一種改進的蛋白質測定方法
2023-11-07 04:58:22
一種改進的蛋白質測定方法
【專利摘要】本發明提出了一種改進的蛋白質測定方法，包括以下步驟：（1）稱取待測樣品放入消化管中，向消化管中加入硫酸鉀和硫酸銅，然後量取濃硫酸緩緩加入到消化管中，混合均勻後，在消化管瓶口放一小漏鬥，放入消化爐中消化；（2）當消化管中內容物的顏色逐漸轉化成透明的淡綠色時，取下消化管冷卻後，向消化管中加入過氧化氫溶液將消化管管壁上粘有的碳化粒衝到消化管底部；（3）繼續消化至呈透明為止，然後取下消化管，稍冷後將消化液小心移入100mL容量瓶中；（4）蒸餾、吸收和滴定。本發明提高了消化速度，縮短了測定時間，使企業不僅能快速獲得產品蛋白質的指標，還可以節省大量檢測試劑，提高了企業的經濟效益。
【專利說明】一種改進的蛋白質測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種改進的蛋白質測定方法，屬於蛋白質檢測領域。
【背景技術】
[0002]蛋白質是食品檢驗中經常檢查的項目。測定食品中蛋白質的含量，有利於掌握食品的營養價值和品質的變化，以達到合理利用食品資源。
[0003]在蛋白質測定中常用的方法是凱氏定氮法，應用凱氏定氮法操作易造成結果偏差，因此需要改進。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於提供一種改進的蛋白質測定方法，該方法縮短了測定的時間，能快速獲得產品蛋白質的指標，節省大量檢測試劑，節約成本，提高企業的經濟效益。
[0005]為解決上述技術問題，本發明的技術採用以下技術方案:
一種改進的蛋白質測定方法，包括以下步驟:
Cl)稱取待測樣品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸鉀和0.5g硫酸銅，然後量取10?12mL濃硫酸緩緩加入到消化管中，混合均勻後，在消化管瓶口放一小漏鬥，放入消化爐中消化；
(2)當消化管中內容物的顏色逐漸轉化成透明的淡綠色時，取下消化管冷卻後，向消化管中加入1mL 30%的過氧化氫溶液將消化管管壁上粘有的碳化粒衝到消化管底部；
(3)將消化管再次放入消化爐中繼續消化至呈透明為止，然後取下消化管，稍冷後將消化液小心移入10mL容量瓶中；
(4)蒸餾
吸取25mL消化液於定氮蒸餾器中，在其冷凝器的下端放置一個盛有50mL硼酸溶液和3滴甲基紅-溟甲酚綠混合指示劑的250mL錐形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在錐形瓶內的液面以下；將1mL質量分數為40%的氫氧化鈉溶液慢慢地加入蒸餾瓶中，迅速將塞子塞好，然後通入蒸汽進行蒸餾，蒸至液面達150mL時，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸餾水衝洗冷凝管下端，將洗液一併聚集於硼酸溶液中，讓玻璃管靠在錐形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度線以上，繼續蒸懼，蒸至液位達200mL ；
(5)滴定
用0.lmol/L的硫酸標準溶液滴定至溶液出現酒紅色為止，記錄所用硫酸標準溶液的體積；
(6)計算結果
X=(V-VO) Xc(H + ) X2X0.014XFX100/m 式中:X—蛋白質含量，g/100g;
V—滴定時消耗硫酸標準溶液的體積，mL ；
Vo—空白試驗消耗硫酸標準溶液的體積，mL ； C (H + )—硫酸標準溶液中H十的濃度，mol/L ； m—樣品的質量，g ；
0.014一氮原子的摩爾質量，kg/mol ；
F—氮換算為蛋白質的係數，乳粉為6.38，純穀物類(配方)食品為5.90，含乳嬰幼兒穀物(配方)食品為6.25。
[0006]進一步地,所述步驟(I)中濃硫酸的濃度為L 84g/mL。
[0007]進一步地，所述步驟(3)中消化時間為0.5?1.0h。
[0008]進一步地，所述步驟(4)中甲基紅-溟甲酚綠混合指示劑製備步驟為:用體積分數為95%的乙醇，將澳甲酚綠及甲基紅分別配成lg/L的乙醇溶液，使用時按澳甲酚綠:甲基紅為5:1的比例混合。
[0009]進一步地，所述步驟(4)中硼酸溶液濃度為30g/L
發明與現有技術相比具有的有益效果為:本發明提高了消化速度，縮短了測定時間，使企業不僅能快速獲得產品蛋白質的指標，還可以節省大量檢測試劑，提高了企業的經濟效益；此外，本發明經濟實用，更易滿足企業的需要。
【具體實施方式】
[0010]為讓本領域的技術人員更加清晰直觀的了解本發明，下面將對本發明作進一步的說明。
[0011]一種改進的蛋白質測定方法，包括以下步驟:
(1)分別稱取待測的三種樣品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸鉀和
0.5g硫酸銅，然後量取10?12mL濃硫酸(密度為1.84g/mL)緩緩加入到消化管中，混合均勻後，在消化管瓶口放一小漏鬥，放入消化爐中消化；
(2)當消化管中內容物的顏色逐漸轉化成透明的淡綠色時，取下消化管冷卻後，向消化管中加入1mL 30%的過氧化氫溶液將消化管管壁上粘有的碳化粒衝到消化管底部；
(3)將消化管再次放入消化爐中繼續消化至呈透明為止，約需0.5?1.0h ;然後取下消化管，稍冷後將消化液小心移入10mL容量瓶中；
(4)蒸餾、吸收和滴定。
[0012]吸取25mL消化液於定氮蒸餾器中，在冷凝器的下端放置一個盛有50mL硼酸溶液(30g/L)，3滴甲基紅一溟甲酚綠混合指示劑(用體積分數為95%的乙醇，將澳甲酚綠及甲基紅分別配成lg/L的乙醇溶液，使用時按lg/L澳甲酚綠:lg/L甲基紅為5:1的比例混合)的250mL錐形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在液面以下；將1mL氫氧化鈉溶液(質量分數為40%)慢慢地加入蒸餾瓶中(溶液應呈強鹼性)，迅速將塞子塞好，然後通入蒸汽進行蒸餾，蒸至液面達150mL時，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸餾水衝洗冷凝管下端，將洗液一併聚集於硼酸溶液中，讓玻璃管靠在錐形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度線以上，繼續蒸餾，蒸至液位達200mL。
[0013](5)滴定用硫酸標準溶液(0.lmol/L)滴定至溶液出現酒紅色為止，記錄所用硫酸標準溶液的體積。
[0014](6)計算結果
X= (V - VO) XC (H +) X2X0.014XFX100/m式中:x—蛋白質含量，g/100g;
V—滴定時消耗硫酸標準溶液的體積，mL ；
Vo—空白試驗消耗硫酸標準溶液的體積，mL ； c (H + )—硫酸標準溶液中H十的濃度，mol/L ； m—樣品的質量，g ；
0.014一氮原子的摩爾質量，kg/mol ；
F—氮換算為蛋白質的係數，乳粉為6.38，純穀物類(配方)食品為5.90，含乳嬰幼兒穀物(配方)食品為6.25。
[0015]本實施例所用試劑的量與傳統國標法試劑用量如表1:
表 I
【權利要求】
1.一種改進的蛋白質測定方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)稱取待測樣品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸鉀和0.5g硫酸銅，然後量取10?12mL濃硫酸緩緩加入到消化管中，混合均勻後，在消化管瓶口放一小漏鬥，放入消化爐中消化； (2)當消化管中內容物的顏色逐漸轉化成透明的淡綠色時，取下消化管冷卻後，向消化管中加入1mL 30%的過氧化氫溶液將消化管管壁上粘有的碳化粒衝到消化管底部； (3)將消化管再次放入消化爐中繼續消化至呈透明為止，然後取下消化管，稍冷後將消化液小心移入10mL容量瓶中； (4)蒸餾 吸取25mL消化液於定氮蒸餾器中，在其冷凝器的下端放置一個盛有50mL硼酸溶液和3滴甲基紅-溟甲酚綠混合指示劑的250mL錐形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在錐形瓶內的液面以下；將1mL質量分數為40%的氫氧化鈉溶液慢慢地加入蒸餾瓶中，迅速將塞子塞好，然後通入蒸汽進行蒸餾，蒸至液面達150mL時，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸餾水衝洗冷凝管下端，將洗液一併聚集於硼酸溶液中，讓玻璃管靠在錐形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度線以上，繼續蒸懼，蒸至液位達200mL ； (5)滴定 用0.lmol/L的硫酸標準溶液滴定至溶液出現酒紅色為止，記錄所用硫酸標準溶液的體積； (6)計算結果
X= (V — VO) XC (H +) X2X0.014XFX100/m
式中:X—蛋白質含量，g/100g; V—滴定時消耗硫酸標準溶液的體積，mL ； Vo—空白試驗消耗硫酸標準溶液的體積，mL ； c (H + )—硫酸標準溶液中H十的濃度，mol/L ； m—樣品的質量，g ； 0.014一氮原子的摩爾質量，kg/mol ； F—氮換算為蛋白質的係數，乳粉為6.38，純穀物類(配方)食品為5.90，含乳嬰幼兒穀物(配方)食品為6.25。
2.根據權利要求1所述的一種改進的蛋白質測定方法，其特徵在於:所述步驟(I)中濃硫酸的濃度為1.84g/mL。
3.根據權利要求2所述的一種改進的蛋白質測定方法，其特徵在於:所述步驟(3)中消化時間為0.5?1.0h。
4.根據權利要求3所述的一種改進的蛋白質測定方法，其特徵在於:所述步驟(4)中甲基紅-溟甲酚綠混合指示劑製備步驟為:用體積分數為95%的乙醇，將澳甲酚綠及甲基紅分別配成lg/L的乙醇溶液，使用時按澳甲酚綠:甲基紅為5:1的比例混合。
5.根據權利要求4所述的一種改進的蛋白質測定方法，其特徵在於:所述步驟(4)中硼酸溶液濃度為30g/L。
【文檔編號】G01N21/79GK104198646SQ201410403271
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月15日 優先權日:2014年8月15日
【發明者】張玉良, 陳凱松 申請人:廣州衡創測試技術服務有限公司