包括野生人參或人參的人參屬的包含大量稀有人參皂苷的提取物、源自人參屬的形成層的植物幹細胞或製備其提取物的方法與流程

2023-05-01 04:53:26 4

本發明涉及在製備包括野生人參或人參的人參屬的提取物、源自人參屬形成層分生細胞或其提取物中增加稀有人參皂苷的含量的方法、通過所述方法製備的人參提取物、通過所述方法製備的源自人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物和用於預防或治療糖尿病、改善血液循環或改善肝臟功能的組合物，所述組合物包含通過所述方法製備的源自人參屬的人參提取物或形成層分生細胞(cmc)或其提取物作為活性成分。
背景技術：
：人參是屬於人參屬的植物且其根部用於醫藥目的。人參的醫藥作用可歸因於作為存在於人參中的活性成分的人參皂苷。根據人參皂苷苷元的結構可將人參皂苷分為三類即原人參二醇型人參皂苷、原人參三醇型人參皂苷和齊墩果烷型人參皂苷。人參皂苷衍生物是以下化合物，其中糖例如葡萄糖、鼠李糖、木糖或阿拉伯糖與作為三萜苷元的原人參二醇或原人參三醇中的醇性oh基團即r1、r2和r3形成酯結合。人參中目前已知的主要人參皂苷包括約13種常見人參皂苷和由其轉化的約11種稀有人參皂苷。人參可按多種形式使用，包括新鮮人參、通過乾燥新鮮人參製備的白參和通過蒸製新鮮人參製備的紅參。本領域已知新鮮人參主要包含人參皂苷例如rg1、re、rb1、rb2、rc、rd等且經加工的人參可包含增加量的在新鮮人參中很少存在的稀有人參皂苷例如rg3、rh1、rh2和化合物k。最近已積極進行了多項研究以進一步增加僅在經加工的人參產品中存在的人參皂苷的含量。紅參即一種代表性的經加工的人參產品可通過蒸製新鮮人參製備且在製備過程中化學不穩定的與人參皂苷苷元的c-20位結合的苷可發生水解。通過該方法加工的紅參中人參皂苷例如rh1、rh2、rg2、rg3等的量比新鮮人參或白參大。然而，已知人參皂苷rh2即一種稀有人參皂苷甚至在紅參中都以非常小的量存在。由於報導了此類經加工的人參產品的藥理活性成分在預防癌症、抑制癌症、降低血壓、保護腦神經元、抗血栓形成、抗氧化活性等方面的作用好於包含常見人參皂苷的人參，因此已嘗試了多種方法以獲得在經加工的人參中可能存在的稀有人參皂苷。最熟知的方法包括通過使用微生物或通過用酸和酶水解人參皂苷增加特定人參皂苷的含量的方法。本發明的發明人在該背景下發現源自人參屬形成層分生細胞中所需特定人參皂苷的含量可通過以下方法增加，所述方法包括培養源自人參屬形成層分生細胞並熱處理所培養的源自人參屬形成層分生細胞，由此完成本發明。
背景技術：
部分所公開的信息僅用於加強對本發明背景的理解且因此可不包含本領域技術人員已知的構成現有技術的信息。技術實現要素：技術問題本發明的目的是提供用於在製備有效的人參屬提取物、源自人參屬形成層分生細胞或其提取物中增加特定人參皂苷例如在未經處理的人參屬提取物或源自人參屬形成層分生細胞或其提取物中很少存在的稀有人參皂苷或用於將在未經處理的人參屬提取物或源自人參屬形成層分生細胞或其提取物中存在的常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的方法。技術方案為了實現上述目的，本發明提供用於在製備人參屬形成層分生細胞(以下稱為cmc)或其提取物中增加人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量的方法：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和原人參二醇(以下稱為ppd)，所述方法包括在85℃-160℃的溫度對所培養的人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物進行熱處理。本發明還提供用於在製備人參提取物中增加人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量的方法：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd，所述方法包括在85℃-160℃的溫度對人參提取物進行熱處理。本發明還提供通過所述方法製備的源自人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物，其中人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量與熱處理前相比是增加的：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。本發明還提供用於預防或治療糖尿病的組合物，其包含源自人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物或人參提取物作為活性成分。本發明還提供用於預防或治療糖尿病的方法，所述方法包括向受試者給藥上述源自人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。本發明還提供用於改善血液循環的組合物，其包含源自人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物或人參提取物作為活性成分。本發明還提供用於改善血液循環的方法，所述方法包括向受試者給藥上述源自人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。本發明還提供用於改善肝臟功能的組合物，其包含源自人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物或人參提取物作為活性成分。本發明還提供用於改善肝臟功能的方法，所述方法包括向受試者給藥上述源自人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。附圖說明圖1顯示了在熱處理前進行靜置培養的情況下對通過hplc檢測的稀有人參皂苷進行分析的結果。a：在85℃提取24小時；b：在85℃提取48小時；c：在85℃提取72小時。圖2顯示了在熱處理前不進行靜置培養的情況下對通過hplc檢測的稀有人參皂苷進行分析的結果(a：在85℃提取24小時；b：在85℃提取48小時；c：在85℃提取72小時)。圖3顯示了對通過hplc檢測的稀有人參皂苷作為熱處理前靜置培養時間的函數進行分析的結果。圖4顯示了在進行或不進行攪拌的情況下對通過hplc檢測的稀有人參皂苷進行分析的結果。圖5顯示了在熱處理前對以下樣品中的常見人參皂苷進行分析的結果，所述樣品包括野生人參cmc、人參、紅參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根(a：野生人參cmc；b：人參；c：紅參；d：林下栽培的人參；e：所培養的野生人參不定根)。圖6顯示了在熱風乾燥和熱處理後對以下樣品中所檢測的稀有人參皂苷進行分析的結果，所述樣品包含野生人參cmc、人參、紅參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根(a：野生人參cmc；b：人參；c：紅參；d：林下栽培的人參；e：所培養的野生人參不定根)。圖7顯示了進行口服葡萄糖耐量測試(ogtt)以確認根據本發明的實施例製備的野生人參cmc的抗糖尿病作用的結果。圖8顯示了對根據本發明的實施例製備的野生人參cmc進行抗血小板測定的結果。圖9顯示了對根據本發明的實施例製備的野生人參cmc的肝炎相關肝臟功能改善作用進行評估的結果(alt：丙氨酸氨基轉移酶；ast：天冬氨酸轉氨酶：galn：d-半乳糖胺)。具體實施方式除非另有說明，本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域普通技術人員所通常理解相同的含義。通常，本文使用的命名法和下述實驗方法是本領域熟知和通常使用的。在一個方面，本發明涉及用於在製備人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物中增加人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量的方法：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd，所述方法包括在85℃-160℃的溫度對所培養的人參屬形成層分生細胞(cmc)或其提取物進行熱處理。本發明還涉及用於在製備人參提取物中增加人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量的方法：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd，所述方法包括在85℃-160℃的溫度對人參提取物進行熱處理。根據本發明可通過對所培養的人參屬形成層分生細胞或其提取物進行熱處理的方法而非通過常規方法即蒸製或用酸、酶或微生物處理來顯著增加稀有人參皂苷特別是rh2的含量。本文使用的術語「源自人參屬形成層分生細胞」是指分離自人參屬的形成層組織的先天未分化的細胞，其特徵在於其為同質細胞，尚未分化成胼胝體且具有分生連續性。本發明的發明人首次分離了源自人參屬形成層分生細胞，其為來自植物形成層的先天未分化的細胞，這與去分化的胼胝體是不同的。用於分離人參屬形成層分生細胞的方法詳細描述在韓國專利號1064518中，其可通過引用的方式併入本文中。在本發明中使用的形成層分生細胞可為例如白參、野生人參或林下栽培的人參的形成層分生細胞，儘管形成層分生細胞所源自的人參的類型不受到具體的限制，只要細胞是以下人參屬形成層分生細胞，所述細胞為先天未分化的同質細胞，尚未分化成胼胝體且具有分生連續性。可在本發明中使用的人參屬的來源不受到具體的限制。例如，在本發明中使用的人參屬可為韓國、美國、日本、喜馬拉雅、越南或中國的人參。可在本發明中使用的人參屬形成層分生細胞的實例包括但不限於完整的分生細胞或其粉末、濃縮物或提取物。在本發明的一個實施方案中，粉末或提取物(常見人參皂苷提取物)可主要用於將其人參皂苷轉化成稀有人參皂苷，但是本領域一般市售的任何形式也可在實施本發明中使用。分生細胞提取物或人參提取物可通過本領域一般使用的任何方法製備。例如，提取物可如下製備：將1重量份分生細胞或乾燥的人參與10-500重量份蒸餾水混合，然後在50℃-100℃的溫度提取。本發明由此發現在使用紅參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根的情況下，即使當使用本發明的方法時，也不能預期稀有人參皂苷例如rh2的含量可增加至所需程度，但是人參屬形成層分生細胞中稀有人參皂苷例如rh2的含量可通過簡單的操作即對所培養的人參屬形成層分生細胞進行熱處理來顯著增加。人參皂苷例如rg3、rk1、rg5、rh2、rk2、rh3或ppd是以非常小的量包含在沒有根據本發明處理的未經加工的人參中或不存在或幾乎不存在於未經加工的人參中的稀有人參皂苷。然而，根據本發明的方法通過熱處理操作將主要包含在未經加工的人參提取物、人參屬形成層分生細胞或其提取物中的人參皂苷例如rg1、re、rb1、rb2、rc、rd、絞股藍皂苷xvii或f2(以下稱為常見人參皂苷)轉化成稀有人參皂苷。因此，稀有人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的稀有人參皂苷的含量與未經加工的(未經熱處理的)人參提取物相比是增加的：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。在一些情況下根據本發明，人參屬形成層分生細胞或其提取物中的rh2、rg3、rg5和ppd或rh2、rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd(稱為「稀有人參皂苷」)中的全部可為增加的。另外，人參提取物中rh2、rg3、rg5和ppd的含量與未經特別處理的未經加工的(未經熱處理的)人參提取物相比是增加的。稀有人參皂苷的含量的增加可指通過本發明的方法將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷。具體地，其可意為rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷按人參皂苷的總重量計以80-100wt％或90-98wt％的量包含在根據本發明的方法製備的人參提取物、人參屬形成層分生細胞或其提取物中：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。若稀有人參皂苷例如rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷以80-100wt％的量被包含：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd，則常見人參皂苷例如rg1、re、rb1、rb2、rc、rd、絞股藍皂苷xvii或f2的含量可為20-0wt％。若稀有人參皂苷按人參皂苷的總重量計以100wt％的量被包含，則其可指處理前包含在人參提取物、人參屬形成層分生細胞或其提取物中的常見人參皂苷完全轉化成稀有人參皂苷。在本文中，稀有人參皂苷為rh2和一種或多種選自以下的稀有人參皂苷：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。在本文中，rh2可按rg3、rk1、rg5、rh2、rk2、rh3和ppd的總重量計以10-35wt％或11-33wt％的量被包含。已發現即使當使用本發明的方法時，rh2在人參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根中的含量也僅為稀有人參皂苷在根據本發明製備的人參提取物、人參屬形成層分生細胞或其提取物中的含量的3-8％。人參屬形成層分生細胞可根據韓國專利號1064518公開的方法分離。所分離的分生細胞可通過用於增殖的培養步驟(增殖培養)或用於生產的培養步驟(生產培養)培養。用於增殖培養的培養基可為包含3％蔗糖的ms培養基(murashigeandskoog’s,1962)。可將人參屬形成層分生細胞接種在培養基中且然後在適於培養的空氣流量條件下培養約13天。用於生產培養的培養基可為包含3％紅糖的經改良的ms培養基。可將人參屬形成層分生細胞在增殖培養後接種在培養基中且然後用引發劑處理並在適於培養的空氣流量條件下培養約11天。引發劑的實例包括選自以下的任何物質：茉莉酸甲酯、真菌提取物、細菌提取物、酵母提取物、殼聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水楊酸、花生四烯酸、sts、甲羥戊酸、n-苯甲醯基甘氨酸、aba、snp、ipp、bht、ccc、乙烯利、馬尿酸、硝酸鈰銨、agno3、硫酸氧釩、對氨基苯甲酸、油菜素類固醇、藻酸鈉和乙酸鈉。優選地，茉莉酸甲酯可用作引發劑。在該情況下，用作引發劑的茉莉酸甲酯可按50-200μm的量使用。在通過增殖培養和生產培養過程培養的人參屬形成層分生細胞中，常見人參皂苷例如rg1、re、rb1、rb2、rc、rd、絞股藍皂苷xvii或f2可存在，而稀有人參皂苷例如rg3、rk1、rg5、rh2、rk2、rh3或ppd可檢測不到。本發明的方法包括在85℃-160℃的溫度對所培養的人參屬形成層分生細胞或其提取物進行熱處理的步驟。通過該步驟可製備人參屬形成層分生細胞或其提取物，其包含增加量的稀有人參皂苷作為將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的結果。在一個實施方案中，根據本發明的方法還可包括在熱處理步驟前將所培養的人參屬形成層分生細胞分散在蒸餾水中的步驟。在一些情況下，可在分散在蒸餾水中前還進行冷凍乾燥。通過冷凍乾燥可便利地控制並儲存細胞且可除去存在於水中的細胞和微生物等中的一部分水，微生物通過細胞中的水發生的增殖可受到抑制。用於分散人參屬形成層分生細胞的蒸餾水可按1-200重量份或30-200重量份每重量份乾燥的人參屬形成層分生細胞的量使用。當使用分生細胞而不進行乾燥時，蒸餾水可按2-15重量份或2.5-10重量份每重量份未乾燥的形成層分生細胞的量使用。當蒸餾水的量與人參屬形成層分生細胞的量的比例在上述範圍內增加時，稀有人參皂苷的含量可增加同時常見人參皂苷的含量減少。本發明的方法還可包括在分散步驟後對分散在蒸餾水中的人參屬形成層分生細胞進行靜置培養而不震搖的步驟。靜置培養可如下進行：使與蒸餾水混合的人參屬形成層分生細胞在靜置狀態中在例如1-35℃或10-24℃的溫度保持1-15天或2-10天。已發現通過包括該步驟的方法製備的人參屬形成層分生細胞包含很少或不包含常見人參皂苷且包含顯著增加量的稀有人參皂苷。具體地，已發現當靜置時間在上述範圍內增加時，稀有人參皂苷中rh2的含量大幅增加。在另一個實施方案中，根據本發明的方法還可包括在熱處理步驟前對所培養的人參屬形成層分生細胞進行熱風乾燥的步驟。已發現通過包括該步驟的方法製備的人參屬形成層分生細胞包含很少或不包含常見人參皂苷且包含顯著增加量的稀有人參皂苷。具體地，已發現稀有人參皂苷中rh2的含量大幅增加。熱風乾燥可在熱風乾燥機中在例如45-75℃或50-70℃的溫度進行。熱風乾燥在該情況下可持續例如24-72小時或30-60小時。已發現通過在上述範圍內進行熱風乾燥製備的人參屬形成層分生細胞包含顯著增加量的稀有人參皂苷。具體地，已發現稀有人參皂苷中rh2的含量大幅增加。根據本發明的方法包括在靜置培養或熱風乾燥後對人參屬形成層分生細胞進行熱處理。熱處理可指使用蒸餾水在85-160℃的溫度進行熱水提取。由於這些細胞在靜置培養前處於分散在蒸餾水中的狀態，因此可在靜置培養後立即在85-160℃的溫度對人參屬形成層分生細胞進行熱處理。另外，還可在熱風乾燥後將人參屬形成層分生細胞分散在蒸餾水中並進行熱處理。在本文中，蒸餾水可按1-200重量份每重量份乾燥的人參屬形成層分生細胞或30-200重量份每重量份人參屬形成層分生細胞的量使用。熱處理可如下進行：在85-160℃或85-115℃或95-115℃的溫度對形成層分生細胞進行加熱。根據本發明已確定適於將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的溫度範圍且已發現稀有人參皂苷的含量在上述溫度範圍內是增加的。當熱處理溫度在上述範圍內增加時，稀有人參皂苷的含量可增加同時常見人參皂苷的含量減少或常見人參皂苷可完全轉化成稀有人參皂苷。熱處理可進行例如10分鐘至72小時或24小時至72小時或48小時至72小時。本發明已確定了適於將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的熱處理時間範圍。具體地，在經上述時間範圍熱處理的人參屬形成層分生細胞中檢測到稀有人參皂苷。當熱處理時間在上述時間範圍內增加時，稀有人參皂苷的含量可增加同時常見人參皂苷的含量減少或常見人參皂苷可完全轉化成稀有人參皂苷。熱處理可在大氣壓下進行，但是壓力也可隨溫度增加而增加。當使用在上述溫度範圍內的熱時，熱處理可例如在正常壓力(範圍為0.57-6.1atm)下進行。本發明的方法還可包括在熱處理期間進行攪拌。在本文中，攪拌可按例如10-200rpm或30-180rpm進行。當在該條件下進行攪拌時，稀有人參皂苷的含量與不進行攪拌的情況相比可進一步增加。另外，當進行攪拌時，稀有人參皂苷的含量可增加或常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷所需要的時間可減少。在另一個方面，本發明涉及人參屬形成層分生細胞或其提取物，其通過上述方法製備且特徵在於稀有人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量與熱處理前相比是增加的：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。另外，本發明涉及通過上述方法製備且具有增加的人參皂苷rh2和一種或多種選自以下的人參皂苷的含量的人參提取物：rg3、rk1、rg5、rk2、rh3和ppd。與稀有人參皂苷或其含量相關的上述構型同樣可應用於與人參屬形成層分生細胞、其提取物和人參提取物相關的發明。在另一個方面，本發明涉及用於預防或治療糖尿病的組合物，其包含作為活性成分的上述分生細胞或其提取物或人參提取物。本發明還涉及用於預防或治療糖尿病的方法，所述方法包括向受試者給藥上述人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。已發現根據本發明的包含增加量的稀有人參皂苷的人參屬形成層分生細胞、其提取物或人參提取物顯示出顯著的葡萄糖耐量，這表明其顯示出抗糖尿病作用。另外，本發明涉及用於改善血液循環的組合物，其包含作為活性成分的上述分生細胞或其提取物或人參提取物。另外，本發明涉及用於改善血液循環的方法，所述方法包括向受試者給藥上述人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。已發現根據本發明的包含增加量的稀有人參皂苷的人參屬形成層分生細胞、其提取物或人參提取物顯示出有效抑制血小板聚集的能力，這表明其在改善血液循環方面具有顯著的作用。上述血液循環可不但通過包括血細胞比容、粘度、由血液誘導的剪切應力等在內的物理因素來控制，而且可通過血液甘油三酯組成、血細胞(血小板)等的變化來控制。穩態在正常條件下良好維持，但是當血液循環調節功能被疾病狀態例如糖尿病、藥物、吸菸等擾亂時，血漿、血小板、紅細胞等將過度聚集且將發生異常凝血，由此幹擾血流。另外，已知當活化的血小板聚集受到促進時，血流穩態將被破壞且因此血流紊亂將引起動脈硬化、中風、心血管疾病、缺血性心臟病和腦血管疾病的發病。根據本發明用於改善血液循環的組合物可抑制血栓形成以有助於改善血液循環且因此預防細胞和各個器官的老化並促進細胞的生長和再生。具體地，其可改善血流以由此預防或治療血液循環障礙例如動脈硬化、腦出血、中風和/或腦梗塞和/或外周血流紊亂、冷肢、由頭皮血液循環紊亂引起的脫髮症狀。另外，本發明涉及用於改善肝臟功能的組合物，其包含作為活性成分的上述人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物。另外，本發明涉及用於改善肝臟功能的方法，所述方法包括向受試者給藥上述人參屬形成層分生細胞或其提取物或人參提取物或包含其的組合物。在本發明中，改善肝臟功能可包括例如預防或治療脂肪肝疾病。脂肪肝疾病可為酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪肝疾病、營養性脂肪肝疾病、飢餓性脂肪肝疾病、由肥胖引起的脂肪肝疾病、糖尿病性脂肪肝疾病或脂肪性肝炎。另外，對肝臟功能的改善可包括預防或治療肝病例如肝硬化、酒精性肝硬化、脂肪肝、中毒性肝病和急性或慢性肝炎。已發現根據本發明的具有增加含量的稀有人參皂苷的人參屬形成層分生細胞、其提取物或人參提取物在改善肝炎和緩解非酒精性脂肪肝方面顯示出顯著的作用。本發明的組合物可按包含單獨的人參屬形成層分生細胞、其提取物或人參提取物或其與至少一種藥用載體、賦形劑或稀釋劑的組合的藥物組合物形式提供。另外，藥物組合物可取決於疾病種類及其嚴重性、患者年齡、體重、健康狀況和性別、給藥途徑和治療時段以藥物有效量給藥。本發明的組合物基於此類因素的確定取決於本領域技術人員的水平。通常，組合物可按0.0001mg/kg至2,000g/kg的每日劑量給藥。本文使用的術語「藥用」是指當給藥至人類時是生理上可接受的且不引起胃部不適、變態反應例如胃腸不適或眩暈或類似反應的組分。所述載體、賦形劑或稀釋劑的實例可包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚醇、麥芽醇、澱粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、硬脂酸鎂和礦物油。本發明的藥物組合物還可包含填料、抗聚集劑、潤滑劑、潤溼劑、香料、乳化劑和防腐劑。另外，本發明的藥物組合物可使用本領域熟知的方法配製，從而使其在給藥至哺乳動物後可提供活性成分的快速、持續或延遲釋放。可將本發明的藥物組合物配製成粉末劑、顆粒劑、片劑、乳劑、糖漿劑、氣霧劑、軟或硬明膠膠囊劑、無菌注射溶液劑、無菌粉末劑等形式。根據本發明的人參屬形成層分生細胞可按例如功能性食品形式提供。本文使用的術語「功能性食品」是指所標稱的功能是由於包含人參屬形成層分生細胞作為活性成分而顯示出疾病預防或治療作用的食品。功能性食品可呈例如粉末、顆粒、片劑、膠囊或飲料形式。另外，功能性食品還可包含作為可接受的食品添加劑的各種營養物、維生素、礦物質(電解質)、矯味劑例如合成矯味劑和天然矯味劑、著色劑和改進劑、果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠體增稠劑、ph控制劑、穩定劑、防腐劑、甘油、醇或碳酸化劑。實施例以下將參照實施例進一步詳細描述本發明。對於本領域技術人員顯而易見的是，這些實施例僅用於說明性目的，而不應該被理解為是對本發明範圍的限制。實施例1：包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的人參提取物1.包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的人參提取物的製備添加人參(panaxginsengc.a.meyer)根提取物粉末(xianlvsenbiotechnologyco.,ltd.)並以30:1的比例溶解在蒸餾水中(0.033％濃度)且然後在120℃在正常壓力下熱處理48小時。冷卻提取物並僅收集所形成的析出物。冷凍乾燥所收集的析出物。2.hplc分析在以下條件下使用agilenthplc1260dad系統和zorbaxeclipseplusc18(4.6×100mm,3.5μm)柱(agilent)以對稀有人參皂苷進行分析：dad檢測器的檢測波長：uv203nm；柱溫度：30℃；流動相：包含0.05％三氟乙酸的水和乙腈；和流速：1ml/min。在對常見人參皂苷和稀有人參皂苷進行的分析中調整流動相的比例。在分析中使用的人參皂苷標準品購自chromadex(usa)、sigma-aldrich(usa)和amboinstitute(korea)。由於稀有人參皂苷rk2和rh3的標準品不存在，因此沒有對rk2和rh3進行定量分析且僅通過lc/ms鑑定了rk2和rh3。在分析中使用的溶劑為乙腈(merck,germany)、甲醇(j.tbaker,usa)或三氟乙酸(daejung,korea)。使用變化的甲醇/水比例由每個樣品提取人參皂苷並通過0.2μm過濾器過濾提取物且然後進行分析。對向稀有人參皂苷的轉化進行分析且分析結果顯示在下表1中。表1：人參提取物中轉化的稀有人參皂苷*每個數值表示1g人參提取物粉末中人參皂苷的含量(mg)。實施例2：包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的野生人參形成層分生細胞(cmc)粉末的製備1.野生人參cmc的培養由人參(野生人參,gangwon-do,korea)形成層分離野生人參cmc。對野生人參cmc的培養逐漸由250ml燒瓶放大至3l生物反應器、20l生物反應器和250l生物反應器。在一般植物細胞培養中，2,4-二氯苯氧基乙酸或萘乙酸用作細胞生長調節劑以誘導細胞分裂。然而，在所建立的增殖培養條件下在不存在生長調節劑的情況下培養野生人參cmc。就用於保持野生人參cmc的鮮重的增殖培養條件而言，使用包含3％蔗糖的ms培養基(murashigeandskoog’s,1962)並將ms培養基的ph調節至5.8並培養13天。增殖培養結束後，用100μm茉莉酸甲酯處理11天後，在包含3％紅糖的經改良的ms培養基中進行生產培養。在相同的培養室中進行增殖培養和生產培養且將培養室在黑暗條件下維持在21±1℃的溫度。2.包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的cmc的製備通過增殖培養和生產培養獲得生物質和常見人參皂苷(rb1、rb2、rc和rd)後，將細胞在培養室中在空氣關閉條件下靜置培養5天。在提取器中對細胞進行熱處理以獲得包括rg3、rk1、rg5、rh2、ppd等在內的稀有人參皂苷。通過熱處理操作將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷(rg3、rk1、rg5、rh2、rk2、rh3和ppd)後，收集生物質且然後乾燥(冷凍乾燥或熱風乾燥)。3.hplc分析以與實施例1所述相同的方式對野生人參cmc中的稀有人參皂苷進行分析。實驗實施例1：根據在提取中使用的各種水比例對向稀有人參皂苷轉化的比例進行比較在實施例2-1後的實施例2-2期間，將1重量份乾燥的野生人參cmc和20-200重量份蒸餾水的混合物在提取器中在85℃熱處理24小時以確定適於將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的cmc/蒸餾水比例。表285℃/24h對照1:301:501:1001:1501:200rb115.614.420.280.250.000.00rc4.951.400.720.150.000.00rb22.521.280.580.120.000.00rd1.854.573.111.050.510.29絞股藍皂苷xvii0.146.133.951.000.430.25f200.860.890.850.810.72rg3026.1930.8333.9534.1031.19rk107.147.557.637.417.00rg5013.9115.5015.7915.3214.44rh2015.9219.1822.9823.9122.57總和25.181.882.683.882.576.5*每個數值表示1g乾燥的野生人參cmc中人參皂苷的含量(mg)。由上表2可知在熱處理溫度為85℃且熱處理時間為24小時的條件下，野生人參cmc中大部分常見人參皂苷的含量隨蒸餾水比例增加而減少。實驗實施例2：根據熱處理溫度對向稀有人參皂苷轉化的比例進行比較在實施例2-1後的實施例2-2期間，將1重量份乾燥的野生人參cmc和100重量份蒸餾水的混合物在提取器中在範圍為85℃-115℃的溫度熱處理24小時以確定適於將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的溫度。表3*每個數值表示1g乾燥的野生人參cmc中人參皂苷的含量(mg)。由上表3可知在cmc/水比例為1:100且熱處理時間為24小時的條件下，野生人參cmc中大部分常見人參皂苷的含量隨熱處理溫度增加而減少。實驗實施例3：根據熱處理時間對向稀有人參皂苷轉化的比例進行比較在實施例2-1後的實施例2-2期間，將1重量份乾燥的野生人參cmc和100重量份蒸餾水的混合物在提取器中在85℃熱處理24-72小時以確定適於將常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷的時間。表41:100/85℃對照24h48h72hrb115.610.250.000.00rc4.950.150.000.00rb22.520.120.000.00rd1.851.050.000.00絞股藍皂苷xvii0.141.000.000.00f200.850.000.00rg3033.9537.7938.65rk107.638.839.15rg5015.7917.7918.11rh2022.9828.6332.00總和25.183.893.097.9*每個數值表示1g乾燥的野生人參cmc中人參皂苷的含量(mg)。由上表4可知在cmc/水比例為1:100且熱處理溫度為85℃的條件下，野生人參cmc中的大部分常見人參皂苷隨熱處理時間增加而幾乎不存在。實驗實施例4：根據是否進行靜置培養對稀有人參皂苷的生產率進行比較以與實施例2-2所述相同的方式製備額外的野生人參cmc，不同的是在熱處理前不進行靜置培養。在熱處理前靜置培養5天所獲得的結果與不進行靜置培養所獲得的結果的比較顯示在圖1和2中。由圖1和2可知當進行靜置培養時，稀有人參皂苷中rh2和ppd的含量是增加的(參見圖1)，這與不進行靜置培養的情況(參見圖2)是不同的。實驗實施例5：根據靜置時間對稀有人參皂苷的生產率進行比較以與實施例2-2所述相同的方式製備野生人參cmc(在95℃熱處理48小時)且各種靜置時間所獲得的稀有人參皂苷的含量顯示在圖3和下表5中。由圖3和表5可知稀有人參皂苷中rh2的含量隨靜置時間增加而增加。表5實驗實施例6：根據是否進行攪拌對稀有人參皂苷的生產率進行比較在實施例2中，將1重量份(按鮮重計)野生人參cmc和2.5-10重量份蒸餾水(50-200重量份蒸餾水每乾燥重量份cmc)的混合物以30-180rpm攪拌同時將其在95℃熱處理48小時並檢查稀有人參皂苷的含量是否由於攪拌操作而變化。由圖4和下表6可知當進行攪拌時，稀有人參皂苷例如rg3、rh2、rg5和ppd的含量高於不進行攪拌的情況。表6實施例3：進行熱風乾燥和熱處理以與實施例2-1所述相同的方式製備野生人參cmc。將所製備的cmc在hk-06h(koreatechnologyeng,co.,ltd.)中在60℃熱風乾燥48hr且然後粉末化(120目篩)，然後將1重量份粉末添加至100重量份蒸餾水中並在95℃熱水提取48小時。另外，在與上述相同的條件下還對人參、紅參、林下栽培的人參和所培養的野生人參不定根進行了熱處理。結果顯示在圖5和6及下表7和8。表7表8由圖5和上表7可知熱風乾燥的野生人參cmc中常見人參皂苷例如絞股藍皂苷xvii和f2的含量高於其它人參產品和進行熱處理的情況，野生人參cmc中rh2的含量顯著高於其它人參產品。另外，除紅參外，人參、林下栽培的人參和所培養的野生人參不定根以未乾燥(新鮮)狀態購買且在與上述相同的條件下熱風乾燥，但是可觀察不到可對稀有人參皂苷rh2的產生有影響的常見人參皂苷例如絞股藍皂苷xvii和f2的含量的增加且可觀察到即使進行熱處理，其中稀有人參皂苷rh2的含量也是非常低的。這似乎是因為如絞股藍皂苷xvii和f2那樣的其中一個葡萄糖分子與c-3碳位置連接的結構就獲得rh2而言是有利的。具體地，在絞股藍皂苷xvii和f2中，兩個葡萄糖分子與c-20碳位置連接且一個葡萄糖分子與c-3碳位置連接。明顯的是，當與c-20碳位置連接的兩個葡萄糖分子易於通過熱而除去且僅一個葡萄糖分子保持與c-3碳位置連接時獲得rh2。因此，獲得上述結果。另外，如圖6和表8所示，根據本發明的熱處理方法可將大部分常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷。將未乾燥(新鮮)的野生人參cmc在細胞水平加熱，而對於冷凍乾燥和熱風乾燥的野生人參cmc來說以粉末狀態進行加熱且因此具有高的傳熱效率且在轉化成稀有人參皂苷方面具有優勢。例如，紅參如下製備：在保持新鮮人參的特徵形式的情況下蒸製新鮮人參。由此可知紅參中最稀有的人參皂苷的含量是低的且常見人參皂苷的含量是高的。然而，當對新鮮人參進行粉末化且使用根據本發明的熱處理方法時，可觀察到大部分常見人參皂苷轉化成稀有人參皂苷且稀有人參皂苷rg3的含量也是高的。如上所述，與常見的紅參、新鮮人參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根不同的是，通過本發明的方法獲得的野生人參cmc具有含量顯著增加的包括rh2在內的稀有人參皂苷。由於在野生人參cmc或乾燥後經研磨或粉末化的產品的具有數百納米至數十微米的粒度的細胞水平進行熱處理，因此傳熱效率是高的。這導致與苷元ppd的c-20碳位置連接的糖分子易於除去。已作出各種嘗試以增加稀有人參皂苷的含量。然而，當使用紅參、新鮮人參、林下栽培的人參或所培養的野生人參不定根時，其在組織水平經歷各種處理(用熱、酶、酸、鹼等進行處理)。因此明顯的是，由c-20位置除去糖的效率是非常低的且稀有人參皂苷的含量的增加是非常低的。實施例4：包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的野生人參cmc提取物1.包含由常見人參皂苷轉化的稀有人參皂苷的野生人參cmc提取物的製備將1乾燥重量份乾燥的野生人參cmc和50-200重量份蒸餾水的混合物在75℃提取18小時。將提取物與野生人參cmc分離並通過0.2μm過濾器過濾，由此製備野生人參cmc提取物。將所製備的野生人參cmc提取物在高壓釜(msr-3l-150/250-md-s6-sys,phos-entech,co.,ltd.)中在140℃、150℃或160℃在正常壓力下熱處理60分鐘。冷卻野生人參cmc提取物並收集所形成的析出物並冷凍乾燥。2.hplc分析以與實施例1所述相同的方式對野生人參cmc提取物中的稀有人參皂苷進行分析。對向稀有人參皂苷的轉化進行分析且分析結果顯示在下表9中。表9：野生人參cmc提取物中轉化的稀有人參皂苷的含量實驗實施例7：野生人參cmc的抗糖尿病作用通過口服葡萄糖耐量測試(ogtt)對實施例2製備的野生人參cmc的抗糖尿病作用進行檢驗。將野生人參cmc在95℃熱處理48小時且口服給藥通過用70％乙醇提取cmc獲得的提取物。c57bl/6j小鼠(8周齡,雄性)禁食過夜。對c57bl/6j小鼠的體重和血糖水平進行測量且然後向小鼠口服給藥2g/kgd-葡萄糖。小鼠在此時用飲用水飼喂，但是不進食。以2小時間隔歷時2小時測量血糖水平的變化。測量結果顯示在圖7和下表10中。當口服給藥d-葡萄糖時，與正常組不同的是，糖尿病組顯示出很小的葡萄糖耐量或沒有顯示出葡萄糖耐量。對野生人參cmc提取物與在抗糖尿病領域中已知作為健康補劑的抗性麥芽糖糊精(rmd)和紅參提取物(rg-200)進行比較。結果表明野生人參cmc(野生人參cmc-200)顯示出與已知作為健康補劑的樣品相當的葡萄糖耐量(抗糖尿病作用)。表10：血糖水平(mg/dl)時間正常dmrmdrg-200野生人參cmc-20001183541692392143038660048548648960255567350372368120152547282279315dm：未經治療的糖尿病組；rmd：用抗性麥芽糖糊精(2g/kg)治療的糖尿病組；rg-200：用紅參提取物(200mg/kg)治療的糖尿病組；野生人參cmc-200：用野生人參cmc提取物(200mg/kg)治療的糖尿病組。實驗實施例8：野生人參cmc在改善血液循環方面的作用對實施例2製備的野生人參cmc進行抗血小板測定。在95℃熱處理48小時的野生人參cmc用70％乙醇提取並口服給藥野生人參cmc提取物。製備3.2％枸櫞酸三鈉並以1:9(v/v)的比例與由腹主動脈獲得的血液混合。將混合物在輥式混合器中放置10分鐘且然後以1000rpm在室溫離心10分鐘且然後收集上清液(血小板富集血漿；prp)。使用ppp對prp的血小板數目進行計數並以250-400×103個血小板/ml的濃度稀釋prp並將稀釋液在輥式混合器中放置5分鐘。在聚集計(chrono-log,usa)中將prp或添加有樣品的prp預加熱至37℃且然後將誘導血小板聚集的激動劑(adp、膠原等)滴入到prp中。然後使用ppp作為對照測量濁度的變化以確定聚集率(％)(100：最高聚集；0：最低聚集)。可將抑制百分比表示為以下方程式。抑制(％)＝(對單獨prp的抑制(％)-對prp/樣品混合物的抑制(％))/對單獨prp的抑制(％)×100結果顯示在圖8和表11中。使用在血液循環改善領域中已知作為健康補劑的銀杏葉提取物(gb-40)和紅參提取物(rg-50)作為對照。與對照進行比較的結果表明與已知作為健康補劑的樣品相比，野生人參cmc提取物(野生人參cmc-20和野生人參cmc-50)具有優異的血液循環作用。表11：對血小板聚集的抑制百分比gb-40rg-50野生人參cmc-20野生人參cmc-50抑制％18.520.128.537.8gb-40：銀杏葉提取物(40mg/kg)治療組；rg-50：紅參提取物(50mg/kg)治療組；野生人參cmc-20：野生人參cmc提取物(20mg/kg)治療組；野生人參cmc-50：野生人參cmc提取物(50mg/kg)治療組。實驗實施例9：野生人參cmc在改善肝臟功能方面的作用1.對抗由galn誘導的肝炎的肝臟功能改善作用將冷凍乾燥的野生人參cmc溶解在無菌鹽水中並經由探條口服給藥。7周齡雄性sprague-dawley大鼠禁食18小時並向大鼠腹膜內給藥galn(700mg/kgpbs)。24小時後，由大鼠提取血液和肝臟組織並測量血清alt和ast活性。在給藥galn前歷時14天在相同的指定時間將測試樣品每天一次口服給藥至大鼠。在給藥galn當天在給藥前2小時和在給藥galn後6小時口服給藥測試樣品。圖9表明用75、150和300mg/kg野生人參cmc治療2周的由galn誘導的模型中血清alt和ast的水平與用陽性對照水飛薊素治療的組相比是被顯著抑制的。2.在改善非酒精性脂肪肝方面的作用將野生人參cmc混懸在蒸餾水中且然後經由探條口服給藥10周。歷時10周向57bl/6小鼠(22-26g)給予高脂肪膳食以誘導脂肪肝。每個動物組隨意獲得固體飼料即高脂肪膳食飼料(researchdiets,inc.,newbrunswick,nj,usa)和水。由表12可知野生人參cmc的給藥大幅降低了體重、血清和肝甘油三酯水平及血清alt活性。表12：野生人參cmc對用高脂肪膳食飼餵的小鼠的體重、甘油三酯水平和血清alt活性的作用8-10隻小鼠/組。alt：丙氨酸氨基轉移酶；hfd：高脂肪膳食；nfd：正常脂肪膳食；tc：總膽固醇；tg：甘油三酯；hfd75：hfd+野生人參cmc75mg/kg；hfd150：hfd+野生人參cmc150mg/kg；hfd300：hfd+野生人參cmc300mg/kg；hfdsily：hfd+水飛薊素100mg/kg。儘管已參照具體特徵對本發明進行了詳細描述，但是對於本領域技術人員顯而易見的是，本說明書僅針對優選的實施方案且不限制本發明的範圍。因此，本發明的實質範圍將通過所附權利要求書及其等同形式來限定。工業實用性如上所述，根據本發明的方法可通過簡單的操作有效地製備以下人參屬形成層分生細胞、其提取物或人參提取物，其包含增加量的選自以下的一種或多種稀有人參皂苷：高藥理活性的rg3、rk1、rg5、rh2、rk2、rh3和ppd。當前第1頁12