一種提高轉基因鯉受精卵孵化率的方法
2023-11-01 05:02:57 2
專利名稱：一種提高轉基因鯉受精卵孵化率的方法
所屬領域本發明屬於鯉魚轉基因育種技術領域，涉及轉基因鯉製備中的外源基因導入技術，由其是利用顯微注射技術構建轉基因鯉方法。
背景技術：
轉基因魚研究已有近二十年的歷史。將外源基因導入魚類受精卵主要採用顯微注射技術，此外還利用精子攜帶、電脈衝導入等方法構建轉基因魚。由於用後兩種方法製備轉基因魚外源基因整合率較低，在實際工作中很少採用。而原始製備轉基因魚的顯微注射方法是先將魚受精卵的卵膜用人工撥膜或胰酶消化的方法脫膜，然後再進行顯微注射。由於整個受精卵沒有卵膜的保護給孵化管理帶來很大的不便，更嚴重的是卵黃等營養物質暴露在水體中，極易遭受細菌等侵害，加之顯微注射對受精卵造成的機械損傷，導致孵化率極低。另外採用顯微注射技術製備轉基因魚外源基因在基因組中的整合是隨機的。要獲得有外源基因整合的轉基因魚，就必需有足夠數量的轉基因魚供篩選。因此，大量製備轉基因魚是轉基因魚育種研究成敗的關建。
發明內容
為了提高轉基因鯉受精卵的孵化率，擴大轉基因鯉的數量，本發明在原有技術基礎上進行了改進，這一技術改進不僅解決了轉基因鯉受精卵孵化率低的問題，而且還簡化了顯微操作程序，同時轉基因鯉數量得到了大幅度提高。
本發明解決其技術問題所採用的技術方案是用拉針儀將顯微注射用玻璃針的直徑拉至10微米，對未經物理或化學方法脫膜處理的受精卵進行外源基因直接導入。由於未脫膜的受精卵有很大的內壓，用直徑小於10微米的玻璃針刺壓卵膜可以避免擠破卵子，卵膜上小於10微米的小孔靠卵子的自身修復能力將很快得到修復。同時未脫膜的受精卵有卵膜的包被減少了水體中細菌的感染機會。而玻璃針的直徑小於10微米，針內的外源核酸及受精卵的卵黃極易睹塞針尖降低外源基因導入的效率。因此，用10微米直徑的顯微注射用玻璃針對未脫膜的受精卵直接進行外源基因導入，可減少細菌對受精卵的危害、提高受精卵的孵化率，達到了獲得足夠數量的轉基因鯉用於外源基因整合、表達篩選的目的。
本發明的有益效果是，在簡化製備轉基因鯉的操作程序的同時，減少了細菌對導入外源基因受精卵的危害程度及玻璃針對受精卵的機械損傷，提高了導入外源基因受精卵的孵化率，為後序大量的轉基因鯉的製備提供了必要的技術保障。
權利要求
1.一種提高轉基因鯉受精卵孵化率的方法，在對鯉魚受精卵進行外源基因導入技術中，受精卵、顯微注射用玻璃針，其特徵是受精卵不脫膜，顯微注射用玻璃針直徑為10微米。
2.根據權力要求1所述的一種提高轉基因鯉受精卵孵化率的方法，其特徵是鯉受精卵不經物理或化學方法進行脫膜，用拉針儀將玻璃管拉製成直徑為10微米的注射用玻璃針。
全文摘要
一項能夠提高轉基因鯉受精卵孵化率的製備轉基因鯉技術。其特徵在於是以鯉魚的受精卵為實驗材料，利用直徑為10微米的顯微注射用玻璃針直接對未用物理或化學方法進行脫膜處理的鯉受精卵進行外源基因導入製備轉基因鯉。用此改進技術製備轉基因鯉，簡化了製備轉基因鯉的操作程序，減少了細菌對導入外源基因受精卵的危害程度及玻璃針對受精卵的機械損傷，提高了導入外源基因受精卵的孵化率。應用此發明，可提大大高轉基因鯉的製備效率。
文檔編號A01K67/033GK1593117SQ0313260
公開日2005年3月16日 申請日期2003年9月8日 優先權日2003年9月8日
發明者梁利群, 孫效文, 閻學春, 沈俊寶 申請人:中國水產科學研究院黑龍江水產研究所