一株苜蓿根際促生菌mjm-11及其應用的製作方法

2023-05-17 08:31:56

專利名稱：一株苜蓿根際促生菌mjm-11及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一株苜蓿根際促生菌MJM-Il及其應用。
背景技術：
苜蓿是多年生豆科植物，富含各種必要的胺基酸、多種維生素和礦物質，且作為畜牧業生產的當家草種，在世界各地得到廣泛種植，其栽培歷史已經有2000多年，突出優點表現在飼用上為產草量高，利用年限長，再生性強，耐刈割，草質好、適口性強，營養豐富，肥田增產，保持水土等作用，是一種多功能牧草，素有「牧草之王」之美譽。苜蓿是世界上分布最廣的比較耐鹽的豆科牧草，但在中重度鹽鹼地實際栽培中其耐鹽性尚需提高。我國約有鹽鹼地約有O. 12億公頃，主要分布在東北、華北、西北內陸地區以及長江以北沿海地帶。鹽鹼地的改良是世界性的難題，同時鹽鹼地也成了制約我國生態 環境建設和農業可持續發展的最大障礙因子。因此了解植物鹽害的機理及其應對鹽脅迫的策略，對於進一步加快生態環境建設和農業可持續發展具有重要意義。植物根際促生細菌(plantgrowth-promoting rhizobacteria,簡稱 PGPR)是指自由生活在土壤或附生於植物根際的一類可促進植物生長、防治病害、增加作物產量的有益菌類。接種植物根際促生菌，可使土壤中無效營養有效化，預防和控制農作物病害，減少農藥和化肥的使用，是解決土壤、水源和食品汙染的根本途經，被普遍認為是一種環境友好、經濟有效的提高作物產量的方法。其中含ACC (I-氨基環丙烷-I-羧酸1-aminocyclopropane-1-carboxylate,簡稱ACC)脫氨酶的PGPR受到了各國學者的廣泛關注。ACC脫氨酶是一種有效降低逆境乙烯含量的外源促生物質，該酶在逆境條件下能減緩植物體內乙烯積累，促進植物生長，尤其是植物根部的生長，顯著提高農作物的抗逆性和增加產量。

發明內容
本發明的一個目的是提供一株路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II。本發明提供的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11,其保藏編號為CGMCC No. 6295。上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11在如下I) _4)至少一種中的應用也是本發明保護的範圍I)製備ACC脫氨酶；2)製備吲哚乙酸；3)製備嗜鐵素；4)促進植物生長；所述促進植物生長具體在鹽鹼脅迫條件下進行。本發明的另一個目的是提供一種製備產物的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟發酵上述的路氏腸桿菌(EnterobacterIudwigii)菌株MJM-II，即得到產物；所述產物為ACC脫氨酶、吲哚乙酸或嗜鐵素。
上述方法中，若所述產物為ACC脫氨酶時，所述發酵採用的培養基為TSB培養基和ADF培養基；其中，TSB培養基胰蛋白腖17g、大豆腖3g、NaC15g、葡萄糖2. 5g、K2HP042. 5g溶解到1000ml蒸餾水中，調整pH值至pH=7. 5。ADF 培養基=KH2PO4 4. 0g、Na2HP046 . 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、FeSO4 · 7H20 0. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、檸檬酸2. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸餾水中溶解後，調整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml，高溫滅菌後加入I-氨基環丙烷-I-羧酸(ACC)，使其終濃度為3. 0mmol/L· (可先配製母液 0. 5mol/L);其中，微量元素(IOOmL) =H3BO3IOmg, MnSO4Il. 2mg,ZnS04124. 6mg、CuS0478. 2mg、Mo0310mg。若所述產物為吲哚乙酸時，所述發酵採用的培養基為DF培養基或含有色氨酸的DF 培養基；其中 DF 培養基KH2P04 4. 0g、Na2HP046. 0g、MgS04 · 7H20 0. 2g,FeSO4 · 7H200. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、檸檬酸2. 0g、(NH4) 2S042. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸餾水中溶解後，調整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml。微量元素配製同上。若所述產物為嗜鐵素時，所述發酵採用的培養基為MKB培養基，其中MKB培養基(IL):酸解酪蛋白 5g，甘油 15mL，Κ2ΗΡ042· 5g，MgSO4 · 7H20 2. 5g，pH 7. 2。121°C，20min 滅菌。上述製備ACC脫氨酶的方法包括如下步驟I)在所述TSB培養基中培養上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II，收集菌體，得到培養菌I ;2)將所述培養菌I接種到所述ADF培養基中誘導培養，收集誘導培養產物，即得到ACC脫氨酶。在上述製備ACC脫氨酶的方法中，步驟I)中，所述培養條件為28°C，180rpm培養12h ；步驟2)中，所述誘導培養為28°C，180rpm培養48h。上述製備ACC脫氨酶的方法還包括如下步驟先將所述菌體、0. lmol/L Tris-HCl(pH=8. 5)、甲苯和0. 5mol/L ACC混勻，培養，得到甲苯培養物；再將所述甲苯培養物加入0. 56mol/L HCl混勻，離心收集上清液，得到ACC脫氨酶。在上述製備ACC脫氨酶的方法具體包括如下步驟挑取上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11於50ml TSB培養基中28°C，180rpm培養12h後，4°C離心收集菌體，用50ml DF培養基洗滌三次，將菌體轉接於ADF培養基中28°C，180rpm誘導培養48h，收集誘導培養產物；將誘導培養產物離心收集菌體，再將菌體懸浮於Iml 0. lmol/L Tris-HCl(pH=7. 6)中轉移至1.5ml的離心管中，1600g離心去上清，收集菌體；再重懸菌體於600 μ 10. lmol/L Tris_HCl(pH=8. 5)中，加入30 μ I甲苯漩渦震蕩30s，得到甲苯細胞，向甲苯細胞中加入20μ1 0. 5mol/L ACC短暫震蕩後，30°C培養15min，之後加入Iml 0. 56mol/LHCl混合震蕩室溫(25°C )離心5min，收集上清液，得到ACC脫氨酶。上述製備吲哚乙酸的方法包括如下步驟在所述DF培養基或所述含有色氨酸的DF培養基中培養上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II,收集發酵產物，即得到吲哚乙酸。上述製備吲哚乙酸的方法中，所述含有色氨酸的DF培養基中色氨酸的終濃度為0-500 μ g/mL,且不為 O。上述製備吲哚乙酸的方法中的培養條件為28°C，ISOrpm培養2天；上述製備吲哚乙酸的方法還包括如下步驟將所述發酵產物離心，收集上清液，得到吲哚乙酸。上述製備吲哚乙酸的方法具體包括如下步驟上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)單菌落MJM-11於DF液體培養基中28°C，180rpm培養2d，轉接到添加不同濃度(0、50、100、200、500 μ g · ml/1)色氨酸的DF培養基中，280C，180rpm培養2d，收集發酵產物，然後將發酵產物8000rpm離心，收集上清液，得到IAA。上述製備嗜鐵素的方法包括如下步驟在MKB培養基中培養上述的路氏腸桿菌 (Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11，收集發酵產物，即得到嗜鐵素。上述製備嗜鐵素的方法的培養條件為28°C，180rpm培養48h ；上述製備嗜鐵素的方法中還具體包括如下步驟將所述發酵產物離心，收集上清液，得到嗜鐵素。上述製備嗜鐵素的方法具體包括如下步驟將上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11接種於MKB培養基中，28°C搖床培養(180r · min^)48h ;收集發酵產物，發酵產物離心取上清液，得到嗜鐵素。本發明的第三個目的是提供一種促進植物生長的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟播種前，將植物種子浸泡到上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-Il菌懸液中；播種後，將上述的路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-Il菌懸液燒灌所述植物；實現促進植物生長。上述方法中，所述植物生長在鹽鹼脅迫條件下進行；本發明的實施例中用的是表I指標所示的鹽鹼土。所述植物具體為單子葉植物或雙子葉植物；所述單子葉植物進一步具體為小麥或苜蓿。上述促進植物生長體現在提高發芽率、株高、根長、地上植株鮮重、地上植株鮮重乾重、地下根系鮮重和/或地下根系乾重。上述方法中，播種後的菌懸液澆灌植物的根部。上述播種前的菌懸液(菌懸液A)濃度為I X 1010cfu/ml ;播種後的菌懸液(菌懸液B)濃度為 lX109cfu/ml。上述路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11菌懸液A按照如下方法製備將路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-Il接種於LB培養基中，於28°C,180rpm條件下振蕩培養24h，收集菌液，用無菌水調節菌液濃度為I X 101(lCfu/ml，得到菌懸液A。上述路氏腸桿菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11菌懸液B按照如下方法製備用無菌水調節菌懸液A調至濃度為lX109cfu/ml，得到菌懸液B。上述促進植物生長的方法具體包括如下步驟播種前，將植物種子預先用10%(V/V)次氯酸鈉表面消毒IOmin後用無菌水洗滌三次以上，浸泡於菌懸液A中處理Ih ;播種後，將菌懸液B均勻澆灌於植物苗根部周圍。
上述菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)於2012年6月26日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCCJias :北京市朝陽區北辰西路I號院3號)，保藏號為CGMCC No. 6295，分類命名為路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)。本發明的實驗證明，本發明分離得到一株苜蓿根際促生菌MJM-11，其可以合成ACC脫氨酶、IAA嗜鐵素，而且可在鹽鹼脅迫環境中有效地促進植物營養吸收、調節植物生長以及提高植物在逆境條件下抗逆能力，該菌株可應用在作物栽培，能夠增進肥效，提高產量。


圖I為菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii )在ADF培養基上生長的菌落形態圖2為菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在不同色氨酸濃度下IAA合成含 量圖3為菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)嗜鐵素定性檢測平板效果4為菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在鹽鹼脅迫下對苜猜促生效果5為菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在鹽鹼脅迫下對小麥促生效果圖
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。實施例I、苜蓿根際促生菌的篩選和鑑定I、篩選(I)取Ig根際土樣於50mL PAF培養基中，28°C振蕩培養。該PAF培養基中含有蛋白腖，酪蛋白水解物，MgSO4, K2HPO4，甘油。(2)取ImL震蕩後的PAF培養液，於50mL PAF培養基中，28°C振蕩培養。(3)取ImL得到的PAF培養液，於50mL DF鹽培養液中，28°C振蕩培養。該DF鹽培養液含有KH2PO4, Na2HPO4, MgSO4, FeSO4,葡萄糖，葡萄糖酸，檸檬酸，(NH4)2SO4, H3BO3, MnSO4, ZnSO4, CuSO4, Mo03。(4)取ImL得到的DF鹽培養液，於50mL不含(NH4)2S04，但含有3mMl_氨基環丙烷-I-羧酸(ACC)的上述DF鹽培養液中，28°C振蕩培養。(5)取ImL得到的培養液，塗布於含3mM ACC的DF鹽瓊脂培養基上，28°C培養。取培養基上生長的單菌落純化。(6)對純化後的細菌進行編號，挑取單菌落，轉接到ADF培養基上保存備用，命名為 MJM-II。2、菌落特徵及菌體形態該菌株MJM-II在ADF培養基(配方見後面)上形成圓形、不透明、淡黃色、突起光滑、邊緣整齊、有粘性的菌落。如圖I所示。3、生理生化特徵根據《常見細菌系統鑑定手冊》和《伯傑細菌手冊》對分離出的MJM-Il進行生理生化的檢測和鑑定。MJM-11 (Enterobacter ludwigii)表現出接觸酶陽性，澱粉水解陽性，吲哚實驗陽性。4、16S rDNA 序列分析MJM-Il的16S rDNA基因序列，見核苷酸序列表I所示。將MJM-11的16S rDNA基因序列與數Genbank據庫中的序列進行BLAST比對分析，結果表明與路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)的 16S rDNA 基因序列的相似性達 94%。上述菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)於2012年6月26日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCCJias :北京市朝陽區北辰西路I號院3號)，保藏號為CGMCC No. 6295，分類命名為路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)。實施例2、菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在製備ACC脫氨酶中的應用I、製備ACC脫氨酶
TSB培養基胰蛋白腖17g、大豆腖3g、NaC15g、葡萄糖2. 5g、K2HP042. 5g溶解到1000ml蒸餾水中，調整pH值至ρΗ=7· 5。ADF 培養基KH2P044. 0g、Na2HP046 . 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、FeSO4 · 7H20 0. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、檸檬酸2. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸餾水中溶解後，調整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml，高溫滅菌後加入I-氨基環丙烷-I-羧酸(ACC)，使其終濃度為3. 0mmol/L (可先配製母液 0. 5mol/L);其中，微量元素(IOOmL) =H3BO3IOmg, MnSO4Il. 2mg,ZnS04124. 6mg、CuS0478. 2mg、Mo0310mg。無(NH4)2SO4的 DF 培養基KH2P044. 0g、Na2HP046. 0g、MgS04 ·7Η20 0. 2g、FeS04 ·7Η200. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、檸檬酸2. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸餾水中溶解後，調整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml。微量元素配製同上。挑取由實施例I 獲得的 MJM-11 (Enterobacter ludwigii) CGMCC NO. 6295 單菌落於50ml TSB培養基中28°C，180rpm培養12h後，4°C、8000g、離心IOmin離心收集菌體，用50ml無(NH4) 2S04的DF培養基洗滌三次，將菌體轉接於ADF培養基中28°C，180rpm誘導培養48h，收集誘導培養產物。將誘導培養產物4°C、8000g、離心IOmin收集菌體。將菌體懸浮於Iml 0. lmol/L Tris-HCl (pH=7. 6)中轉移至I. 5ml的離心管中，1600g離心5min去上清，收集菌體。重懸菌體於600μ1 0. lmol/L Tris-HCl (ρΗ=8· 5)中，加入 30 μ I 甲苯漩渦震蕩30s，取其200 μ I的甲苯細胞做酶活測定(其餘做蛋白測定)；在甲苯細胞中加入20 μ I0. 5mol/L ACC短暫震蕩後，30°C培養15min，之後加入Iml 0. 56mol/L HCl混合震蕩室溫(25。。)離心5min,收集上清液，得到ACC脫氨酶。空白對照為600 μ 10. lmol/L Tris-HCl(ρΗ=8· 5)中加入30μ I甲苯，再加入20 μ I 0. 5mol/L ACC短暫震蕩後，30°C培養15min，之後加入Iml 0. 56mol/L HCl混合震蕩室溫(25°C )離心5min，收集上清液(對照)。2、ACC脫氨酶活性測定取上清液Iml與800 μ I 0. 56mol/L HCl混合，再加入300 μ I 2,4- 二硝基苯肼混合，將混合溶液30°C培養30min後，向其中加入2ml 2mol/L NaOH使其終止反應。於540nm處測得吸光值。以ImL濃度為0、0. 1,0. 3,0. 7、1和2 μ mo I -Γ1的α - 丁酮酸為標準液，力口Λ 800 μ I 0. 56mol/L HCl混合，再加入300 μ I 2,4- 二硝基苯肼混合，將混合溶液30°C培養30min後，向其中加入2ml 2mol/L NaOH使其終止反應，測540nm波長下吸光值，測定ACC標準曲線y=3. 7396x-0. 0385。以上清液(對照)為對照空白。
蛋白含量測定採用考馬斯亮藍法測定311. 34 μ g/ml上清液。ACC脫氨酶的活性以在測酶體系中每毫克蛋白每小時形成α - 丁酮酸(α -RA)的量表示，單位為ymol α-KA· (mgPr ^h)'酶活性測定均扣除樣品對照空白後計算，重複3次。結果顯示,MJM-11 (Enterobacter ludwigii)菌株產生的ACC脫氨酶有較高的活性，高達 27. 64 μ mo I α -KA · (mgPr · h)、實施例3、菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在製備IAA合成中的應用I、製備 IAADF 培養基ΚΗ2Ρ044· 0g、Na2HP046. 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、FeSO4 · 7H20 0. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、檸檬酸2. 0g、(NH4)2S042. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸餾水中溶解後， 調整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml。微量元素配製同上。供試菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)於 DF 培養基中 28°C, I8Orpm 培養 2天，再轉接到添加不同濃度(0、50、100、200、500 μ gL-Trp · ml/1)色氨酸(L-Trp)的新鮮的DF培養基中，280C，180rpm培養2d，收集發酵產物。取樣測得菌液的OD6tltl值，然後將其餘發酵產物(菌液)室溫(25°C)下8000rpm、10min，收集上清液，得到IAA。2、檢測IAA含量取其500 μ I上清液加入2ml Salkowsk試劑，室溫(25°C )培養20min後，於535nm處測得吸光值。用DF空白培養基相同處理作為對照調零。以不同濃度(0. 01,0. 05,0. 25、0. 5mg · mL—1) IAA標準液,相同處理測得標準曲線y=0. 1729χ-0. 0098,進行計算。結果如圖2所示,菌株MJM-1 l(Enterobacter ludwigii)能產生卩引哚乙酸,且合成吲哚乙酸量隨著L-Trp濃度的增加而增加，具體在濃度為O、50、100、200 AOOygL-Trp -πιΓ1中的吲哚乙酸量分別為 3. 75,5. 40,6. 88,10. 67,17. 04 μ g(ml · OD600)'實施例4、菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在製備嗜鐵素中的應用I、嗜鐵素合成的定性檢測鉻奧醇CAS平板培養基製備CAS藍色染液溶液A :將0. 06g CAS溶於50mL去離子水中，再加入IOmL Immol · L-1的FeCl3溶液(含 IOmmol · L 1 的 HCl)；溶液B :將0. 073g的十六燒基三甲基溴化銨(Hexadecyl trimethyl ammoniumbromide, HDTMA)溶於40mT,去離子水中；將溶液A著燒杯壁緩緩加入到溶液B中，輕輕晃動混勻溶液A和溶液B，得到CAS藍色染液。溶液a 15g KH2P04、25gNaCl、50gNH4Cl 溶於 500ml 去離子水；20%的葡萄糖溶液20g葡萄糖溶於IOOml去離子水；溶液c 25gNa0H溶於150ml去離子水；酸性酪蛋白水解物溶液3g酸性酪蛋白水解物溶於27ml去離子水，應用濾膜過濾滅菌；量取IOOml溶液a與750ml去離子水混合，向其中加入32. 24gPIPES(哌嗪_1，
4-二乙磺酸；PIPES在pH小於5以下不溶，應調節溶液酸鹼度在緩慢加入PIPES，並不斷攪拌，最終用溶液C將溶液調到pH=6. 8)，加入細菌培養專用瓊脂15g，120°C、15min滅菌。待溶液冷卻到50°C左右加入30ml酸性酪蛋白水解物溶液，IOml 20%的葡萄糖溶液，再緩慢加入IOOml藍色染液,充分混勻,倒平板。按照Schwyn和Neilands的方法，將已分離保存的菌株MJM-11 (Enterobacterludwigii)接於鉻奧醇CAS (chrome azurol S)培養基上,28°C培養72h,觀察菌落周圍的顏色變化，結果如圖3所示，有橘黃色圈產生，則該菌株可產生嗜鐵素。2、嗜鐵素合成定量分析I)製備嗜鐵素MKB 培養基(IL):酸解酪蛋白 5g，甘油 15mL，Κ2ΗΡ042· 5g，MgSO4 · 7H20 2. 5g，pH7.2。121°C，20min 滅菌。
將菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)接種於MKB培養基中，28°C搖床培養(180r · Iiiirr1HSh,收集發酵產物(菌液)；發酵產物lOOOrpm、IOmin離心,取上清液,得到嗜鐵素。2)檢測嗜鐵素CAS檢測液的製備I、將 0.182g CTAB 溶於 50ml 去離子水。2、將 0. 0054g FeCl · 6H20 溶於 20ml IOmM HCl 水溶液。3、將0. 0605g鉻天青S溶於50ml去離子水。4、將I. 5ml步驟2得到的溶液與7. 5ml步驟3得到的溶液混合，再與6ml步驟I得到的溶液混合，得到混合液。5、將 4. 307g PIPES 用 20_30ml 去離子水溶解，加入 6. 25ml 濃 HC1，調 pH 為 5. 6。6、將全部步驟4得到的溶液和全部步驟5得到的溶液混合，並用去離子水定容至溶 IOOml ο以1:1的體積比向上清液中加入CAS檢測液，充分混勻。靜止Ih後，630nm處測吸光值(A)，去離子水與CAS檢測液等體積混合測得的Ar為對照，A/Ar代表樣品中嗜鐵素的相對含量。該值越低，表明嗜鐵素含量越高。結果MJM-11 (Enterobacter ludwigii)的 A/Ar 為 I. 11 ;表明 MJM-11(Enterobacterludwigii)可以合成嗜鐵素。實施例5、菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在鹽鹼脅迫下對植物促生的盆栽實驗一、菌株MJM-11 (Enterobacter ludwigii)在鹽鹼脅迫下對苜猜促生的盆栽實驗本發明所用土樣均取自黑龍江省大慶市採油廠附近鹽鹼土。採集樣品時在每個區域內設置5個樣方，樣方面積為IX Im2,收集表層土壤((T20cm), 土壤混合後,裝入事先準備好的乾淨保鮮袋中，迅速將土樣帶回實驗室，土壤經碾碎，混勻，風乾後過篩保存。供試土壤的理化性質見表I。表I供試土壤理化性質
權利要求
1.路氏腸桿菌(Enterobacterludwigii)菌株 MJM-11,其保藏編號為 CGMCCNo. 6295。
2.權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobaacterludwigii)菌株MJM-Il在如下I) -4)至少一種中的應用 1)製備ACC脫氨酶； 2)製備吲哚乙酸； 3)製備嗜鐵素； 4)在鹽鹼脅迫下促進植物生長。
3.一種製備產物的方法，包括如下步驟發酵權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-11,即得到產物；所述產物為ACC脫氨酶、卩引哚乙酸或嗜鐵素。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於 若所述產物為ACC脫氨酶時，所述發酵採用的培養基為TSB培養基和ADF培養基； 若所述產物為吲哚乙酸時，所述發酵採用的培養基為DF培養基或含有色氨酸的DF培養基; 若所述產物為嗜鐵素時，所述發酵採用的培養基為MKB培養基。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於 所述製備ACC脫氨酶的方法包括如下步驟 1)在所述TSB培養基中培養權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacterludwigii)菌株MJM-II，收集菌體，得到培養菌I ; 2)將所述培養菌I接種到所述ADF培養基中誘導培養，收集誘導培養產物，即得到ACC脫氨酶。
6.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於 所述製備吲哚乙酸的方法包括如下步驟在所述DF培養基或所述含有色氨酸的DF培養基中培養權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-11,收集發酵產物，即得到吲哚乙酸。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於 所述含有色氨酸的DF培養基中色氨酸的終濃度為0-500 u g/mL,且不為O。
8.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於 所述製備嗜鐵素的方法包括如下步驟在MKB培養基中培養權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-11，收集發酵產物，即得到嗜鐵素。
9.一種促進植物生長的方法，包括如下步驟播種前，將植物種子浸泡到權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-Il菌懸液中；播種後，將權利要求I所述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-II菌懸液燒灌所述植物；實現促進植物生長。
10.根據權利要求9所述的方法，其特徵在於 所述植物生長在鹽鹼脅迫條件下進行； 所述植物具體為單子葉植物或雙子葉植物； 所述單子葉植物進一步具體為小麥或苜蓿。
全文摘要
本發明公開了一株苜蓿根際促生菌MJM-11及其應用。本發明提供的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-11，其保藏編號為CGMCC No.6295。上述的路氏腸桿菌(Enterobacter ludwigii)菌株MJM-11在如下1)-4)至少一種中的應用1)製備ACC脫氨酶；2)製備吲哚乙酸；3)製備嗜鐵素；4)在鹽鹼脅迫下促進植物生長。本發明的實驗證明，本發明分離得到一株苜蓿根際促生菌MJM-11，其可以合成ACC脫氨酶、IAA嗜鐵素，而且可在鹽鹼脅迫環境中有效地促進植物營養吸收、調節植物生長以及提高植物在逆境條件下抗逆能力。
文檔編號C12P17/10GK102796684SQ20121027895
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月7日 優先權日2012年8月7日
發明者郭長虹, 馬嘉敏, 康慧穎, 蔡洪生, 謝寶明 申請人:哈爾濱師範大學