一種新的燈盞花乙素衍生物、其製備方法及其藥物組合物的製作方法
2023-12-05 15:40:11
專利名稱：一種新的燈盞花乙素衍生物、其製備方法及其藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及燈盞花乙素衍生物，具體涉及一種新穎的燈盞花乙素衍 生物，其製備方法及含有該化合物的藥物組合物，以及它們在心、腦血 管疾病等方面的應用。
背景技術：
燈盞花素是從燈盞花全林植物中分離提取出的以含燈盞花乙素為主
(>90%)、還含有少量燈盞花曱素的混合物(有效部位)，燈盞花乙素又 稱野黃茶香。燈盞花素具有活血化痴、散寒解表、舒筋活絡、祛風除溼 之功效，臨床上常用於治療心血管疾病。目前臨床中使用的燈盞花製劑， 其有效成分一般都是利用乙醇和乙酸乙酯進行提取的燈盞花素製劑，燈 盞花素在心腦血管疾病治療發明已有許多文獻報導。臨床應用表明其具 有增加腦、冠狀血管血流量，降低血管阻力，抗血小板、紅細胞凝聚， 降低血液粘稠度等作用，療效確切。還有大量的研究證實燈盞花素具有 抗炎、抗氧化、蛋白激酶抑制劑、糖尿病、腎病、風溼類風溼等疾病的 治療作用等。燈盞花素在臨床上廣泛用於治療腦血栓、腦梗塞以及類型 未定的中風後癱瘓、高血壓、腦栓塞、多發性神經炎、慢性蛛網膜等腦 血管意外所致癱瘓以及冠心病、心絞痛、治療痛風性關節炎等症。
由於燈盞花乙素難溶於水，口服生物半衰期短，絕對生物利用度低， 限制了它在醫藥領域中的應用。為了改善燈盞花乙素上述缺點以及擴大 其應用範圍，人們對其進行改造，旨在尋找新型的活性化合物。文獻報 道(f〃r. /.6W, 2006， 29, 5, 385-393 ),在燈盞花乙素糖戒 羧基上進行乙酯、千酯和羥乙醯胺酯的前藥合成，發現燈盞花乙素羥乙 醯胺酯在緩衝溶液(PH-4. 2)和水中的溶解度比燈盞花乙素分別^提高了 近10倍和35倍。然而，現有的燈盞花乙素或其衍生物的溶解性能不好，生物利用度 不高，治療效果也不夠理想。
發明內容
本發明的目的在於提供一新的燈盞花乙素衍生化合物，該化合物溶 解性能好，生物利用度高，療效確切，可用於心腦血管疾病等的預防和 治療。
本發明的另 一 目的在於提供一種本發明新的化合物的製備方法。 本發明進一步的目的在於提供一種改善或治療心腦血管、炎症和腫 瘤的藥物組合物。
本發明提供了 一種新的燈盞花乙素衍生化合物，在燈盞花乙素黃酮 結構的酚羥基上引入曱基後，進一步在糖羥基上引入乙醯基，獲得一新
結構的燈盞花乙素衍生物，其化學名稱為4， ，5，6-三甲氧基-8-(3,4,5-三乙醯基-葡萄醛酸)-黃芩素。
為了描述上的便利，下文中將在燈盞花乙素黃酮結構的酚羥基上引 入曱基後得到的產物4， ，5，6-三曱氧基燈盞花乙素簡稱為Al，進一步引 入乙醯基後得到的產物4， ，5，6-三曱氧基-8-(3, 4，5-三乙醯基-葡萄醛 酸)-黃茶素簡稱為A2。
Al的結構用式(I )表示，A2的結構用式(II )所示。式(II )所示的新的燈盞花乙素衍生化合物還可以其鹽的形式出現， 包括與無機鹼或有機》鹹形成的鹽。
本發明的A2的製備方法簡便，它是用工業化植物提取原料燈盞花素 作為起始原料，經過二步易於工業化的化學反應合成得到A2。具體包括 如下步驟
a、 將燈盞花素溶於有機溶劑中，加入曱醚化反應試劑和鹼，於室溫 下攪拌；
b、 步驟a反應得到的產物經分離提取得到Al;
c、 將A1溶解於有機溶劑中，加入乙醯化試劑和鹼，於室溫下攪拌；
d、 將步驟c反應得到的產物經分離提取得到A2。
其中，步驟a所述有機溶劑是DMF ( N， N-二曱基曱醯胺)和二氯甲烷 按體積比10: 0-10: 5得到的混合溶劑，用量為10 - 100毫升/克。混合 溶劑的用量是按照每克燈盞花素所需要的混合溶劑的毫升量計算。其中 用二曱基亞碸(DMSO)可替代N，N-二曱基曱醯胺(DMF)， 二氯乙烷可替 代二氯曱烷，其它類似的替換也是可以的。
其中，步驟a中所述曱醚化反應試劑優選碘曱烷，其用量按摩爾比 相對於反應底物為3-5: 1。
其中，步驟a中所述的鹼為M2C03或MHC03,其中M為鈉Na， K, Li, 用量按摩爾比相對於反應底物為3-10: 1。其中，步驟b具體為步驟a反應得到的產物以乙酸乙酯/甲醇為1 -10: 1 (V/V)用矽膠柱分離提取得到Al。
其中，步驟c所述有機溶劑是乙酸乙酯和二氯曱烷按體積比10: 0 -10:5得到的混合溶劑，其用量為10-100毫升/克。所述混合溶劑的用量 是按照每克Al需要的混合溶劑的毫升量來計算，其中有機溶劑可在類似 的有機溶劑中選擇替換。
其中，步驟c所述乙醯化試劑優選醋酸酐或乙醯氯，用量4要摩爾比 相對於反應底物為3 - 5 : 1。
其中，步驟c所述鹼為吡啶或三乙胺或二異丙基乙基胺，用量按摩 爾比相對於反應底物為3-10:1。
其中，步驟d具體為將步驟c反應得到的產物以乙酸乙酯/石油醚 按體積比為1: 1 - 10用矽膠柱分離提取得到A2。
上述製備A1的方法具有反應條件溫和、成本較低、易於操作及適宜 於工業化生產等優點。
發明人採用兩種與人類疾病相近的動物模型，測定多種藥效學指標， 綜合評價A2對急性心腦缺血的影響。動物實驗結果表明，A2在實驗條 件下，對心肌缺血有明顯保護作用，A2高劑量組40mg/kg顯示出了比 40mg/kg燈盞花素片和50mg/kg的尼莫地平片還要好的作用。本發明化合 物大劑量的使用，也沒有發現該化合物的毒副作用，證明其用藥安全。
本發明還提供了含有A2的藥物組合物，其中A2作為活性組分，還 包含藥學上可接受的載體。
本發明的化合物A2和藥物組合物可用於製備治療心腦血管疾病、炎 症或腫瘤的藥物。
所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，如賦形劑、 填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香 劑、表面活性劑等。
以A2作為活性組分，加入藥學上常規的載體，按照製備製劑的常規
7方法可以製成多種劑型，如口服劑、注射製劑、鼻噴霧劑等等。
本發明的藥物組合物可按照各種製劑類型的常規方法使用，使用劑 量根據不同疾病的類型、病情程度以及給藥途徑等進行調整，如口服途
徑每次服用劑量在10mg—100mg，每天劑量在20mg-300mg;注射途經每 次5mg-80mg,每天1-2次。根據患者個體情況用藥，通常每天治療劑量 口服50mg-200mg、注射劑量20mg-100mg，預防口服用藥為15mg-60mg。
具體實施例方式
下面具體描述Al和A2的製備方法，A2的藥理學作用以及本發明藥 物組合物的常規製劑的製備方法。
製備實施例1 Al的製備
5克(10. 8mmo1 )燈盞花素溶解於100毫升DMF和二氯曱烷混合溶劑 中，加入4. 6克碘曱烷和7. 5克(54mmo1 )碳酸鉀，於室溫下攪拌2天， TLC (薄層層析法)顯示反應原料已完全，加入50毫升1N鹽酸，並用50 毫升乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，用無色硫酸鈉乾燥，旋幹有機溶 劑，以乙酸乙酯/曱醇為1-10: 1 (V/V)用矽膠柱分離提取，得到3.1 克淡黃色固體Al,產率為60%。 W麗R( 400MHz, CDC13) 5 7.78 (d, 2H), 6.92 (d， 2H), 6.60 (s， 1H), 6.50 (s， 1H) ， 4.94 (d, 1H), 4.01 (d, 1H), 3.83 (s， 3H)， 3.81 (s， 3H), 3.71 (s， 3H) ， 3.47-3.67 (m， 5H); C"麗R ( 100MHz， CDC13) 5 181.76， 181.68, 168.14， 163.59， 163.54, 161.79, 155.15， 152.38， 152.10， 151.62, 132.25, 127.28， 122,17， 113.62, 105.97， 102.82， 100.13， 93.63, 75.02, 74.77, 71.90， 70.31， 60.00， 54.63， 51.54; MS (ESI) M+ 504。
製備實施例2 A2的製備
將實施例1得到的504毫克4， ， 5， 6-三曱氧基燈盞花乙素(Al)(溶 解於10毫升乙酸乙酯和二氯曱烷混合溶劑中，加入O. 5毫升乙酸酐和一 滴吡啶於室溫下攪拌6小時，TLC^r測原料反應完畢，加入20毫升飽和食鹽水和10毫升乙酸乙酯，萃取留下有機相，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾溶
劑，以乙酸乙酯/石油醚按體積比為1:1-10用矽膠柱分離提取得到421 毫克淡黃色產物A2，產率為66.8%。 H'麗R( 400MHz， CDC13) 5 7.86 (d， 2H)， 7.03 (d， 2H)， 6,75 (s， 1H) ， 6.59 (s， 1H) ， 5.40 (m， 3H) ， 5.26
(d， 1H)， 4.25 (d， 1H)， 3.90 (s， 3H), 3.85 (s， 3H) ， 3.76 (s， 3H)， 2.11 (s， 3H), 2.08 (s， 3H), 2.07 (s， 3H) ， C"NMR ( 100MHz， CDC13)
5 182.78， 169.98， 169.36， 169.23, 166.82， 164.54, 162.71， 155.26, 153.94, 152.27， 134.45, 128.13, 123.19, 114.49， 107.96, 103.98， 99.63， 96.26， 72.78， 71.21， 70.51， 68.95， 61.09， 55,51， 53.09， 20.59， 20.48.
實驗例一 A2對心腦血管缺血保護作用的藥理學研究
大量的藥理研究證明，燈盞花素具有擴張腦血管，降低腦血管阻力， 增加腦血流量，改善微循環，提高血腦屏障通透性，增強機體巨噬細胞 吞噬免疫作用，對抗垂體後葉素所至腦缺血缺氧，並能對抗由二磷酸腺 苷(ADP)引起的血小板凝聚作用。燈盞花素在臨床上廣泛用於治療腦血 栓、腦梗塞以及類型未定的中風後癱瘓、高血壓、腦栓塞、多發性神經 炎、慢性蛛網膜等腦血管意外所致癱瘓以及冠心病、心絞痛、治療痛風 性關節炎等症。
下面通過動物藥理學實驗來說明本發明化合物A2的活性，並且通過 與燈盞花素及尼莫地平的對比研究來說明其顯著的治療效果。
選擇與人類疾病相近且重複性好的動物模型，是評價藥物治療效果
的基礎。下面生物實驗中採用兩種與人類疾病相近的動物模型，測定多 種藥效學指標，綜合評價A2對心腦缺血的作用。
l材料
1. 1藥品與試劑
實施例合成A2純品。市售燈盞花素片，20mg/片，批號20070418，由雲南省藥物研究所製藥廠生產。尼莫地平(尼達爾片)，20mg/片，天津 市中央藥業有限公司生產，批號070301。以上樣品均用0. 5%羧曱基纖維 素鈉(CMC-Na)配製成所需濃度的混懸液供大鼠灌胃用。
紅四氮唑(TTC)，進口， AMRESCO分裝，批號0765,上海生工出品。腺
苷二磷酸鈉(ADP),批號A2754， Sigma公司生產，進口分裝，北京鼎國生
物技術發展中心出品。
AST(紫外動力學法，批號0704151 )、LDH(紫外動力學法，批號0704102、
CK-MB (選擇性抑制動力學法，批號100412 )、 TT (批號0504052 )、 PT(批
號0604161 )、 APTT (批號0604131 )及FIB (批號060405 )測定試劑盒，
均為四川邁克科技有限公司出品。
1. 2動物
清潔級SD大鼠，雄性，體重240 385g，合格證號SCXK (滬)2003-0002， 來源於上海西普爾一必凱實驗動物有限公司，由昆明醫學院實^^動物中 心代購。
1. 3儀器
TM1024全自動生化分析4義，日本東京抹式會社；Centrifuge 5810R 型冷凍離心機，德國e卯endoff公司；BS110型電子分析天平，賽多利斯 />司；Millipore超純水處理系統，美國Mi 11 ipore/>司；6951D型心電 機，上海光電公司；C2000-4血凝儀及LBY-NS血小板聚集儀，北京普利 生集團。
1.4統計
結果以J士SD表示，正態分布數據用t檢驗，偏態分布數據用秩和 檢驗。
2方法
2. 1大鼠冠狀動脈結紮心肌缺血實驗[1] 2. 1. 1實^^分組及造型
10雄性SD大鼠，330 ~ 385g,按體重隨機分為空白組、模型組、燈 盞花素片40mg/kg組、A2 20mg/kg組及A2 40mg/kg組。各組動物4要劑量 每曰灌胃給藥一次，連續5天，空白組和模型組給予等容量0. 5%CMC-Na 10ml/kg體重。末次給藥後30min，用12°/。水合氯醛腹腔注射350mg/kg麻 醉動物，行開胸手術暴露心臟，於肺動脈圓錐及左心房間找出冠狀動脈 左前降支，距根部2 3mm處結紮，快速心臟復位關閉胸腔。，I手術組僅 置線頭而不結紮。
2. 1. 2檢測指標
分別記錄結紮前及結紮後5分、30分、lh、 2h、 4h和24h肢體II導 聯心電圖，測量S-T段(J點)變化值。待記錄24h心電圖後，頸動脈插 管取血二份 一份分離血清按試劑盒方法測定AST、 LDH及CK-MB的活性； 一份用3. 8°/4句櫞酸鈉以1: 9抗凝，1000rpm離心5min製備富血小斧反血漿 (PRP)， 3500rpm離心10min製備貧血小板血漿 (PPP )。 4姿比濁法測定 ADP-2Na誘導的血小板聚集率，ADP的終濃度為6mol/L;按試劑盒方法分 別測定TT、 PT、 APTT及FIB。耳又血後迅速摘出心臟，置於冰生理鹽水中泵 出心腔內積血，去掉心房及脂肪組織，吸乾水分稱取心室重，隨後沿冠狀 切成5片，在1訂TC溶液中避光於37°C孵育染色10min。經染色後，正 常心肌組織呈紅色，而梗死組織呈白色，將梗塞部位剪下稱重，計算壞死 部分佔心室重的百分比為心肌梗塞範圍。
2.2大鼠MCAO局灶性腦缺血實— 瞼 2. 2. 1實驗分組及造型
雄性SD大鼠，體重240-290g,分組及劑量同前，另設一陽性對照藥 尼莫地平50mg/kg組。各組動物每日按劑量灌胃給藥一次，連續5天。 末次灌胃後30min，用12%水合氯醛腹腔注射350mg/kg麻醉動物，左側 臥位，沿右耳眼線中點切開皮膚，分離顳肌，絞斷顴骨，在顴骨根前方 用牙科鑽鑽孔，暴露MCA，在大腦下靜脈和嗅束間用針挑起，斷之，棉球 壓迫止血後，分層縫合肌肉和皮膚。假手術組除了不挑斷MCA外，其餘步驟相同。
2. 2, 2觀察指標
動物於造模後6h及24h根據運動等行為表現進行神經功能評分，以 此作為腦功能障礙指標。評分採用盲法，即評分者不知道給藥的情況， 評分標準如下
__^_狀 _行為障礙評分
提鼠尾離開地面約一尺，手術對側前肢出現腕屈曲，肘屈曲，肩內旋 l-4 或有腕，肘屈曲又有內旋。
將動物置於平地面上，分別推雙肩向內側，^r查阻力。 1-3
將動物置於金屬網面上，觀察兩前肢的張力。 1-3
將動物置於平地面上，觀察有無轉圈。 l-2
滿分 12
以上標準滿分為12分，分數越高，表明動物行為障礙越嚴重。 造模24h，經神經功能評分後，頸動脈插管取血， 一份分離血清按試 劑盒方法測定AST及LDH的活性； 一份用3. 8%枸櫞酸鈉以1: 9抗凝， 1000rpm離心5min製備富血小板血漿(PRP ), 3500rpm離心10min製備 貧血小板血漿(PPP)。按比濁法測定ADP-2Na誘導的血小板聚集率，ADP 的終濃度為6mol/L;按試劑盒方法分別測定TT、 PT、 APTT及FIB。取血 後快速斷頭取腦，放入水生理鹽水中去除嗅球、小腦和低位腦幹，吸乾 水分稱取腦重，沿冠狀切成5片，置入5ml含有4。/。TTC及lmol/LK2HP040. lml 的溶液中，避光於37。C溫孵30min,其間每隔7-8min翻動一次，經染色 後，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗死組織呈白色，將梗塞部位剪下稱重， 以重量求面積法計算梗死組織重量佔雙側大腦半球重的百分比作為腦梗 塞範圍。
3結果3. 1對大鼠冠狀動脈結紮心肌缺血的影響
3. 1. 1對心肌缺血心電圖S-T段的影響:
模型組大鼠結紮冠狀動脈後，心電圖上S-T段(J點)明顯升高或下 降，而假手術組則變化不大，表明實驗造模成功。A2高劑量組能明顯減 少各時間點S-T段的變化，表明對心肌缺血時的心電圖有明顯改善作用； A2 j氐劑量組^義對缺血5 min、 30min和24h的心電圖有改善作用。結果見 表l。
表1 A2對心肌缺血大鼠心電圖S-T段的影響
組劑量動物結紮後ST段變化(X士SD， mv)
別(/kg)數5min30minlh2h4h24h
(只)
假手10ml100. 06 ±0. 05 ±0. 04 ±0. 06 ±0. 06 ±0. 01 ±
術0. 060. 050. 050. 040. 050. 02
模10ml110. 37 ±0. 240. 140. 16 ±0. 160. 18
型0. 12AA± 0. 09 A厶± 0. 08A0. 08AA± 0. 10 A厶±0. 14 A厶
燈盞40mg120. 15 ±0. 09 ±0. 07 ±0. 07 ±0. 08 ±0. 02 ±
花素0. 14"0. 08"0. 06*0. 07"0. 06*0. 03"
片
A240mg120. 14 ±0. 060. 05 ±0. 05 ±0. 06 ±0. 02 ±
0.『±0. 05"0. 04"0. 04**0. 05*0. 02"
A220mg120. 17 ±0. 12 ±0. 11 ±0. 11 ±0. 11 ±0. 07 ±
0. 14**0. 08"0. 090. 070. 090. 08*
與i叚手術組相比:AAP<0. 01;與才莫型組相比:*P<0. 05, **P<0. 01。
3. 1. 2對心肌缺血大鼠心肌酶學的影響
模型組大鼠血清AST、 LDH及CK-MB活性有不同程度的增高，尤以
13CK-MB及LDH活性增高更明顯，表明心肌損傷造模成功。A2兩種劑量均 能明顯降低CK-MB和LDH的釋放，並具有降低AST的趨勢，表明減輕心 肌細胞損傷作用顯著；兩個給藥組大鼠的心肌梗塞範圍均顯著小於模型 對照組，與模型組相比分別縮小60. 87%和45. 65%。結果見表2。
表2 A2對大鼠心肌梗塞範圍和酶學的影響
組劑量動物數心肌酶學(X士SD,ku/L)心肌梗塞範圍別(/kg)(只)ASTLDHCK-MB(X土SD,縮小率
°/。)
假手術10ml100. 52 ±0.82 ±0.210.65 ±0.260. 19 ±一
0. 210. 27
模型10ml110. 72 ±1.08 ± 0.27 2.,06± 1. 306. 44 ±_
0. 35厶厶3. 62AA
燈蓋花40mg120. 68 ±0. 94 ± 0. 420. 92 ±3. 09 ±52. 02
素片0. 330. 64*1. 58*
A240mg120. 61 ±0. 61 ±0. 80 ±2. 52 ±60. 87
0. 190. 25"0. 67'2. 14*
A220mg120. 61 ±066 ± 0. 31"0. 71 ±3. 50±45. 65
0. 250. 46"2. 68'
與假手術組相比:AP<0. 05, AAP<0.01;與模型組相比:*P<0. 05, **P < 0. 01。
3. 1. 3對冠狀動脈結紮心肌缺血大鼠血小板聚集及凝血的影響
大鼠冠狀動脈結紮致心肌缺血造模後，血小板聚集率明顯升高，ATPP 時間有縮短趨勢，纖維蛋白原的含量明顯增加。各給藥組能明顯抑制ADP 誘導的血小板聚集，並有延長TT、 APTT時間的趨勢，A2還具有降低纖維 蛋白原含量的趨勢。結果見表3。
表3 A2對冠狀動脈結紮致心肌缺血大鼠血凝及血小板聚集的影響劑量動物數血凝指標血小板
別(/kg)(只)TTPTAPTTFIB聚集率
(s)(s)(s)(g/L)(%)
假手術10ml1077. 14 ±23. 74 ±6. 6585. 95 ±3. 57 ±49. 00 ±
25. 1230. 160. 496. 34
模型10ml1172. 37 ±24. 56 ±4. 9656. 58 ±4. 75 ±57. 50
復7941. 581. 19AA±4. 00AA
燈盞花40mg1292. 49 ±26. 58 ± 3. 8169. 74 ±3. 90 ±48. 93 ±
素片34. 4433. 820. 967. 22"
A240mg1293. 04 ±25. 75 ± 5. 2575. 96 ±3. 95 ±48. 22 ±
35. 6735. 860. 845. 55"
A220mg1292. 41 ±25. 90 ± 3. 5278. 17 ±4. 77 ±51. 20±
42. 3828. 131. 117. 41*
與,i手術組相比AP < 0. 05， AAP < 0. 01;與才莫型組相比*P < 0, 05， **P< 0. 01。
3. 2對MCAO致局灶性腦缺血大鼠的影響
3. 2. 1對MCAO大鼠神經功能障礙及腦梗塞範圍的影響
大鼠MCAO造模後，活動減少，出現不同程度的運動障礙，模型組與 假手術組相比差異顯著。各給藥組均能明顯改善MCAO大鼠的神經功能障 礙，縮小腦梗塞的範圍，A2分別縮小64. 65% 、 59.11%。結果見表4。
表4 A2對MCAO大鼠神經功能障礙及腦梗塞範圍的影響
組 另'J劑量動物數腦梗塞範圍行為學評分(X土SD，分)
(/kg)(只)(X±SD, %) 縮小率6h 24h
假手術10ml100.04 ±0.09 -0. 6± 0.60 ±1.08
0. 97模型10ml115 77±2 厶A 59—8. 73± 1.01AA7. 54 ± 1. 29
尼莫地平50mg122.27 ±2.56"60. 666. 50±1.,68"4. 83±
1. 40"
燈盞花素片40mg112.70± 1.42"53. 216. 27 ± 1.,01"5. 18 ±
1. 33"
A240mg122.04 ± 1.42"64. 655. 75 ± 1.40"4. 25 ±
1. 59"
A220mg122.36 ± 1.80"59. 116. 42 ± 1.62*'4. 92 ±
1. 30"
與有i手術組相比AP < 0. 05, AAP < 0. 01;與4莫型組相比*P < 0. 05， **P< 0. 01。
3. 2. 2 對ADP誘導的MCAO大鼠血小板聚集及凝血的影響
大鼠MCAO造模後，血小板聚集率明顯增加，凝血時間有所縮短而纖 維蛋白原的含量有增加的趨勢。兩種樣品均能明顯抑制由ADP誘導的血 小板聚集，並具有降低纖維蛋白原含量的趨勢，A2有延長APTT時間、有 延長TT時間的趨勢。結果見表5。
表5 A2對MCAO大鼠血凝及血小板聚集的影響(X ± SD )
組 另'J劑量動物血凝指標血小板
(/kg)數TTPTAPTTFIB聚集率
(只)(s)(s)(s)(g/L)(%)
假手術10ml1087. 96 ±28. 02± 81.63±3. 70 ±46. 30 ±
29. 565. 4939. 800. 5810. 97模型10ml1171. 58 ±25. 82 ±57. 86 ±4. 50±60. 3
35. 647. 7932. 721. 408 ± 9. 28A
尼莫地50mg1288. 55 ±23. 38 ±61. 02 ±3. 52 ±54. 15 ±
平32. 248. 2344. 791. 147. 76
燈盞花40mg1198. 07 ±26. 78 ±74. 79±3. 24 ±49. 5 ±
素片36. 833. 5126. 260. 90'6. 80"
A240mg1262. 04 ±23. 43 ±75. 15 ±3. 59 ±52. 38 ±
復788. 6727. 400. 755. 23*
A220mg1295. 55 ±25. 56 ±62. 48 ±3. 38 ±50. 52 ±
24. 815. 3129. 071. 084. 06"
與作i手術組相比AP<0. 05， AAP<0. 01;與才莫型組相比*P < 0. 05, **P< 0. 01。
3. 2. 3對MCAO大鼠血清AST、 LDH及體重的影響
模型組大鼠血清AST及LDH活性明顯增高而手術後24h體重顯著下 降，兩給藥組均能明顯降低LDH的釋放，A2還能明顯降低AST活性，能 明顯對抗造模大鼠的體重減輕，表明兩樣品減輕腦組織損傷作用顯著。 結果見表6。
表6 A2對MCA0大鼠血清AST、 LDH及體重的影響_
組 劑量動物數 體重(X土SD, g) 血清酶(X土SD，
另'J (/kg)(只) u/L))
給藥前手術前 術後6h 術後 AST LDH
_^_
，i手術10ml 10 258. 0 ±269. 5 ± 258. 0 ± 255. 5 ±156. 0±566. 1 ±
15.516.6 15.8 16.651.0 191.2
17模型10ml11257. 3 ±267. 7 ±252. 3 ±240. 0 ±246. 6 ±907. 1 ±
10. 19. 67. 58. 7A121. 5A256. 7"
尼莫地50mg12259. 6 ±265. 8 ±257. 1 ±249. 6 ±198. 6 ±536. 7 ±
平14. 512. 911. 410. 5*118. 2262. 8"
燈盞花40mg11259. 1 ±267. 7 ±256. 8 ±247. 3 ±244. 3 ±719. 5 ±
素片13. 019. 415. 715. 4183. 6133. 4'
A240mg12256. 3 ±265. 8 ±253. 8 ±244. 2 ±152. 9 ±472. 0 ±
13. 412. 312. 012. 133. r231. 8"
A220mg12257. 9 ±268. 8 ±258. 3 ±250. 0 ±171. 2 ±571. 1 ±
11. 512. 311. 815. 2*71. 5287. 3"
與々支手術組相比AP<0. 05， AAP<0. 01;與才莫型組相比:*P<0. 05, **P < 0. 01。
4.結論
選擇與人類疾病相近且重複性好的動物模型，是評價藥物治療效果 的基礎。本研究採用兩種與人類疾病相近的動物模型，測定多種藥效學 指標，綜合評價兩種樣品對急性心腦缺血的影響。結果表明，A2能明顯 改善冠狀動脈結紮致心肌缺血大鼠的心電圖變化，降低血清CK-MB及LDH 的活性，縮小心肌梗死範圍，抑制血小板聚集，並具有延長凝血時間和 降低纖維蛋白原的趨勢，提示其對心肌缺血有明顯保護作用。A2不僅可 以減少MCAO大鼠腦梗塞範圍，使行為障礙程度得到明顯改善，血清中LDH 及AST的活性明顯降低；同時還能明顯抑制ADP誘導的血小板聚集，並 有一定的抗凝趨勢，從而抑制血栓形成。研究結果表明，A2對心腦缺血 具有顯著保護作用。
在所採用的兩種缺血性心腦血管疾病模型上，A2在實驗條件下，對 心肌缺血有明顯保護作用，A2高劑量組顯示出了比40mg/kg燈盞花素片 和50mg/kg的尼莫地平片還好的作用。實驗例二本發明化合物A2和燈盞花乙素的溶解性比較研究
表7 本發明化合物A2和燈盞花乙素的溶解性比較
化合物H20MeOH95%EtOHn-BuOH0. Ol麗aOH
燈盞花乙素極微溶解略溶略溶略溶溶解
A2極微溶解溶解溶解易溶溶解
注按2005CP規定，極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微 溶解、幾乎不溶和不溶的定義。
從表7可以看出，A2較之燈盞花乙素，生物理化性質明顯改善，即 脂溶性明顯的改善，進而可以明顯提高其生物利用度，提高療效。
通過下面的實驗說明本發明化合物A2在製備藥物製劑上的應用。
製劑製備實施例1: A2凍乾粉針劑的製備
原料配方(製備1000支，產品規格60mg/支)
A2 60g
甘露醇 100g
NaCl 5g
製備方法
4要處方稱耳又A2，加注射用水1000ml，攪拌、並用0. Ol麗aOH調節佳: 溶解，溶解後加入甘露醇100g、 NaCl 5g,攪拌使溶解完全，加注射用水 至總配液量2000ml ，加入總配液量1%的針用活性炭，吸附30分鐘，先 用濾紙加砂棒過濾除去活性炭，濾液經過0. 45 jam的濾膜過濾等處理後， 在100級條件下，用0. 2jum以下的濾膜精濾。精濾液送入灌裝^L，灌裝 2. Oml/支，半壓塞，送入冷凍真空乾燥機，快速冷卻至零下4(TC,保持 2小時，抽真空至約1Pa以下，逐步緩慢升溫至3rC，保持2小時。壓 塞，取出製品，扎蓋、包裝、檢驗合格得成品1000支。製劑製備實施例2 A2滴丸的製備
成^f分 1000丸
A2 50克
聚乙二醇-6000 200克
製備方法
a)稱取粉碎過的(A2) 50克。b)取200克聚乙二醇(6000 )於 100。C左右水浴中熔化，熔化後65-75。C恆溫。c)將上述藥物在攪拌下逐 漸加入到聚乙二醇-6000恆溫液中，充分攪拌使其混合均勻，送至滴丸機 的貯藥罐內。於65-80。C恆溫、攪拌混合均勻後即可滴制。二曱矽油或液 體石蠟為冷凝液，冷卻液溫度為3. 5-irC,滴速控制在60 - 80滴/分鐘 。滴制完畢，取出，吸去表面矽油或石蠟油，在室溫條件下自然乾燥定 型後，在S0土2。C乾燥製得(A2) 口服滴丸。
製劑製備實施例3 A2片劑的製備
成4分 1000片
A2 40克
乳 糖 30克
低取代羥丙基纖維素(L-HPC) 5 0克
羧曱基澱粉鈉(CMS-Na) 5克
乙醇 30毫升
水 54毫升
微粉矽膠 5克
製備方法
按比例稱取粉碎過的A2、乳糖、低取代羥丙基纖維素、羧曱基澱粉 鈉等，按常規工藝處理後，混合均勻，加入適宜乙醇作潤溼劑製備軟材， 制粒，乾燥，整粒，取顆粒檢查合格後，加入助流劑微粉矽膠，混合均勻後壓片。質量檢查合格後分裝，貼籤，包裝即得A2口腔崩解片。
以上實施例只是用於進一 步說明本發明，而不是用來限制本發明的 保護範圍。凡是在本發明保護範圍內所做出的具體實施方式
及應用範圍 上的些許變動，也屬於本發明的保護範圍。
權利要求
1、一種新的燈盞花乙素衍生物，其結構如式(II)所示
2、 權利要求1所述燈盞花乙素衍生物的製備方法，其特徵在於包括 如下步驟a、 將燈盞花素溶於有才幾溶劑中，加入曱醚化反應試劑和石威，於室溫 下攪拌；b、 步驟a反應得到的產物經分離提取得到4， ，5,6-三曱氧基燈盞花 乙素；c、 將步驟b得到的4， ， 5， 6-三曱氧基燈盞花乙素溶解於有機溶劑中， 加入乙醯化i試劑和i鹹，於室溫下拔:4半；d、 將步驟c反應得到的產物經分離提取後即得。
3、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟a所述有機溶 劑是N，N-二曱基甲醯胺和二氯曱烷按體積比10:0-10:5得到的混合溶 劑，用量為10-100毫升/克。
4、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟a中所述曱醚 化反應試劑為碘曱烷，其用量按摩爾比相對於反應底物為3-5: 1。
5、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟a中所述的鹼 為M2C03或MHC03，其中M為鈉Na， K， Li，用量按摩爾比相對於反應底物 為3-10: 1。
6、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟b具體為步驟a反應得到的產物以乙酸乙酯/曱醇為1-10: 1 (V/V)用矽膠柱分離 提取得到4， ， 5， 6-三曱氧基燈盞花乙素。
7、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟c所述有機溶 劑是乙酸乙酯和二氯甲烷按體積比10: 0 - 10: 5得到的混合溶劑，其用量 為10-100毫升/克。
8、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟c所述乙醯化 試劑為醋酸酐或乙醯氯，用量4姿摩爾比相對於反應底物為3-5 : 1。
9、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟c所述鹼為吡 啶或三乙胺或二異丙基乙基胺，用量按摩爾比相對於反應底物為3-10: 1。
10、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於步驟d具體為 將步驟c反應得到的產物以乙酸乙酯/石油醚按體積比為1: 1 - 10用石圭膠 柱分離提取後即得。
11、 一種用於治療心腦血管疾病、炎症或肺瘤的藥物組合物，其特 徵在於以式(II )所述的燈盞花乙素衍生物為活性組分，還包含藥學上 可接受的載體。
12 、根據權利要求11所述的藥物組合物，其特徵在於按照製劑的常 規製備方法製成包括口服劑、注射製劑或鼻噴霧劑的常規製劑。
13、權利要求1所述的燈盞花乙素衍生物在製備治療心腦血管疾病、 炎症或腫瘤的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種新的燈盞花乙素衍生物、其製備方法及其藥物組合物。本發明化合物可以燈盞花素作為起始原料，經甲醚化和乙醯化兩步反應後再經分離得到，其化學名稱為4』，5，6-三甲氧基-8-(3，4，5-三乙醯基-葡萄醛酸)-黃芩素。本發明化合物及其藥物組合物可用於心腦血管疾病、炎症和腫瘤的治療，具有溶解性能好、生物利用度高及療效顯著的優點。
文檔編號C07H17/07GK101585859SQ20081009767
公開日2009年11月25日 申請日期2008年5月22日 優先權日2008年5月22日
發明者徐樹光, 普俊學, 朱華結, 楊兆祥, 毅 金 申請人:昆明製藥集團股份有限公司