螢光光譜校正方法和螢光光譜測量裝置的製作方法
2023-11-10 09:12:22
專利名稱：螢光光譜校正方法和螢光光譜測量裝置的製作方法
技術領域：
本發明涉及螢光光譜校正方法和螢光光譜測量裝置。具體而言，本發明涉及用於針對每個染料(pigment，色素)而對從標記有多個螢光染料的微粒獲得的螢光光譜進行分離的技術。
背景技術：
一般而言，當分析諸如細胞、微生物和脂質體的微粒時，使用流式細胞術(流式細胞儀)(例如，參加2006年8月31日Shujunsha有限公司出版的第二版Hiromitsu Nakauchi 編輯的"Cell Engineering Additional Volume Experiment Protocol Series Flow Cytometry Freely」)。流式細胞術是一種利用特定波長的雷射(激發光)照射在流路中在一行中流動的微粒，並且檢測由微粒發出的螢光或散射光，從而對多個微粒進行逐個分析的方法。在流式細胞術中，將光學檢測器檢測到的光轉換為電信號值，進而執行統計分析從而確定單個微粒的類型、大小、結構等。
近來，在基礎醫療科學和臨床領域，為了促進綜合分析，存在著很多同時使用多個分子探針的情況。因此，快速積累生物知識，並且增進了對生命現象的理解。因此，即使在流式細胞術中，使用多個螢光染料的多色分析也已廣泛使用(例如，參加日本未審查專利申請公開第2006-230333號和PCT日文翻譯專利公開第2008-500558號)。
同時，當在一個測量中按照與多色分析相同的方式使用多個螢光染料時，與螢光染料數量相對應的高靈敏度檢測器是必需的。來自檢測器的非預期螢光染料的光混入，因此分析質量控制降低。在相關技術的流式細胞儀中，由於僅從預期螢光像素獲取期望的光學信息，因此當將光學檢測器檢測到的光轉換為具有一定值的電信號時，執行數學校正，即螢光校正。
然而，在相當多的螢光校正中，由於是通過觀察者的肉眼區分檢測器所檢測到的非預期光，因而可能發生人為誤差，並因此可能不正確。因此，觀察者必須熟知該裝置且必須經培訓來使用該裝置，同時具有細胞、螢光染料、抗體等知識。因此，觀察者必須具有高度專業化的知識。
在相關技術中，提出了光譜去卷積方法，將已使用過的螢光標記的光發射光譜提前註冊在計算機中、使用數據將測量目標的光發射光譜分離為螢光標記的光發射光譜，並且確定螢光標記的存在率(參見日本未審查專利申請公開第2005-181276號)。在相關技術中，在諸如紅外光譜方法的光譜吸收光測量中，基於標準光譜或參考光譜，執行對測量到的光譜的校正或分析(例如，參見日本未審查專利申請公開第2005-195586號以及第 2009-162667 號)。發明內容
然而，在相關技術的設置有多個高靈敏度檢測器的微粒分析裝置中，由期望檢測器以外的檢測器所檢測的雜散螢光是一個大問題，並且必須準備對應於期望的螢光染料數量的高靈敏度檢測器。具體地，在光譜接近於螢光染料的實例中，由於雜散螢光因此不能執行螢光校正。
因此，即使在布置了多個高靈敏度檢測器時，對於相關技術的微粒分析裝置同時可檢測到的螢光染料的數量也有限制。例如，類似於不具有多個高靈敏度檢測器的光譜型流式細胞儀，可在雜散螢光存在的情況下使用的下一代流式細胞儀是必需的。
如上所述，每個螢光染料具有特定的光譜，並且表示螢光染料本身特性的光譜信息成為重要數據。然而，為了準確估計在每個光譜之間的重疊，並且以高精確度執行螢光校正，單染色樣本的數據是必需的。
為此，工作者必須準備用於每個螢光染料的單染色樣本，並且隨著所使用的染料數量的增加，工作量也增加。相應地，工作者的負擔增加，工作效率降低。螢光校正操作的數量基本上與所用的螢光染料數量的平方成比例，進而這對於觀察者來說很麻煩。作為實際問題，諸如可收集血液的測試目標對象的量是有限的，因此存在著以下情況，難以為每個螢光染料製作單染色樣本。
在本發明中，期望提供一種螢光光譜校正方法和螢光光譜測量裝置，其即使在沒有準備用於每個螢光染料的單染色樣本時，也能夠以高精確度消除每個光譜之間的重疊。
根據本發明的實施方式，提供了一種螢光光譜校正方法，包括將從標記有多個螢光染料的微粒獲取的螢光光譜與參考光譜進行比較，從而將螢光光譜分離為針對每個染料的螢光光譜，其中將先前測得的光譜數據用作參考光譜。
在該校正方法中，可以將與單染色樣本的誤差等於或小於8%的光譜數據用作參考光譜。
在該校正方法中，將測量日期、檢測器的電位、耦合抗體的類型以及當微粒是細胞時的細胞類型中的任一項不同的螢光光譜數據用作參考光譜。
在該校正方法中，當微粒是細胞時，可以將使用細胞測得的螢光光譜數據用作參考光譜。
根據本發明的另一實施方式，提供了一種螢光光譜測量裝置，包括檢測單元，在任意波長區域中同時檢測從微粒發射出的螢光光線；分析單元，將檢測單元檢測到的數據分離為針對每個染料的螢光光譜；以及存儲單元，存儲由分析單元分離出的螢光光譜數據， 其中分析單元將存儲在存儲單元中的先前測得的螢光光譜數據用作參考光譜，從而執行對螢光光譜的分離。
在該裝置中，檢測單元可以設置有多通道光電倍增管。
根據本發明的實施方式，由於使用了先前測得的螢光光譜數據，因此單染色樣本不是必需的，能夠以高精確度消除每個光譜之間的重疊，此外單染色樣本也不是必需的。
圖1是示出了根據本發明第一實施方式的螢光光譜測量裝置的構造的框圖。
圖2A是示出了測量日期和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號，垂直軸是螢光強度，圖2B是示出了在每個波長(FITC:CD14)中的誤差的曲線圖。
圖3A是示出了測量日期和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號，垂直軸是螢光強度，圖3B是示出了在每個波長(PE :CD3)中的誤差的曲線圖。
圖4A是示出了測量日期和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號，垂直軸是螢光強度，圖4B是示出了在每個波長(對應於BD 7色設置微球的FITC 的光譜)中的誤差的曲線圖。
圖5A是示出了測量日期和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號，垂直軸是螢光強度，圖5B是說明在每個波長(對應於BD 7色設置微球的PE的光譜)中的誤差的曲線圖。
圖6A是示出了檢測器的電位和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖6B是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。
圖7A是示出了耦合抗體和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖7B是示出了在每個波長(FITC ⑶45對FITC ⑶45RA)中的誤差的曲線圖。
圖8A是示出了耦合抗體和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖8B是示出了在每個波長(PE ⑶8對PE:⑶3) 中的誤差的曲線圖。
圖9是用於管理精確度的血液細胞的密度點圖，其中水平軸是螢光染料FITC、抗體CD45的數據，垂直軸是螢光染料PE、抗體CD8的數據。
圖10是分析結果，其中水平軸是螢光染料FITC、抗體CD45RA的數據，垂直軸是螢光染料PE、抗體CD3的數據。
圖IlA是示出了微粒的類型和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖1IB是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。
圖12A是示出了微粒的類型和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖12B是示出了在每個波長中的誤差的曲線圖。
圖13是分析結果，其中水平軸是包含BD 7色設置微球的螢光染料FITC的聚苯乙烯微球的數據，垂直軸是包含BD 7色設置微球的聚苯乙烯微球的數據。
具體實施方式
在下文中，將參照附圖詳細描述本發明的實施方式。本發明並不受限於下述實施方式。按以下順序進行描述。
1.第一實施方式
未使用單染色樣本的螢光光譜校正方法的實施例
2.第二實施方式
未使用單染色樣本的螢光光譜測量裝置的實施例
1.第一實施方式
校正方法
首先，將描述根據本發明第一實施方式的螢光光譜校正方法(以下，簡稱為校正方法)。在該實施方式的校正方法中，當對從標記有多個螢光染料的微粒獲取的螢光光譜進行針對每個染料的分離時，將先前測得的螢光光譜用作參考光譜。
此處，「微粒」寬泛地包括諸如細胞、微生物和脂質體的仿生微粒，或者諸如乳膠顆粒、凝膠顆粒和工業顆粒的合成顆粒。仿生微粒包括構成各種細胞、脂質體、線粒體、細胞器(細胞器官)等的染色體。細胞包括植物細胞、動物細胞、血球細胞等。微生物包括諸如大腸桿菌的桿菌、諸如菸草花葉病毒的病毒、諸如酵母菌的細菌等。仿生微粒可以包括 諸如己烷、蛋白質及其複合物的聚合物。
工業顆粒可以(例如)由有機聚合物材料、無機材料或金屬材料形成。可以將聚苯乙烯，苯乙烯二乙烯苯，聚甲基丙烯酸甲酯等用作有機聚合物材料。可以將玻璃、矽、磁性材料等用作無機材料。例如，可以將金膠體、鋁等用作金屬材料。微粒的形狀一般是球形的， 但也可以是非球形的，並且大小、質量(mass)等也不受特別地限制。
在該實施方式的校正方法中，在用作參考光譜的光譜數據中，與測量目標微粒的單染色樣本光譜的誤差優選地小於或等於8%，更優選地為小於或等於3%。因此，與測量數據的匹配誤差較小，進而能夠以高精確度執行螢光校正。
具體而言，在每個染料的參考光譜中，可以使用例如，測量日期、檢測器的電位、雷射器的輸出、微粒的通量、耦合抗體的類型、或當微粒是細胞時不同類型細胞的數據(螢光光譜)。由於這些條件對螢光光譜沒有大的影響，因此即使在參考光譜中使用這種光譜數據來執行校正時，也能夠以高精確度消除重疊。
然而，當微粒是細胞時，例如即使當微粒標記有相同的螢光染料時，也不將從使用了微球的測量所獲取的結果用作參考光譜，微粒不是細胞的情況也是一樣。如上所述，即使細胞的類型之間存在差異，也可以將它們用作參考光譜。當然，即使微球的類型之間存在差異，也可以將它們用作參考光譜。
在該實施方式的校正方法中，由於將與先前測得的測量目標微粒的單染色樣本的誤差小於或等於8%的光譜數據用作參考光譜，因此無需在測量階段準備單染色光譜。因此，減輕了工作者的負擔，進而也提高了工作效率。即使在測試目標對象的量較小時，諸如老鼠的小型動物，也可以在不降低精確度的情況下執行分析。
在本實施方式的螢光光譜校正方法是具有以下處理的方法時，即利用參考光譜將從標記有多個螢光染料的微粒獲取的螢光光譜針對每個染料進行分離的處理，則不論在該方法前後的處理，均可以適用該方法。
2.第二實施方式
裝置的總體構造
接下來，將根據本發明第二實施方式來描述螢光光譜測量裝置。圖1是示出了該實施方式的螢光光譜測量裝置構造的框圖。如圖1所示，該實施方式的螢光光譜測量裝置 1至少包括檢測單元2、存儲單元3、以及分析單元4，並且執行第一實施方式的校正方法。 圖1所示的螢光光譜測量裝置1可進一步包括液體傳送單元。
檢測單元2的配置
檢測單元2可以具有以下配置，可以在任意波長區域中同時檢測從分析目標微粒發出的螢光。具體而言，布置能夠針對每個波長區域檢測波長區的多個獨立傳感器，或者可以設置能夠同時檢測多個光線的一個或多個檢測器，諸如多通道光電倍增管(PMT)。檢測器 2檢測到的波長區域的數量，即，在檢測器2中設置的通道或傳感器的數量優選地等於或大於所使用染料的數量。CN 102539397 A
該實施方式的螢光光譜測量裝置1可以具有以下配置，即其中檢測器2設置有分光鏡，從微粒發出的螢光光線被分光鏡色散，然後進入諸如多通道PMT的檢測器。根據需要，檢測單元2可以設置有物鏡、聚光透鏡、小孔、帶截止濾光器、分色鏡等。
分析單元3的構造
在分析單元3中，將檢測單元2檢測到的每個波長區域的光進行量化，從而使用電子計算器等獲得總螢光數量(強度)。根據需要來使用參考光譜執行螢光光譜校正。將結果(螢光光譜數據)存儲在存儲單元4中。
存儲單元4的構造
存儲單元4存儲由分析單元3處理的螢光光譜數據。例如，可以將單染色樣本的螢光光譜數據以及先前測得的螢光光譜數據存儲在存儲單元4中。
螢光光譜測量裝置1的操作
接下來，將要描述該實施方式的螢光光譜測量裝置1的操作。由該實施方式的螢光光譜測量裝置1分析的微粒並不受特別限制，而是可以為例如細胞或微球。修飾微粒的螢光染料的類型或數量並不受特別限制，而是可以根據需要適當地選擇並使用現有的染料，諸如FITC (異硫氰化物螢光素=C21H11NO5S)、PE (藻紅蛋白)、PerCP (多甲藻黃素葉綠素蛋白質)和PE-Cy5以及PE-Cy7。可以用多個螢光染料修飾微粒。
當使用該實施方式的螢光光譜測量裝置1對微粒進行光學分析時，首先，從光源輸出激發光並且用激發光照射在流路中流動的微粒。然後，用檢測單元2檢測從微粒輸出的螢光。具體而言，使用分色鏡、帶通濾光器等，在從微粒輸出的光線中僅分離特定波長的光(預期螢光)，並且使用諸如32通道PMT的檢測器檢測光。在該實例中，使用例如分光鏡來色散螢光，並且在檢測器的每個通道中檢測不同波長的光。因此，可以獲取檢測光(螢光)的光譜信息。
此後，在檢測單元2中獲取的數個檢測器的信息在例如轉換單元(未示出)中被轉換為數位訊號，並且進一步在分析單元3中被量化。此時，將存儲在存儲單元4中的先前測得的螢光光譜數據用作參考光譜來執行螢光校正。具體而言，在每個染料的參考光譜中， 使用與微粒的單染色樣本的光譜的誤差小於或等於8%的螢光光譜數據，例如，測量日期、 檢測器的電位、耦合抗體的類型、或者當微粒是細胞時不同類型的細胞。將經校正後的螢光光譜數據存儲在存儲單元4中。
在本發明的螢光光譜測量裝置中，由於將與測量目標微粒的單染色樣本的光譜的誤差小於或等於8%的光譜數據用作參考光譜，因此即使在不使用單染色樣本時，也能以高精確度執行校正。作為參考光譜的螢光光譜數據在存儲單元4中順序積累，因此可以構造適合於真實使用情況的資料庫。
特別地，在將細胞用作樣本時，存在難以避免檢測器的電位和雷射輸出變化的情況。在這種情況下，在相關技術的裝置中，需要再次執行校正以取得螢光校正的一致性。然而，在該實施方式的螢光光譜裝置中，無需如此。
實施例
在下文中，將參照本發明的實施例詳細描述本發明的優點。在該實施例中，測量日期、檢測器的電位、耦合抗體的類型、以及微粒的類型是變化的，比較螢光光譜，並且研究其差異。
在該實施例中，將市售的、作為精確管理細胞的Immuno-TROL(Beckman Coulter有限公司生產)或者Multi-Check(Becton Dickinson有限公司生產)用作樣本。它們是用於流式細胞術(全血液控制檢查目標對象)的陽性處理控制，並且表示散射光、細胞群的分布、螢光強度、以及抗原密度，原因在於特定表面抗原的陽性率和絕對數是在單細胞中校準的。市售產品(由Beckman Coulter有限公司或者Becton Dickinson有限公司生產)用作標記有螢光染料的抗體。
根據滴定法執行對樣本的染色。具體而言，將樣本的溫度保持為室溫，然後將標記有預期螢光染料的抗體滴入專用塑料管，將50 μ L的血液滴入其中以平穩地滲透，進而抗體和細胞進行反應。將其在室溫中置於暗處達20分鐘。然後，將Iml的溶血劑(Beckman Coulter有限公司的FACS Lyse溶液氯化銨溶液)滴入其中。相應地，紅血球溶解，粒細胞、單核細胞、以及淋巴細胞保持。使其離心分離並且用合適的溶液洗滌，因而獲得高純度的樣本溶液。
在測量中，將用上述方法調整的細胞溶液(樣本溶液)引入由塑料組成的、用於細胞分析的特殊測量單元中，通過用於流式細胞儀的鞘溶液執行三維聚焦，然後用激發光對其進行照射。將波長為488nm和640nm的雷射束用作激發源。利用稜鏡分光鏡等對從每個細胞發出的螢光進行色散，然後用32通道PMT進行檢測。在該實施例中，將32通道PMT用作檢測器，將兩個雷射束用作為激發光。相應地，64個通道的光譜數據作為信息量傳送至分析單元和存儲單元。
每日的差異
圖2A、圖3A、圖4A和圖5A是曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖2B、圖;3B、圖4B和圖5B是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。 圖2A和圖2B所示的螢光光譜是將FITC用作螢光染料並且將CD14用作抗體測得的數據， 圖3A和圖;3B所示的螢光光譜是將PE用作螢光染料並且將CD3用作抗體測得的數據。在任何日期上使用相同的時隙。
圖4A和圖4B是包含BD 7色設置微球的螢光染料FITC的聚苯乙烯微球的螢光光譜。圖5A和圖5B是包含BD 7色設置微球的螢光染料PE的聚苯乙烯微球的螢光光譜。將 PMT用作所有的檢測器，施加電壓為630V。
如圖2A至圖5B所示，在通過調整到其他日期測得的細胞樣本或者微球的光譜A 中，與光譜B的誤差小於或等於8%，進而確認具有不同測量日期的光譜可用作參考光譜。
檢測器的電位
圖6A是示出了檢測器的電位和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖6B是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。圖6A和圖6B所示的螢光光譜是將PE用作螢光染料、將CD3用作抗體、並且將PMT用作檢測器所測得的數據。在施加電壓中，PMTV150是525V，PMTV160是560V、PMTV170是595V、 PMTV180 是 630V、PMTV190 是 665V、PMTV200 是 700V。
如圖6A和圖6B所示，即使在檢測器的電位變化時，光譜的誤差也小於或等於3%。 因此，確認具有不同檢測電位的螢光光譜數據可用作參考光譜。
耦合抗體的類型
圖7A和圖8A是示出了耦合抗體和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是檢測器的通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖7B和圖8B是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。圖7A和圖7B所示的螢光光譜是使用A:FITC用作螢光染料並且將CD45用作抗體，以及使用B 將FITC用作螢光染料並且將CD45RA用作抗體，所測得的數據。圖8A和圖8B所示的螢光光譜是使用A =PE用作螢光染料並且將CD8用作抗體，以及使用B 將FE 用作螢光染料並且將CD3用作抗體，所測得的數據。將PMT用作檢測器，且所有施加電壓都是 525V。
使用從其他單染色集獲取的參考光譜分析當將FITC用作螢光染料並且將CD45用作抗體時的數據，以及當將PE用作螢光染料並且將CD8用作抗體時的數據。圖9是示出了其結果的密度點圖。如圖9所示，使用單染色產生的參考光譜執行分析，並且可以將其分為三個細胞群。每個群指示在正交位置上令人滿意地執行了螢光校正。在遍及設門的區域中存在的數量是FITC+PE+:278和PICT+PE-:750，其比率為0. 37 1。
然後，對於當FITC用作螢光染料並且⑶45RA用作抗體時的數據、以及當PE用作螢光染料並且CD3用作抗體時的數據執行相同的分析。圖10是示出了其結果的密度點圖。如圖10所示，在基於FITC和PE作為螢光染料的2維展開圖中，清楚地劃分了三個細胞群，並且每一細胞群位於正交位置上。比較遍及設門的分布，數量是FITV+PE+ 280和 PITC+PE-:750，並且其比率是0.37 1，且等於圖9所示數據的存在比例。
根據上述結果，在使用參考光譜的獨立螢光校正方法中，如圖7A至圖8B所示，即使在不同類型的耦合抗體中，螢光光譜的差異也小於或等於8%，並且確認該光譜可用作參考光譜。
微粒的類型
圖IlA和圖12A是示出了微粒類型和螢光光譜之間關係的曲線圖，其中水平軸是通道號(波長依賴號)，垂直軸是螢光強度，圖IlB和圖12B是示出了每個波長中的誤差的曲線圖。圖IlA和圖IlB是A 當FITC用作染料並且⑶45用作抗體時的螢光光譜，以及B: 當使用包含BD 7色設置微球的螢光染料FITC的聚苯乙烯微球時的螢光光譜。圖12A和圖 12B是A 當PE作用染料並且⑶8用作抗體時的螢光光譜，以及B 當使用包含BD 7色設置微球的螢光染料PE的聚苯乙烯微球時的螢光光譜。所有的施加電壓都為630V。
使用從其他單染色集獲取的參考光譜分析當使用包含BD 7色設置微球的螢光染料FITC的聚苯乙烯微球時的數據，以及當使用包含BD 7色設置微球的螢光染料PE的聚苯乙烯微球時的數據。圖13是示出了其結果的密度點圖。如圖13所示，將細胞群分類為三個，並且每個群位於正交位置。比較遍及設門的分布，數量是FITV+PE+ 272和PITC+PE- 213，其比率是1. 1，並且不等於圖9和圖10所示數據的存在比率。
通過上述結果，在使用參考光譜的獨立螢光校正方法中，如圖13所示，即使細胞和微球使用相同的染料，螢光光譜的差異也大於10%，並且確認該光譜不可用作參考光譜。
如上所述，根據本發明，確認即使在沒有為每個探針準備單染色樣本時，也可以用高精確度消除每個光譜的重疊。
本發明包含與2010年11月11日在日本專利局提交的日本優先權專利申請JP 2010-252863中公開的相關主題，以引用的方式將其全部內容結合於此。
本領域的技術人員應當理解，根據設計要求和其他因素可以做出多種修改、組合、 子組合和更改，只要它們處於所附權利要求及其等價物的範圍內。
權利要求
1.一種螢光光譜校正方法，包括將從標記有多個螢光染料的微粒獲得的螢光光譜與參考光譜進行比較，從而將所述螢光光譜分離為針對每個染料的螢光光譜，其中，先前測得的光譜數據被用作所述參考光譜。
2.根據權利要求1所述的螢光光譜校正方法，其中，在所述參考光譜中，與單染色樣本的誤差小於或等於8%。
3.根據權利要求2所述的螢光光譜校正方法，其中，測量日期、檢測器的電位、耦合抗體的類型、以及當所述微粒是細胞時的細胞類型中的任一項不同的螢光光譜數據被用作所述參考光譜。
4.根據權利要求3所述的螢光光譜校正方法，其中，當所述微粒是細胞時，使用細胞測得的所述螢光光譜數據被用作所述參考光譜。
5.一種螢光光譜測量裝置，包括檢測單元，在任意波長區域中同時檢測從微粒發射出的螢光；分析單元，將所述檢測單元檢測到的數據分離為針對每個染料的螢光光譜；以及存儲單元，存儲由所述分析單元分離的螢光光譜數據，其中，所述分析單元將存儲在所述存儲單元中的先前測得的所述螢光光譜數據用作參考光譜，從而執行對所述螢光光譜的分離。
6.根據權利要求5所述的螢光光譜測量裝置，其中，所述檢測單元設置有多通道光電倍增管。
全文摘要
本發明公開了一種螢光光譜校正方法和螢光光譜測量裝置。一種螢光光譜校正方法，包括對從標記有多個螢光染料的微粒獲取的螢光光譜與參考光譜進行比較，從而將螢光光譜分離為針對每個染料的螢光光譜，並且將先前測得的光譜數據用作為參考光譜。
文檔編號G01N21/64GK102539397SQ20111035312
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月9日 優先權日2010年11月11日
發明者二村孝治, 加藤泰信, 角田正也, 酒井啟嗣 申請人:索尼公司