，「峰值波長」指的是由具有特定峰強度的波長周圍集中的窄範圍中發射的光。如在此所用的，「溶解度」指的是與過量物質平衡的溶液中所含的物質量。在這些條件下，將溶液稱為飽和的。物質的Ksp指的是在該物質的飽和溶液中，該物質的離子濃度的乘積。光敏劑和滅活病原體的方法咯嗪結合核酸的光敏劑。光敏劑通常非特異性地結合核酸分子，同時通過幹擾並因此防止生物體核酸複製來滅活含有核酸的微生物。通過光敏劑特異性的特定波長的光照射來活化光敏劑，這可以引起能量從光敏劑轉移至能量受體，例如，核酸鹼基對。一般而言，光敏劑特異性是基於光敏劑與微生物核酸密切地接近，這導致了光敏劑與病原體核苷酸的結合。當待處理的生物流體缺乏或只有有限量的非病原核酸分子時，即，當生物流體中存在的核酸主要是由於病原體的存在，而不是由於同一樣品中其他細胞引起時，光敏劑是最為有用的。因此，例如，生物流體的典型處理過程包括將光敏劑加入潛在受到致病微生物汙染的血液製品中。如果血液和/或血液成分的病原體的減少是所需的，將暴露於光時充當光敏劑的添加劑可以結合在此所述的方法、化合物以及組合物來使用。這樣的添加劑包括內源光敏劑。術語「內源」意思是在人或哺乳動物體內天然找到的，由軀體合成的或由於作為必需食物(例如，維生素)攝入的或體內代謝產物和/或副產物的形成。這樣的內源光敏劑的實例是咯嗪，例如7，8_ 二甲基-10-核糖醇基異咯嗪(核黃素)、7，8，10-三甲基異咯嗪(光黃素)、7，8_二甲基咯嗪(光色素)、異咯嗪腺嘌呤二核苷酸 (黃素腺嘌呤二核苷酸[FAD])、咯嗪單核苷酸(也稱為黃素單核苷酸[FMN]和核黃素-5-磷酸鹽)，其代謝產物和前體。術語「咯嗪」包括異咯嗪。內源基的衍生光敏劑包括合成產生的內源光敏劑的類似物和同系物，其可以含有或缺乏衍生它們的光敏劑的低級(1-5)烷基或滷素取代基，並且其保持了功能和基本上的無毒性。當使用內源光敏劑時，特別是這樣的光敏劑是本質上無毒的或在光照射後不會產生有毒光產物時，在淨化後不需要除去或純化步驟，同時處理過的產物可以直接返回患者體內或給予需要其治療效果的患者。將光敏劑暴露於特定波長的光時，它們吸收能量，使得光敏劑並且所有結合光敏劑的核酸光解。光敏劑的效力取決於病原體結合的光敏劑的濃度和光照量(因為激發的光敏劑是破壞病原體中的活化劑)。一般來講，因此光化學劑量等於加入流體的光敏劑的濃度和光劑量。光劑量基於給致病微生物提供最大破壞而對目標生物流體無不利作用。在此定義的峰值波長指的是由具有特定峰強度的波長周圍集中的窄波段發射的光。在一個實施方案中，可見光集中在大約470nm波長的周圍，並具有大約200nm至約550nm的最大強度。在一個可替換的實施方案中，光集中在308nm周圍，並具有大約280nm至約370nm的最大強度。 注意到術語「光源」或「照射」指的是輻射能的發射體，並可以包括在可見和/或紫外區的能量。如上所述，通過改變光劑量難以提高目標流體內的光敏劑劑量，因為更強或更有效的光劑量可能對流體內其他成分的穩定性有不利作用，即，裂解血液製品樣品中的紅細胞。如之前在US專利公開20050112021 (Hlavinka等，2005年5月26)中所述的，在此引入作為參考，將光敏劑加入目標流體中，並將所得到的流體混合物暴露於合適峰值波長和含量的光輻射來活化光敏劑，但是低於引起生物學成分顯著非特異性破壞或幹擾流體中存在的其他蛋白質的生物學活性。可以通過將含有至少120 μ M可溶性咯嗪的溶液或組合物加入生物流體中來滅活或消滅病原體。可以通過在此所述的方法將溶液或組合物調節至所需的咯嗪濃度，高於1 個大氣壓和22°C時未處理的濃度。咯嗪溶液提高的溶解度和濃度使得可以將更大量的咯嗪加入含有病原體的生物流體中。這導致了提高的病原體滅活。使用如在此所述的光敏劑可以消滅或滅活的微生物包括，但不限於，病毒(胞外和胞內的)、細菌、噬菌體、真菌、血液傳輸的寄生蟲和原生動物。說明性的病毒包括人獲得性免疫缺陷病毒(HIV)、A肝病毒、B肝病毒、C肝病毒、sinbis病毒、巨細胞病毒、 水泡性口炎病毒、單純皰疹病毒(I型和II型)、西尼羅病毒、人親T-淋巴性逆轉錄病毒、HTLV-III、淋巴結病病毒LAV/I DAV、細小病毒、輸血-傳輸(TT)病毒、EB病毒等。 可以使用光敏劑消滅或滅活的噬菌體包括，但不限於，.PHI.X174、.PHI.6、λ噬菌體、 R17、T4、T2等。可以使用光敏劑消滅的細菌包括，但不限於，綠膿桿菌(P. aeruginosa)、 金黃色葡萄球菌(S. aureus)、表皮葡萄球菌(S.印idermis)、單核細胞增生李斯特氏菌 (L. monocytogenes)、大腸桿菌(Escherichia coli)、月市炎克雷伯氏菌(K. pneumonia)、粘質沙雷菌(S. marcescens)等。製備咯嗪組合物的方法還提供了將水性介質中的咯嗪濃度提高至超過咯嗪的常規飽和點的方法。在一個實施方案中，將超過咯嗪飽和點含量的咯嗪加入溫度高於或等於80°C的水性介質中。將溶液冷卻時，所得到咯嗪溶液中的咯嗪超過了咯嗪的飽和點。可以在介質加熱前或加熱時將咯嗪加入水性介質中。隨著時間的推移，咯嗪在溶液中是穩定的，並且不會在水性溶液中過飽和。咯嗪可以商業購買。晶狀咯嗪，例如，核黃素(7，8_二甲基-10-核糖醇基異咯嗪)、 FMN、FAD、光色素等，與特定形式無關，可以從Merck獲得，參見例如，Merck Index,第十版， 1983。測量咯嗪的含量，用於與溶劑如水性介質或水性介質和非極性溶劑組合物混合。 例如，測量在22°C和1大氣壓下的咯嗪核黃素飽和點濃度為114 μ M。通過在此所述的方法製備的咯嗪的濃度顯著高於最初溶解的濃度。可以將最終的咯嗪濃度定為等於和/或高於 120 μ Μ、150 μ Μ、200 μ Μ、250 μ Μ、300 μ Μ、350 μ Μ、400 μ Μ、450 μ Μ、500 μ Μ、550 μ Μ、580 μ Μ、 600μΜ或650μΜ。在特定的實施方案中，可以將咯嗪的濃度定為大約500 μ M士 12. 5 μ Μ。可以調節溶劑的ρΗ。例如，調節ρΗ至酸性ρΗ(即小於或等於6. 5)。可以改變溶劑 PH至小於或等於6. 5,6. 0,5. 5,5. 0,4. 5,4. 0,3. 5、3. 0或2. 5的最大ρΗ，和任選大於或等於 2. 5,3. 0,3. 5,4. 0,4. 5,5. 0,5. 5 或 6. 0 的最小 ρΗ。例如，將 ρΗ 改變至 4. 0 至 5. 0。可以使用任何酸來改變ΡΗ，包括例如，鹽酸(HCl)、硫酸(H2SO4)、檸檬酸(C6H8O7)和醋酸(CH3COOH)。 通常的鹼可以用來改變ΡΗ，包括氫氧化鈉(NaOH)和碳酸氫鈉(NaHCO3)。可以將單價鹽，例如，氯化鈉，與溶劑混合以提供約0.9%的鹽度。另外，製備溶液來包括約200mM醋酸鈉(NaAc)。通常包括醋酸鈉用於血液製品的最終用途，其中血液製品使用了 10-20mM NaAc，用於血小板穩定性和活性，Bertulini 等，Transfusion (1992) 32 152 ；Murphy,Blood(1995)85 :1929。如上所述，可以將NaAc和咯嗪以及咯嗪無關的鹽和鹽一起加入。對於含有溶劑的咯嗪的生產，加入的次序不是關鍵的。在常規咯嗪溶液生產中，由於物質的邊緣溶解性，S卩，Ksp，只製備了大約相當於 114 μ M的溶液。可以將咯嗪的濃度定於高於典型飽和濃度的特定水平，如上文中所述的。將水性介質被加熱至給定的溫度。例如，可以將水性介質加熱至大於或等於60°C、 65 0C >70 0C >75 0C >80 °C >85 °C >90 V或95 V的最小溫度，和任選小於或等於95 °C >90 V、 851、801、751、701或651的最大溫度。在特定的變化中，溫度為約80°C至約90°C。可以將溶液混合一段時間，如至少十至六十分鐘，使咯嗪溶解。然後在彈性塑膠袋或其他類似的容器中，在增強的蒸汽、氣壓和溫度下將加熱並混合過的溶液高壓滅菌。溶液沒有體積的限制。特別地，在高蒸汽條件下，將溶液加熱至約 60°C到約100°C，優選約75°C至約85°C，和約Iatm至約4個atm(50psi)的氣壓。可以將組合物貯存以備後用。例如，可以將醋酸鈉加入組合物中。將組合物分配至滅菌容器中，例如，聚丙烯袋，隨後可以將其加熱(至例如120°C -130°C ) 一段合適的時間，同時以避光的方式對組合物蒸汽滅菌。這種方式製備的咯嗪溶液可以用於處理生物流體如血液製品。含有咯嗪的溶液與不是使用在此所述的方法製備的咯嗪溶液相比較具有提高的溶解度和穩定性。然後將通過在此所述方法製備的組合物直接加入生物流體，如血液製品中。在特定的實施方案中，每170ml至365ml血液製品中加入大約35ml的500 μ M咯嗪溶液。將咯嗪組合物加入血液製品中與先前工藝是不同的對照，它需要將更多的稀釋咯嗪組合物加入血液製品中。核黃素衍牛物形式通過在溶液中加熱和冷卻的核黃素製備方法產生了一種與未處理核黃素相比較在室溫下具有提高的溶解性的核黃素衍生物形式。將該化合物稱為核黃素衍生物α。核黃素衍生物α可以用於生物流體的滅菌處理中。核黃素衍生物α是在酸性條件下通過加熱產生的核黃素的高溶解形式。核黃素衍生物形式的化學結構和活性與未處理的核黃素相同。不希望受到特定理論的限制，核黃素衍生物形式表現出一種改變過的核黃素構象，將水排除在水合作用範圍之外。該構象變化使得核黃素可以作為一種有機溶劑，因此提高了溶液中核黃素的溶解度。分光鏡數據與更疏水環境中溶解核黃素相一致。核黃素衍生物α隨著時間的推移是穩定的，同時不是一種過飽和溶液。得自在此所述方法的至少一部分核黃素原料含有核黃素衍生物α。核黃素衍生物α可以是唯一存在或作為核黃素組合物的一部分或與其他咯嗪化合物一起。化合物在室溫下是高度穩定的並且可以貯存很長時間，同時保持用於處理生物流體的高活性。如以下實施例所示的，核黃素衍生物α提供了在500nm以上波長時作為濃度函數的變化或改變的吸光度曲線。與未處理的核黃素相比，核黃素衍生物α改變的吸光度曲線表明這種新核黃素衍生物的存在(參見Beer定律，A= ebc，其中A是吸光度，ε是克分子吸光率，b是樣品即比色皿的徑長，以及c是溶液中組合物的濃度)。在此公開的方法、組合物以及裝置也可以用來製備疫苗、減少流體中的朊病毒，也可以通過在此所述的方法、組合物以及裝置處理含有源自血液那些以外的生物活性蛋白的 IV流體。
具體實施方案通過參照以下的實施例將更容易理解本發明，只是通過說明來提供這些實施例並不是用來限制。實施例1 高可溶性核黃素的批量生產混合大量溶液的方法以下操作是在淨化室進行的。對於給定所需大體積製造的核黃素溶液，稱量足夠的固體核黃素和氯化鈉並分配至裝有80°C水的罐中來產生具有500 μ M士 12. 5 μ M的核黃素和大約153. 6mM士3. 6mM的溶液。特別地，1000L的批量中由0. 1882kg核黃素9. Okg氯化鈉構成。注意到核黃素和氯化鈉可以同時或以任一次序單獨加入。更特別地，將氯化鈉加入WFI (注射質量的水或「注射用水」)。WFI的溫度為80°C， 同時用0. IM HCl將pH調節至5.0 士 0. 1。然後加入核黃素，並混合約15分鐘。再次注意到氯化鈉和核黃素的加入次序是無關的。將溶液的溫度維持在約80°C。進行質量控制分析來測定組合物的純度。填充袋子和蒸汽滅菌的方法然後將上述溶液通過Durapore 10」0. 45 μ m 一列式濾器過濾。然後將過濾的大量溶液轉移至灌裝機，在那裡將溶液分配至35ml標記的PVC袋中。然後在使用超量殺滅法蒸汽滅菌之前，將該袋子包裹於聚丙烯真空外包裝中。超量殺滅法按照ISO 11134 :1994進行，名稱為保健產品的滅菌方法-批准和常規控制的要求-工業溼熱滅菌。ISO為使用蒸汽滅菌技術製備醫藥製品提供了指導。滅菌周期包括在聚丙烯袋中在4個atm氣壓下將溶液加熱至121°C大約15分鐘。 然後將袋子放入標記的鉬袋中以防止光暴露於溶液(避免核黃素的光降解作用)來進行蒸汽滅菌。然後通過精加工品測試來測試樣品-該樣品具有以下參數核黃素，500 士 25μ M ； 光色素， 10 μ m(6000/容器)，> 25 μ m(600/容器)；pH，4.0-5. 1 ；內毒素，< 0. 5EU/ml ；以及無菌度，彡10-6 (流體路徑的無菌保證水平(SAL))。實施例2 核黃素衍生物α使用實施例1中上述的方法製備稱為核黃素衍生物α的核黃素衍生物。為了證實所述物質含有核黃素，在波長490nm和530nm之間以2nm到5nm的間隔測試組合物的吸光度。然後將吸光度值代入Beer定律(Α = ε be)中，其中A是吸光度，ε是核黃素克分子吸光率，b是樣品即比色皿的徑長，以及c是溶液中組合物的濃度。對應每個吸光度準備濃度，並且如
圖1A，1B和IC中所示的繪製。吸光度對濃度的直線斜率等於克分子吸光率 (O。有趣的是，當測量圖IC數據的相關係數時，S卩，對每個波長作圖的濃度和製得的相關係數，鑑定500nm以上波長的實質性偏差，特別是在510nm。圖IC中的數據表明測試的組合物中存在不同的核黃素衍生物形式，因此可以使用在此所述的方法製備。將該衍生物稱為核黃素衍生物α。實施例3將核黃素(大約70mg)加入鹽水(大約200ml)中，並在加熱板上連續混合。將容器封蓋，並且將溶液混合40分鐘。將溶液通過0.2微米的過濾器過濾。將過濾的溶液以 1 10的比例稀釋，並測量其吸光度。測定核黃素的濃度為540 μ M。光譜顯示沒有核黃素分解的跡象。將3mL核黃素和147ml鹽水混合。測量其吸光度，同時測定濃度為9. 9 μ M。將 30ml核黃素/鹽水溶液分別轉移至四個75cm2燒瓶中，其中同時照射兩個。測定核黃素溶液的濃度為515 μ M和528 μ Μ,超過了環境溫度和氣壓下溶解於溶液中的未處理核黃素的114 μ M濃度。
實施例4隨著時間測量核黃素濃度的穩定性來確定其穩定性。製備了不同的核黃素製劑。在22°C時將核黃素溶解於水性介質中，同時測量其濃度為114μ M。通過將IOmg核黃素加入IOOmL鹽水中，在37°C加熱30分鐘，在攪動板上混合20 分鐘，並通過20微米的過濾器過濾而製得樣品1-3。通過將IOmg核黃素加入IOOmL鹽水中，加熱，並通過0. 2微米的過濾器過濾而制
得樣品4。通過將20mg核黃素加入IOOmL鹽水中，加熱，同時混合30分鐘，並通過0. 2微米的過濾器過濾而製得樣品5。通過將5mg核黃素加入IOmL鹽水中，在60°C水浴加熱30分鐘，劇烈震蕩30秒，並通過0. 2微米的過濾器過濾而製得樣品6。顯示了每種製備的核黃素組合物的濃度穩定性。每個實驗熱處理過的核黃素樣品的核黃素濃度都超過未處理的對照樣品。此外，儲存於環境溫度和大氣壓下時，該濃度在一段時間內保持穩定。表 權利要求
1.用於處理血液製品的組合物，包括約150μ M至約580 μ M可溶性咯嗪和單價鹽。
2.權利要求1的組合物，其中可溶性咯嗪的濃度為約580μ Μ。
3.權利要求1的組合物，其中咯嗪是核黃素。
4.權利要求1的組合物，進一步包括碳酸氫鈉。
5.權利要求1的組合物，其中組合物具有約4至約5的ρΗ。
6.權利要求1的組合物，其中單價鹽提供了至少0. 9%的鹽度。
全文摘要
本發明涉及生產高濃度咯嗪溶液的方法和組合物。本發明提供了與使用常規技術製備的組合物相比，製備含有提高水平的可溶性咯嗪的組合物的方法。還提供了組合物和在溶液中具有較高溶解度的核黃素形式。
文檔編號A01P1/00GK102318619SQ201110192309
公開日2012年1月18日 申請日期2007年1月24日 優先權日2006年1月27日
發明者E·T·漢森, R·P·古德裡奇 申請人:科安比司特生物技術有限責任公司