磷酸鋅疫苗佐劑的製作方法

2023-05-09 11:43:01 3

專利名稱：磷酸鋅疫苗佐劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種疫苗佐劑，尤其涉及一種磷酸鋅疫苗佐劑，以及該磷酸鋅疫苗佐 劑在製備疫苗中的應用，屬於免疫學領域。
背景技術：
鋅是人體中不可缺少的元素。鋅有著重要的生理功能鋅是人體中100多種酶的 組成部分；鋅是DNA聚合酶的必需組成部分；鋅參加唾液蛋白構成；鋅參加維生素A還原酶 和視黃醇結合蛋白的合成；鋅能夠促進性器官正常發育，以保持正常的性功能；鋅能夠保 護皮膚健康，維護免疫功能；鋅有助於清除體內膽固醇，防治動脈粥樣硬化；鋅有助於抑制 癌症的發生等。人體的生長發育離不開鋅，體內鋅水平的高低會對神經、生殖和免疫系統產 生影響。鋅是所有生物體必需的微量元素。鋅製劑已廣泛應用於感染性疾病、自身免疫病 等多種疾病的輔助治療當中。疫苗佐劑是當今疫苗研究開發的熱點，理想的疫苗佐劑需要具備安全、有效、靶向 和經濟的特點。現有的鋁佐劑是使用時間最長且應用最為廣泛的被批准用於人體的疫苗 佐劑，它主要依靠儲存庫效應和免疫刺激效應兩種機制來顯著提高機體的免疫應答。但作 為佐劑，它在安全性和靶向性方面仍存在缺陷，原因是近年來經許多科學家研究發現，老 年性痴呆症與鋁有密切關係，同時還發現，鋁對人體的腦、心、肝、腎功能和免疫功能都有損 害。因此，世界衛生組織於1989年正式將鋁確定為食品汙染物而加以控制，並規定成年人 每天允許攝入的鋁量不超過60mg。其他一些正在研究或已證實有佐劑作用的物質，由於安 全性、有效性或經濟性等方面的原因，尚未批准用於人體。磷酸鋅無毒，在物理、化學等方面與磷酸鋁具有較高的相似性，而且應用廣泛、來 源普遍、成本低廉。用磷酸鋅作為疫苗佐劑與鋁佐劑類似，均為顆粒佐劑，該類佐劑的作用是吸附抗 原後能形成凝聚性大顆粒，從而容易被巨噬細胞吞噬而增強抗原的免疫原性，此外，它還可 以減慢抗原的降解速度，延長抗原在體內的停留時間，延長刺激機體的時間，從而提高抗體 的滴度。為此，我們將磷酸鋅這一含鋅的化合物作為免疫佐劑，應用於疫苗的製備，並在動 物實驗中檢驗其免疫增強作用，結果顯示磷酸鋅作為佐劑與疫苗聯合應用，能夠有效增強 疫苗的體液免疫應答，其免疫增強效果優於鋁佐劑和氫氧化鋅佐劑，並且其致敏性低於鋁 佐劑和氫氧化鋅佐劑。

發明內容
為解決現有疫苗鋁佐劑在安全性等方面的缺陷，以及其它佐劑尚未批准用於人 體，從而制約著疫苗研究及發展，本發明提供一種安全，有效，穩定，價廉，並具有免疫增強 作用的磷酸鋅疫苗佐劑。本發明提供磷酸鋅作為疫苗佐劑的應用。本發明提供磷酸鋅在製備疫苗佐劑中的應用。
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本發明提供磷酸鋅疫苗佐劑在製備疫苗中的應用。本發明提供磷酸鋅疫苗佐劑在製備A肝疫苗中的應用。所述磷酸鋅的水合物化學式為Zn3(P04)2 *2H20，化學式量為422. 08，當其失去兩個 結晶水後，無水物化學式為Zn3(P04)2，化學式量為386. 08。所述磷酸鋅作為疫苗佐劑應用於人體的推薦劑量為lmg。所述磷酸鋅為市購的分析純Zn3(P04)2 *2H20粉末，或者市購的分析純Zn3(P04)2粉 末。所述磷酸鋅疫苗佐劑的製備將所需劑量的分析純的Zn3(P04)2 2H20粉末或者分 析純的Zn3(P04)2粉末加入到適量注射用水中混懸，即得磷酸鋅佐劑。本發明與現有技術相比具有下列優點和效果採用上述方案，使磷酸鋅疫苗佐劑 安全、無毒，由於磷酸鋅來源廣泛、成本低廉，非常適合於疫苗佐劑，磷酸鋅疫苗佐劑能夠高 效刺激機體免疫應答，免疫增強效果優於鋁佐劑和氫氧化鋅佐劑；磷酸鋅疫苗佐劑具有低 致敏性的特點，因此，在這一方面也優於鋁佐劑和氫氧化鋅佐劑。磷酸鋅疫苗佐劑與滅活的 A肝病毒抗原混合免疫動物後，能夠顯著增強抗原特異性的體液免疫應答。


圖1為28周內，使用不同劑量的磷酸鋅對小鼠血清特異性抗HAV IgG抗體水平的影響。圖2為35天內，磷酸鋅對小鼠血清特異性抗OVA IgE抗體水平的影響。圖3為28周內，使用不同劑量的磷酸鋅對小鼠血清特異性抗HBV IgG抗體水平的影響。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步描述。實施例1A、磷酸鋅作為A肝疫苗佐劑的免疫效果觀察磷酸鋅作為疫苗佐劑與滅活的A肝病毒抗原在動物實驗中，每隻小鼠的應用劑量 為磷酸鋅0. 5 1. 5mg，滅活A肝病毒抗原12. 8EU。a、磷酸鋅佐劑母液的配製al、精密稱取分析純的Zn3(P04)2 2H20粉末0. 1093g，加入到10ml注射用水中混 懸，製成Zn3(P04)2濃度為10mg/ml的磷酸鋅佐劑；a2、精密稱取分析純的Zn3(P04)2粉末0. 1000g，加入到10ml注射用水中混懸，製成 Zn3(P04)2濃度為10mg/ml的磷酸鋅佐劑；b、動物免疫將42隻ICR小鼠分為六組、每組7隻進行分組免疫，方案如下①HAV組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU ；②HAV+A1 (0H) 3組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU及在適量注射用 水中溶有lmg氫氧化鋁的佐劑；③HAV+Zn (0H) 2組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU及在適量注射用水中溶有lmg氫氧化鋅的佐劑； ④HAV+Zn3 (P04) 20. 5mg組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU及a步驟 中al的磷酸鋅佐劑0. 05ml (0. 5mg)；⑤HAV+Zn3 (P04) 2 lmg組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU及a步驟 中al的磷酸鋅佐劑0. lml (lmg)；⑥HAV+Zn3 (P04) 2 1. 5mg組每隻小鼠腹腔注射滅活A肝病毒抗原12. 8EU及a步 驟中al的磷酸鋅佐劑0. 15ml (1. 5mg)；c、小鼠血清的採集分別於步驟b中所述分組免疫後，第4、8、12、16、20、24、28周採取小鼠尾靜脈血， 每隻採取全血約lOOiil，置於高壓滅菌過的Eppendorf管中，37°C靜置1小時，之後4°C靜 置過夜，次日離心後取上層血清，置於高壓滅菌過的Eppendorf管中-20°C中保存待檢；d、ELISA法測定步驟c中所取小鼠血清中抗_HAV IgG的抗體滴度用常規的ELISA商品試劑盒按說明書所述方法測定c步驟中所取小鼠血清中 抗-HAV IgG的抗體滴度。其中包被96孔酶標板的抗原為純化的滅活A肝病毒抗原，待測 樣品為c步驟中所取的各組小鼠血清，其中的陽性參照品為小鼠抗-HAV IgG陽性的血清， 陰性參照為未接觸過A肝病毒抗原的小鼠的抗-HAV IgG為陰性的血清；e、數據分析對所獲得的實驗數據以SPSS11. 5統計軟體進行單因素方差分析，P < 0. 05具有 統計學意義。表1為28周內，使用滅活HAV抗原與不同劑量磷酸鋅疫苗佐劑免疫獲得的小鼠血 清IgG水平(1 N)。表 權利要求
磷酸鋅作為疫苗佐劑的應用。
2.磷酸鋅在製備疫苗佐劑中的應用。
3.磷酸鋅疫苗佐劑在製備疫苗中的應用。
4.磷酸鋅疫苗佐劑在製備A肝疫苗中的應用。
5.如權利要求1-4中的任何一種，其特徵在於所述磷酸鋅的水合物化學式為 Zn3(P04)2 *2H20，化學式量為422. 08，當其失去兩個結晶水後，無水物化學式為Zn3(P04)2，化 學式量為386. 08。
6.如權利要求1-4中的任何一種，其特徵在於所述磷酸鋅作為疫苗佐劑應用於人體的 推薦劑量為lmg。
全文摘要
本發明涉及一種磷酸鋅疫苗佐劑，尤其涉及磷酸鋅作為疫苗佐劑的應用，以及磷酸鋅疫苗佐劑在製備疫苗中的應用。所述磷酸鋅作為疫苗佐劑與疫苗聯合應用，能夠有效增強疫苗的體液免疫應答，其免疫增強效果優於鋁佐劑和氫氧化鋅佐劑，並且經動物試驗結果顯示磷酸鋅作為疫苗佐劑其致敏性和安全性均優於鋁佐劑和氫氧化鋅佐劑。
文檔編號A61K39/39GK101972477SQ20101051341
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月21日 優先權日2010年10月21日
發明者王海漩, 胡云章, 胡凝珠 申請人:中國醫學科學院醫學生物學研究所