一種治療哮喘的藥物的製作方法
2023-11-04 09:48:57
專利名稱：一種治療哮喘的藥物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用中草藥治療哮喘的藥物。
背景技術：
哮喘是一種常見病、多發病，嚴重影響到中老年人的身體健康。按照目前的國際醫學理論，哮喘的發病機制是T輔助細胞TH1、TH2失衡所致，呼吸道的應變性炎症是基礎，氣道高反應性是呼吸道炎性介質浸潤所引起。目前，用於治療哮喘的西藥有很多種，包括糖皮質激素類、β2受體激動劑、茶鹼類和部分抗過敏藥物，用西藥治療哮喘的不足是療效欠佳、需聯合用藥和副作用明顯。為此，有關的科研單位和科技工作者研究用中草藥治療哮喘的作用機理和療效，並取得了一些科研成果。如美國專利申請號為09/800,815、名稱為「草藥治療過敏和哮喘」，公開了以中藥經驗處方「加味三子湯」為基礎的技術方案，該技術方案是提取紫蘇子、葶藶子、杏仁、黃芩、苦參、當歸、白芍、葛根、桔梗、甘草、大棗、生薑和珍珠母十三味中草藥的有效成分，用現代醫學研究體系評價組方各成分解除氣道炎症、降低高反應性的作用機理，進一步研究其毒性反應。研究結果表明，該組方具有抗氣道高應答、抗氣道炎症和調節T輔助細胞(TH1、TH2)應答類型的作用，可用於過敏性哮喘的治療。但由於該組方中有十三味中草藥，中草藥的種類太多，究竟是哪幾味中草藥在其中承擔了主要作用，尚不得知，因此，藥品質量難於保證，不便於產業化生產該藥物。
發明內容
本發明的目的是提供一種便於控制產品質量和療效好的治療哮喘的藥物。
為了實現上述的目的，這種治療哮喘的藥物，包括靈芝、苦參和甘草，其配比範圍按重量份計是靈芝 8-80苦參 3-18甘草 3-12。
這種治療哮喘的藥物，三味中草藥的優選配比範圍按重量份計是靈芝 25-65苦參 4-12甘草 3-9。
這種治療哮喘的藥物，三味中草藥的最佳配比按重量份計是靈芝 40苦參 6甘草 3。
作為對這種治療哮喘的藥物的改進，還包括紫蘇葉，其配比範圍按重量份計是3-20，紫蘇葉的優選配比範圍按重量份計是5-15，紫蘇葉的最佳配比按重量份計是9。
這種治療哮喘的藥物的製備方法，依次包括以下的步驟A、將靈芝、苦參和甘草分別粉碎成碎片；B、按配比將靈芝、苦參、甘草或靈芝、苦參、甘草、紫蘇葉混合；C、按重量份計再加入全部中草藥10倍的水，浸泡30-40分鐘，文火煎煮至水量的1/2，過濾，得一次藥液，再一次按重量份計加入全部中草藥10倍的水，文火煎煮至水量的1/2，過濾，得二次藥液，將一次藥液和二次藥液混合，用零下80℃乾冰凍結，真空乾燥機抽真空凍幹，裝二號膠囊或加賦形劑壓片。
本發明的治療哮喘的藥物，患者每日口服兩次，每次兩粒。
本發明的治療哮喘的藥物，是在對美國專利申請號為09/800,815中的十三味中草藥進行分組實驗、全面掌握各成分在哮喘發病機制相關環節作用的基礎上，進行進一步篩選後完成的。其配伍中各中草藥的作用如下苦參的長療程能顯著降低氣道高反應性和肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞數量，提高γ-幹擾素(IFN-γ)和降低T輔助細胞2(TH2)反應引起的白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)，對哮喘模型的治療起關鍵性作用，並且優於糖皮質激素類，不會引起γ-幹擾素(IFN-γ)水平降低；靈芝具有良好的解除氣道痙攣、提高γ-幹擾素(IFN-γ)和降低白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)的作用；甘草調和諸味，現代醫學研究表明其成分具有類糖皮質激素樣作用；紫蘇葉具有降低氣道分泌物粘稠性的作用。
本發明的治療哮喘的藥物，具有以下的特點1、療效顯著，可以同時具有抗炎、抗過敏、調節T輔助細胞的分化與平衡，解除氣道平滑肌痙攣的作用，抗炎效果好；2、治療作用廣泛持久，口服劑型，方便安全，患者依從性好；3、組方只需三——四味中草藥，組方簡便，原料豐富，便於產業化生產和控制藥品質量；4、工藝簡單，不需要複雜的設備，成本低。
具體實施例方式
取粉碎成碎片的靈芝40g、苦參6g、甘草3g和紫蘇葉9g，加入580g水，浸泡30-40分鐘，文火煎煮至水量的1/2，過濾，得一次藥液，再一次加入580g水，文火煎煮至水量的1/2，過濾，得二次藥液，將一次藥液和二次藥液混合，用零下80℃乾冰凍結，真空乾燥機抽真空凍幹，裝二號膠囊。用本發明的藥物，通過以下的實驗，觀察其療效和安全性。
1、降低氣道高反應性，解除氣管痙攣，減少炎性細胞浸潤。
1)、實驗用物品本實驗所用的6周齡雄性小鼠購自傑克遜(Jackson)實驗室，並在西奈山(Mount Sinai)醫學院的動物中心進行標準化處理，伴清蛋白(CA)、刀豆素A(ConA)、地塞米松、二硝基苯(DNP)結合的清蛋白購自西伽馬(Sigma)公司，ELISA用抗體購自邦定希(Binding Site)公司和法明至(Phar Mingen)公司，抗二硝基苯(DNP)抗原特異性IgE、抗體IgG2a、IgG1購自艾克瑞特(Accurate Scientific)公司。
2)、用藥量根據人和動物的體表面積來計算動物的用藥量，20克小鼠折人體的1/387，6周齡雄性小鼠按30克計算，每隻小鼠每次給藥1毫升，每天兩次。
3)、抗原致敏、發敏及治療將200微克伴清蛋白(CA)和2毫克二硝基苯(DNP)結合的清蛋白溶解在0.3毫升的緩衝液PBS中，給小鼠腹膜內注射致敏，共兩次，間隔一周。在第二次致敏7天後，將小鼠麻醉，用含100微克伴清蛋白(CA)的0.05毫升緩衝液PBS氣管內用藥來發敏，在第20天和第30天時，用相同的方法和兩倍劑量繼續進行發敏。在初次發敏24小時後，將發敏的小鼠分為三組，第一組用本發明的藥物治療，用25型計量鈍不鏽鋼針胃內給藥，每次1毫升，每天兩次，連續17天；第二組用地塞米松治療，每天腹膜內注射0.5毫升/公斤的地塞米松；第三組是鹽水對照組，每天腹膜內給予鹽水處理；空白對照組為第四組，不進行任何處理。
4)、遲發相氣道反應的測定最後一次發敏後的第三天，將上述三組的小鼠靜脈內注射乙醯膽鹼後，連同第四組測定氣道壓力變化來反映氣道應答情況；具體步驟是將小鼠用戊巴比妥麻醉並用18號氣管插管保持呼吸道暢通，用RSP1002型壓力可控呼吸系統保持每分鐘120次呼吸，潮氣量恆定在0.2毫升，每隻小鼠靜脈內注射十烴溴銨25毫克/公斤來誘導肌肉鬆弛，在氣管插管上連接壓力轉導器來測定氣道壓力，當氣道壓力穩定2分鐘後，每隻小鼠靜脈內注射乙醯膽鹼50微克/公斤，用VENTP軟體系統觀察並記錄4分鐘的氣道壓力變化，參照氣道壓力——時間指數(APTI)(每秒釐米水柱)計算氣道壓力峰值的時間——組合變化，用來反映氣道應答反應。測定的具體數值見下表
5)、細胞分類計數上述的氣道應答測量結束後，殺死小鼠並用1.0毫升不含鈣鎂的冰浴預冷後的亨氏液(HBSS)灌洗肺臟，灌洗液收集到預冷的試管中，1000克4℃離心10分鐘，細胞總數用血細胞計數器測定，用Diff-Quik系統染色後每張細胞片顯微鏡下計數500個細胞的方法，進行細胞的分類計數，具體數值見下表
6)、組織學檢查屍檢後的小鼠主要臟器用中性福馬林液固定，臟器5微米石蠟切片用蘇木素伊紅和過碘酸——席夫試劑染色後顯微鏡檢查。
7)、結果分析鹽水對照組在經過致敏、發敏後氣道壓力——時間指數(APTI)水平顯著高於空白對照組，表明誘導產生了氣道高反應性，用本發明的藥物治療組和地塞米松治療組的氣道壓力——時間指數(APTI)水平顯著低於鹽水對照組，與空白對照組相同，用本發明的藥物治療組與地塞米松治療組之間沒有顯著差異性，可以完全消除氣道高反應性。為確定在消除氣道高反應性後是否伴有炎症減輕，測定了氣管灌洗液中的細胞總數和嗜酸性粒細胞的百分比，用本發明的藥物治療組和地塞米松治療組的細胞總數顯著少於鹽水對照組，鹽水對照組中含有42.5％的嗜酸性粒細胞，而用本發明的藥物治療組和地塞米松治療組的嗜酸性粒細胞均明顯減少，說明用本發明的藥物能夠治療肺部炎症。組織學檢查表明，鹽水對照組小鼠的肺臟中，在氣管周圍和血管周圍存在大量的嗜酸性粒細胞，也存在很多杯狀細胞和粘液栓，用本發明的藥物治療組和地塞米松治療組的小鼠肺臟中炎症細胞顯著少於鹽水對照組，沒有氣管粘液栓。
2、調節T輔助細胞免疫平衡，提高可以抑制哮喘發作的γ-幹擾素(IFN-γ)和抗體，降低可以誘發哮喘的抗原特異性IgE、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)，從而起到治療哮喘的作用。
1)、實驗用物品同1的1)。
2)、用藥量同1的2)。
3)、抗原致敏、發敏及治療同1的3)。
4)、血清伴清蛋白(CA)特異性抗體的測定在對各小組的小鼠進行氣道壓力——時間指數(APTI)測定結束後，立即取血清並在零下80℃的條件下保存待用；伴清蛋白(CA)特異性IgE的測定用ELISA方法；為了測定伴清蛋白(CA)特異性IgG2a和IgG1，用伴清蛋白(CA)包被酶標板後進行封閉和洗滌，樣品按濃度1∶50稀釋後加入酶標板中，在溫度為4℃的條件下孵浴過夜，洗板後加入生物素化的大鼠抗小鼠IgG2a和IgG1的單抗，室溫孵浴45分鐘後，加入按濃度1∶1000稀釋的親和素過氧化物酶(Sigma)，室溫放置15分鐘，洗板後，加入2，2』-azine-bis，再室溫放置30分鐘，酶標儀405微米處讀數；小鼠伴清蛋白(CA)抗原特異性IgE、IgG2a、IgG1的濃度計算，將二硝基苯(DNP)-清蛋白和伴清蛋白(CA)以相同的濃度包被酶標板，在溫度為4℃的條件下過夜，洗板後密封，小鼠抗二硝基苯(DNP)IgE、IgG2a、IgG1抗體，依次按濃度1∶2稀釋10次，分別加入10個孔中，起始濃度為1000微克/毫升，其它步驟同上。本實驗測定的小鼠伴清蛋白(CA)抗原特異性IgE、IgG2a的具體數值見下表
5)、細胞培養和細胞因子定量取每小組小鼠的脾細胞，懸於完全培養液中，完全培養液選用RPMI1640，在該完全培養液中加入10％FBS、1％的青黴素、1％的鏈黴素、1％的穀氨醯胺，還加入2微克/毫升的刀豆素A(ConA)作為陽性對照並設陰性對照，完全培養液中含有50微克/毫升的伴清蛋白(CA)；培養72小時後收集上清；上清中的白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)和γ-幹擾素(IFN-γ)的水平測定，用ELISA方法，具體數值見下表
3、本發明的藥物在規定的劑量範圍內是安全的在本發明的藥物各味中草藥的配伍範圍內，小鼠半數致死量LD50是104.4克/公斤/每天——211.5克/公斤/每天。
權利要求
1.一種治療哮喘的藥物，其特徵是包括靈芝、苦參和甘草，其配比範圍按重量份計是靈芝8——80苦參3——18甘草3——12。
2.根據權利要求1所述的治療哮喘的藥物，其特徵是三味中草藥的配比範圍按重量份計是靈芝25——65苦參4——12甘草3——9。
3.根據權利要求1所述的治療哮喘的藥物，其特徵是三味中草藥的配比按重量份計是靈芝40苦參6甘草3。
4.根據權利要求1所述的治療哮喘的藥物，其特徵是還包括紫蘇葉，其配比範圍按重量份計是3——20。
5.根據權利要求4所述的治療哮喘的藥物，其特徵是紫蘇葉的配比範圍按重量份計是5——15。
6.根據權利要求4所述的治療哮喘的藥物，其特徵是紫蘇葉的配比按重量份計是9。
全文摘要
本發明涉及一種治療哮喘的藥物，包括靈芝、苦參和甘草，其配比範圍按重量份計是靈芝8－80、苦參3－18、甘草3－12，粉碎成碎片後按配比取料混合，加水浸泡，文火煎煮，過濾得藥液，用零下80℃乾冰凍結，真空乾燥機抽真空凍幹，裝二號膠囊或加賦形劑壓片。這種治療哮喘的藥物，具有療效顯著、治療作用廣泛持久、組方簡便、便於產業化生產和控制產品質量、工藝簡單的特點。
文檔編號A61P11/00GK1539473SQ200310105388
公開日2004年10月27日 申請日期2003年10月30日 優先權日2003年10月30日
發明者溫明春, 秀敏·李, 休·A·森普森, ど 丈, 李 申請人:溫明春