測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法

2023-12-05 22:43:46

測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法
【專利摘要】本發明提供了一種測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法，其步驟如下：（1）製備對照品溶液；（2）製備供試品溶液；（3）精密吸取人參皂苷對照品溶液進樣，測定峰面積，得標準曲線方程；（4）精密吸取的供試品溶液進樣，測定峰面積，根據上述標準曲線計算樣品皂苷含量。本發明的方法基於高效液相色譜-蒸發光散射檢測，該法專屬性好，重現性好，穩定性強，從而使得對產品的質量控制和用藥安全得到保證。
【專利說明】測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物質量控制領域，特別涉及一種測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法。
【背景技術】
[0002]蒸枝核(LycheeSeed, Litchi Seed),為無患子科植物蒸枝(Litchi ChinensisSonn)的乾燥成熟種子，別名荔仁、荔核、大荔核，收載於《中國藥典》2010版一部，性溫，味甘、微苦，具有行氣散結，祛寒止痛功效。《本草綱目》記載，荔枝核「止渴、益人顏色、食之止煩渴」(煩渴病，現代醫學稱為糖尿病)。研究表明，荔枝核有降低血糖、調節血脂、提高抗氧化、抑制B肝病毒表面抗原的作用。蒸枝核所含成分研究較為充分，主要成分有阜苷、黃酮及花色素類、植物留醇類、鞣質及多酚類、脂肪酸、胺基酸、蛋白質和多糖等。實驗研究和臨床治療顯示荔枝核提取物能夠顯著降低血糖和血脂，有效治療糖尿病及代謝症候群。充分利用本地豐富的荔枝核資源，開發成安全有效、質量可控的治療糖尿病的藥物供臨床應用，對改變因生活方式改變而引起的糖尿病患病率居高不下的趨勢，具有重要的社會意義和市場價值。
[0003]中國專利CN102048885公開了一種製備荔枝核提取物的提取工藝，通過該工藝獲得的提取物主要成分為荔枝核皂苷，含量達85%以上，其製備工藝為:將荔枝核粉碎為20目大小，取適量，加入3倍量的水浸潤10分鐘，稱取1%重量(以藥材計)的纖維素酶、1%重量(以藥材計)的果膠酶和1%重量(以藥材計)的葡聚糖酶加入其中，混勻，控溫50°C酶解3小時後加入3倍量的70%乙醇，超聲提取40分鐘，濾過，濾液減壓回收乙醇及濃縮，濃縮液經大孔樹脂吸附，再用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓回收乙醇及濃縮得浸膏，將浸膏真空低溫乾燥即得荔枝核提取物。該提取物可作為中間體加入適量製藥輔料後製成用於治療糖尿病的藥物。為保證藥物的安全、有效、穩定，有必要對作為中間體的提取物的質量進行監控。
[0004]目前，作為原料藥材的荔枝核為《中國藥典》收載的法定藥材，其中僅通過鑑別、浸出物等指標進行簡單的質量控制，並無有效成分的含量測定項。荔枝核製劑僅有文獻報導採用高效液相色譜法，以原兒茶酸為對照測定荔枝核複方製劑「降糖片」中的原兒茶酸含量作為質控指標(郭宇潔等，降糖片中荔枝核提取工藝優選和定量測定，《中國實驗方劑學雜誌》，2009年，第15卷，第8期:50-52)，原兒茶酸為黃酮類成分而非皂苷類成分，因此不具參考性。從現有文獻對荔枝核皂苷成分的含量測定方法分析，普遍是採用皂苷與香草醛-濃酸(高氯酸、硫酸、冰醋酸等)顯色後進行紫外分光光度法進行測定，其原理是強酸使皂苷的酚羥基脫水，再與香草醛縮合形成共軛體系而顯色(方歡樂等，荔枝核皂苷含量測定及提取工藝優選研究，《亞太傳統醫藥》，2010年，第6卷(第3期):17-19.)。該方法原先用於測定人參皂苷等成分。但荔枝核提取物中除含有皂苷成分外，也含有多酚、原花青素等成分，這類成分也具有酚羥基結構，因此也能與香草醛-濃酸反應顯色，也有文獻報導採用該法測定荔枝核中原花青素的含量(丁麗，荔枝核化學成分的研究(天津科技大學碩士學位論文，2006年)，《中國優秀碩士論文全文資料庫》)。因此採用該方法測定荔枝核提取物的皂苷含量，將會使測定值偏高，不能反映提取物中皂苷的真實含量，不利於提取物的質量控制。因此，建立一種能準確檢測荔枝核提取物皂苷含量的質量檢測方法具有現實的意義。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是針對以上技術問題，提供一種專屬性好，重現性好，穩定性強的測定中藥荔枝核提取物中皂苷含量的方法。
[0006]本發明的目的是通過以下技術方案實現:
[0007]—種測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法，其步驟如下:
[0008](1)製備對照品溶液:取人參皂苷Rgl對照品，置於容量瓶，加入甲醇溶解，定容，搖勾，製成對照品溶液；
[0009](2)製備供試品溶液:取荔枝核提取物粉末1.0g，精密稱定，加50mL甲醇超聲提取30min,濾過，濾液回收甲醇至淨，殘洛加水10mL使溶解,轉移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10mL，合併正丁醇萃取液，於水浴上蒸乾，殘渣以色譜純甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，並以色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.2 μ m微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液；
[0010](3 )精密吸取人參皂苷對照品溶液0.5、1、3、5、10、20 μ L進樣，測定峰面積；以不同的進樣量C的對數值和峰面積積分值Α的對數值進行回歸，得標準曲線方程:A=l.8152C-1.3038，R2=0.9918 ；
[0011](4)精密吸取供試品溶液10μ L，進樣，測定峰面積，根據上述標準曲線計算樣品皂
苷含量。
[0012]根據本發明的方法，所述步驟(1)中的對照品溶液每毫升含人參皂苷Rgl0.10mg。
[0013]根據本發明的方法，，所述色譜條件為:色譜柱用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充齊U，規格為:4.6mmX 250mm, 5 μ m ;流動相為甲醇-水(70:30)，流速為1.0mL/min,柱溫為30°C ;檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度為90°C，氮氣流速為2.0L/min。
[0014]經本法測定，專利CN102048885中所公開的荔枝核提取物所含皂苷以浸膏乾重計不少於0.8g/g。
[0015]與現有技術相比，本發明基於高效液相色譜-蒸發光散射檢測(HPLC-ELSD)，提供一種新的荔枝核皂苷的含量測定方法，該法專屬性好，重現性好，穩定性強，從而使得對產品的質量控制和用藥安全得到保證。
【具體實施方式】
[0016]實施例1
[0017]1、儀器:
[0018]AgilentllOO高效液相色譜儀(Agilent公司，美國),包括脫氣機，四元梯度泵，自動進樣器，柱溫箱和HP Chemstation工作站；Allteeh ELSD2000檢測器(Allteeh公司，美國)；AE240型電子分析天平(梅特勒一託利多儀器有限公司)；Buchi旋轉蒸發儀(Buchi公司，瑞士)；KQ3200B超聲波清洗器(崑山市超聲儀器有限公司)。
[0019]2、試藥:[0020]荔枝核提取物(按照專利CN102048885方法自制);人參皂苷Rgl對照品(中國食品藥品檢定研究院)；正丁醇(分析純)；甲醇(色譜純)。
[0021]3、色譜條件:
[0022]色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB_C18 柱，規格為:4.6mmX 250mm, 5 μ m;流動相為甲醇-水(70:30)，流速為1.0mL/min，柱溫30°C ;檢測器為蒸發光散射檢測器，檢測參數:漂移管溫度90°C，氮氣流速為2.0L/min。
[0023]4、試驗方法:
[0024]4.1對照品溶液的製備:
[0025]精密稱取人參皂苷Rgl對照品，置於容量瓶，加入甲醇溶解，定容，搖勻，製成每毫升含人參皂苷RgA 10mg的對照品溶液。
[0026]4.2供試品溶液的製備:
[0027]取荔枝核提取物粉末1.0g，精密稱定，加50mL甲醇超聲提取30min，濾過，濾液回收甲醇至淨，殘渣加水10mL使溶解，轉移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10mL合併正丁醇萃取液，於水浴上蒸乾，殘渣以色譜純甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，並以色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.2μπι微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液。
[0028]4.3標準曲線製備:
[0029]精密吸取人參皂苷對照品溶液0.5、l、3、5、10、20yL進樣，測定峰面積。以不同的進樣量C的對數值和峰面積積分值A的對數值進行回歸，得標準曲線方程:A=l.7835C-1.3736，R2=0.9918。
[0030]4.4精密度研究:
[0031 ] 精密吸取4.1項下對照品溶液10 μ L，注入液相色譜儀中，測定峰面積，重複進樣6次，測得人參皂苷Rgl峰面積RSD為1.87%，表明儀器精密度良好。
[0032]4.5回收率實驗:
[0033]在已知皂苷含量的提取物溶液中定量加入對照品溶液，混勻，吸取10 μ L，按以上條件測定峰面積，根據標準曲線計算皂苷對照品的量，計算回收率，回收率為99.3%。
[0034]4.6穩定性研究:
[0035]分別在0，1，2，4，8小時精密吸取4.1項下對照品溶液10 μ L，注入液相色譜儀中，測定峰面積，峰面積RSD為2.13%，表明供試品溶液在8小時內穩定。
[0036]實施例2
[0037]1、儀器:
[0038]AgilentllOO高效液相色譜儀(Agilent公司，美國),包括脫氣機，四元梯度泵，自動進樣器，柱溫箱和HP Chemstation工作站；Allteeh ELSD2000檢測器(Allteeh公司，美國)；AE240型電子分析天平(梅特勒一託利多儀器有限公司)；Buchi旋轉蒸發儀(Buchi公司，瑞士)；KQ3200B超聲波清洗器(崑山市超聲儀器有限公司)。
[0039]2、試藥:
[0040]荔枝核提取物(按照專利CN102048885方法自制);人參皂苷Rgl對照品(中國食品藥品檢定研究院)；正丁醇(分析純)；甲醇(色譜純)。
[0041]3、色譜條件:
[0042]色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB_C18 柱，規格為:4.6mmX 250mm, 5 μ m;流動相為甲醇-水(70:30)，流速為1.0mL/min，柱溫30°C ;檢測器為蒸發光散射檢測器，檢測參數:漂移管溫度90°C，氮氣流速為2.0L/min。
[0043]4、試驗方法:
[0044]4.1對照品溶液的製備:
[0045]精密稱取人參皂苷Rgl對照品，置於容量瓶，加入甲醇溶解，定容，搖勻，製成每毫升含人參皂苷RgA 10mg的對照品溶液。
[0046]4.2供試品溶液的製備:
[0047]取荔枝核提取物粉末1.0g，精密稱定，加50mL甲醇超聲提取30min，濾過，濾液回收甲醇至淨，殘渣加水10mL使溶解，轉移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10mL合併正丁醇萃取液，於水浴上蒸乾，殘渣以色譜純甲醇溶解，轉移至10ml量瓶中，並以色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.2μπι微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液。
[0048]4.3標準曲線製備:
[0049]精密吸取人參皂苷對照品溶液0.5、l、3、5、10、20yL進樣，測定峰面積。以不同的進樣量C的對數值和峰面積積分值A的對數值進行回歸，得標準曲線方程:A=l.8152C-1.3038，R2=0.9918。
[0050]4.4樣品皂苷含量測定:
[0051]精密吸取4.2項下的供試品溶液10 μ L，進樣，測定峰面積，根據標準曲線計算樣品皂苷含量。經計算，提取物皂苷含量為0.809g/g。
【權利要求】
1.一種測定荔枝核提取物中皂苷含量的方法，其步驟如下:(1)製備對照品溶液:取人參皂苷Rgl對照品，置於容量瓶，加入甲醇溶解，定容，搖勻，製成對照品溶液；(2)製備供試品溶液:取荔枝核提取物粉末1.0g,精密稱定，加50mL甲醇超聲提取30min,濾過，濾液回收甲醇至淨，殘洛加水10mL使溶解,轉移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10mL，合併正丁醇萃取液，於水浴上蒸乾，殘渣以色譜純甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，並以色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.2 μ m微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液；(3)精密吸取人參皂苷對照品溶液0.5、1、3、5、10、20μL進樣，測定峰面積；以不同的進樣量C的對數值和峰面積積分值A的對數值進行回歸，得標準曲線方程:A=l.8152C-1.3038，R2=0.9918 ；(4)精密吸取的供試品溶液10μL，進樣，測定峰面積，根據上述標準曲線計算樣品皂苷含量。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於:所述步驟(1)中的對照品溶液每毫升含人參皂苷RgA 10mg。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述色譜條件為:色譜柱用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，規格為:4.6mm X 250mm，5 μ m ;流動相為甲醇-水(70:30 )，流速為.1.0mL/min，柱溫為30°C ;檢 測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度為90°C，氮氣流速為.2.0L/mino
【文檔編號】G01N30/06GK103698432SQ201310739692
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月26日 優先權日:2013年12月26日
【發明者】郭潔文, 鄧志軍, 屈喜玲 申請人:廣州市中醫醫院