治療前列腺癌的方法和組合物的製作方法

2023-05-17 03:57:51 2

專利名稱：治療前列腺癌的方法和組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及治療前列腺癌的方法，通過單獨施用膠原酶或與糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物合併施用。典型的實施例包括施用包括膠原酶、透明質酸酶、非離子表面活性劑、抗生素和鈣離子的混合物的組合物。
背景技術：
如今據信約有10,000,000美國男性患有前列腺癌。雖然只有不到3％患有該病的男性因此而死亡，但前列腺癌依舊是男性癌症死亡的第二殺手。這種癌症通常局限於前列腺，但在某些情況中癌症被診斷出時已擴散到骨骼、腎或腦。
疾病的年度檢查增加了早期檢測的可能性，尤其在疾病擴散之前。這些檢查包括直腸指檢和血液前列腺-特異性-抗原(PSA)測試。其它檢查方法包括超聲波成像、放射性核素掃描和活組織檢查。
血液PSA測試已使前列腺癌的早期診斷和有效治療有了革命性的進展。PSA是絲氨酸蛋白酶家族的一種蛋白酶，且是前列腺分泌的最豐富蛋白質中的一種。PSA是在管上皮和前列腺腺泡中合成的，且位於細胞中的胞質粒和小泡、粗糙型內質網、液泡、分泌顆粒和溶酶體(lyosomal)密體。PSA被分泌到前列腺小管腔內，在那裡成為精清的成分。為了到達血清，PSA從腔細胞擴散，通過上皮基膜和前列腺基質，或通過毛細管基膜和上皮細胞或進入淋巴。一旦進入血流，大部分PSA就與α-1-抗胰凝乳蛋白酶(PSA-ACT)和α-2-巨球蛋白形成複合物，少量PSA仍為游離狀態(游離PSA)。對前列腺癌而言游離PSA的水平通常會升高。
一旦診斷出前列腺癌，就必須確定並施用合適的治療方法。已有的治療方法包括根治性前列腺切除術、放療和激素抑制。為了確定合適的治療方法，通常考慮一些因素如患者的年齡和疾病的嚴重程度。通常這種病對較年輕的患者攻擊性較高。通常將任何大於0.5cc的腫瘤視為是臨床顯著的。局部前列腺癌的優選治療是根治性前列腺切除術。但這種治療可能會導致死亡、失禁、陽痿、直腸受損或肺栓塞。
因此，需要改善前列腺癌的治療方法，以降低一種或多種此類不良副作用的可能性。具體說，需要提供改善的治療方法以降低患者患陽痿的可能性。
發明概述本發明涉及治療活哺乳動物前列腺癌的方法。一方面，該治療涉及體內激活PSA。可以用一些方法中的一種來激活前列腺內或附近的PSA，如通過局部施用鈣離子，優選的是與膠原酶和任選地其它水解酶如透明質酸酶聯用。
PSA是一種蛋白酶，是前列腺分泌的最豐富蛋白質中的一種。活化的PSA可以降解前列腺癌性腫瘤，通過如幹擾腫瘤的初始生長期和/或幹擾血管生成期。前列腺癌生長的初期是指腫瘤生長到豌豆大小左右。除非腫瘤在其周圍或內部形成其本身的血管，即所謂的血管生成的過程，否則腫瘤不能再長大。血管生成包括將化學信號送遞入周圍血管從而侵蝕血管壁，將毛細血管送入腫瘤。通過幹擾血管生成，腫瘤就不能生長超過其初始大小。在本發明的一方面，通過施用鈣離子可激活PSA。
在本發明的另一方面，前列腺癌的治療方法指施用含有治療有效濃度膠原酶的組合物。膠原酶可能降解前列腺癌性腫瘤，通過如維持癌性腫瘤周圍或內部的連接組織，包括血管生成所產生的毛細血管。
另一方面，本發明的方法涉及局部施用治療有效濃度的膠原酶，並與糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物聯用。與膠原酶一起給予的優選酶是糖苷酶，如透明質酸酶。
用於本發明的組合物還可含有鈣離子、非離子表面活性劑(如TritonX-100)和抗生素(如慶大黴素)或與它們合併施用。
發明詳述本發明提供了一種治療前列腺癌的方法。在本發明中發現可以用含有至少一種水解酶的組合物來治療前列腺癌。本文所用的「治療」包括預防、抑制、治癒和減輕前列腺癌或其症狀和預防或減輕前列腺癌的轉移。
前列腺癌的緩解包括降解前列腺腫瘤，如分解前列腺腫瘤結構的完整性或連接組織，從而當與治療前腫瘤的大小相比此時腫瘤的大小減少了。前列腺癌的治癒包括降解前列腺腫瘤，從而在治療後就不再檢測到腫瘤。可以減少腫瘤的大小或使腫瘤大小變得檢測不到，如通過由於供血的缺乏而萎縮或受一種或多種由本發明方法所施用的成分的攻擊或降解。
前列腺癌擴散的緩解包括減緩前列腺癌擴散到其它組織的速度。前列腺癌擴散的防止包括預防前列腺腫瘤擴散到前列腺之外。
依據本發明的一種療法是通過施用治療有效濃度的組合物，所述的組合物含有能有效緩解、治癒、抑制或防止前列腺癌或預防或減輕前列腺癌擴散量的骨膠原。
將含有膠原酶的組合物局部施用於前列腺。局部施用包括將組合物送入前列腺和/或癌性治療內或周圍。局部施用還包括用組合物包圍前列腺和/或癌性腫瘤或將組合物施用於前列腺和/或癌性腫瘤表面。癌性腫瘤包括前列腺癌、癌細胞等。
本發明的其它治療可以通過激活體內PSA進行。體內PSA激活包括激活在前列腺內和/或附近的PSA，尤其是哺乳動物內源性PSA。PSA是一種蛋白酶，被激活後能有助於前列腺腫瘤的溶解或降解。在另一實施例中，通過在前列腺中局部施用鈣離子可以激活PSA。
雖然本發明中的方法不希望束縛於理論，現描述涉及本發明方法如何治療前列腺癌的理論。在初始階段，癌性治療生長到豌豆大小。然後通過血管生成，腫瘤長大(即通過將化學信號送遞到周圍血管，腫瘤在其周圍和內部長出血管向腫瘤提供毛細血管)。據信本發明的治療幹擾這種進展。
PSA是一種分子量約為3.3萬道爾頓的絲氨酸蛋白酶，且是前列腺分泌物中最豐富的蛋白質之一。據信通過激活PSA，PSA可以部分或完全溶解或降解前列腺內的腫瘤細胞。這種過程特別可用於初始生長階段的腫瘤以及血管生成階段的腫瘤。可以通過如施用鈣離子激活PSA。
膠原酶是一種金屬蛋白酶。據信少量蛋白水解酶的存在可以增加膠原酶的活性，即所存在的蛋白酶的量不能高到蛋白酶將膠原酶消化到使其失活的程度。分泌到前列腺的PSA可能足以增加膠原酶的活性。通過增加膠原酶的活性，膠原酶的活性由不能有效降解足量的底物(如降解結締組織)的水平上升至能有效降解足夠底物的水平。隨後例如，在PSA存在下，膠原酶可以降解膠原或結締組織、腫瘤血管和/或腫瘤細胞基膜。結果，腫瘤的供血減少或停止，導致腫瘤細胞死亡。這也可能會導致人免疫系統向腫瘤進一步的攻擊，和輔助前列腺癌的減輕和治癒或減輕或防止前列腺癌的擴散。
在本發明的方法中，膠原酶可以與其它蛋白酶、酶或適用於增加膠原酶活性或輔助腫瘤降解的蛋白質合併施用。例如，膠原酶可以與蛋白酶、糖苷酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物合併施用。
糖苷酶包括任何能催化糖苷鍵水解的酶。合適的例子包括透明質酸酶、神經氨酸酶、澱粉酶和溶菌酶。優選的糖苷酶包括透明質酸酶。
蛋白酶包括任何能催化蛋白質或肽中一種或多種肽鍵水解的酶，如羧肽酶、氨肽酶和內肽酶。特別適用的例子包括彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、梭菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、纖溶酶、舍雷硫代肽酶(serrathiopeptidase)、胰酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑和多形核(PMN)白細胞絲氨酸蛋白酶。
核酸酶包括任何能催化核酸內酯鍵水解的酶，如核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶。合適的例子包括DNase I和RNase。
酯酶包括任何能催化酯水解的酶。合適的例子包括膽固醇酯酶。
脂肪酶包括任何能催化醯基甘油羧酸酯水解的酶。合適的例子包括磷酸酯酶。
鏈激酶包括能與纖溶酶原形成複合物從而催化纖溶酶原活化成纖溶酶的蛋白質。
該組合物還可以含有鈣離子、表面活性劑和/或抗生素，或與它們合併施用。
可以單獨、順序施用組合物中的成分-膠原酶、其它蛋白酶、蛋白質、或酶、鈣離子、表面活性劑和抗生素，較佳地以適用於局部用藥的液體藥用單位劑型與另一種混合。所施用的組合物的劑量可以在很大的範圍中變化這易於由臨床醫生確定。為獲得理想治療目的的優選劑量取決於患者的年齡、疾病的特性和嚴重程度、組合物的效力和施用的方式。
較佳地，適用於本發明方法的組合物含有膠原酶和至少一種糖苷酶(較佳地為透明質酸酶)、蛋白酶(較佳地為胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、彈性蛋白酶、分散酶或纖溶酶)、或核酸酶(較佳地為DNase I)。更佳地，組合物含有膠原酶和糖苷酶(較佳地為透明質酸酶)。Gokcen等人的美國專利No.5,116,615中描述了適用於本發明方法的組合物，本文將其納入作為參考。
膠原酶細菌膠原酶如溶組織梭菌(Clostridium hystolyticum)的膠原酶EC3.4.24.3是一種已很好定性且可購得的酶，通過在三股螺旋上多個位點的水解，它將膠原降解成短肽。膠原酶在其活性位點含有Zn2+，且與其底物的結合及形成能完全催化活性所需的構型需要Ca2+。
靜脈內注射膠原酶顯現出對試驗動物有極低程度的危害。對小鼠而言，靜脈注射膠原酶粗製品的LD-50為300mg/kg體重。已顯示膠原酶的口服水溶液在劑量高到8,000mg/kg體重時仍無毒性。對膠原酶而言，大鼠急性靜脈注射LD-50可達1272單位/公斤。
細菌膠原酶的商業產品通常含有少量汙染蛋白酶、肽酶、粘多糖酶和糖苷酶，包括梭菌蛋白酶、胰蛋白酶和酪蛋白酶樣氨肽酶。梭菌蛋白酶是粗製膠原酶製劑中最多的汙染酶。梭菌蛋白酶含有必需SH基團，且能被半胱氨酸激活而受巰基結合劑的抑制。梭菌蛋白酶也具有胰蛋白酶類的特異性。粗製膠原酶製劑中含有少量汙染酶如胰蛋白酶，梭菌蛋白酶常常比高純度的膠原酶製劑具有更高的效力，表明在前列腺癌的治療中可能有多種酶或蛋白酶的共同作用。這些酶和/或蛋白酶能輔助活化膠原和/或輔助降解腫瘤，通過催化水解對腫瘤生長或其結構完整性而言很重要的鍵。
當與其它蛋白質和/或酶(如糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物)聯用時，粗製膠原酶製劑在治療中特別有用。
糖苷酶適用於本發明方法的糖苷酶包括透明質酸酶、神經氨酸酶、澱粉酶和溶菌酶。較佳地糖苷酶是透明質酸酶。
已知透明質酸酶(透明質酸-4-聚糖水解酶)是一種已知的催化透明質酸(酸性粘多糖)水解成雙糖、四糖或它們混合物的酶。優選的是從綿羊睪丸(EC2.1.1.35)衍生出的透明質酸酶。
將75,000國際單位的透明質酸酶注射入動物，血壓、呼吸、體溫或腎功能都沒有明顯的變化。通常透明質酸酶是不注射到已知感染的區域的。
澱粉酶包括酶如α-澱粉酶或β-澱粉酶，澱粉酶能水解澱粉、糖原和相關多糖中的O-葡糖基。
神經氨酸酶將連接末端非還原性N-和O-醯基神經胺基酸殘基的2，3-、2，6-和2，8-葡糖苷鍵水解成半乳糖，將N-乙醯基己糖胺、或N-或O-醯基神經胺基酸殘基水解成半乳糖，將寡糖中的N-乙醯基己糖胺、或N-或O-醯基神經胺基酸殘基水解成糖蛋白或糖脂。
溶菌酶水解葡聚糖肽異聚物中N-乙醯基胞壁酸和2-乙醯氨基-2-脫氧-D-葡萄糖殘基間的β-1，4-鍵。溶菌酶為EC3.21.17。
蛋白酶適用於本發明方法蛋白酶的例子包括彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、梭菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、纖溶酶、舍雷硫代肽酶、胰酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑和多形核白細胞絲氨酸蛋白酶。
彈性蛋白酶包括任何能水解彈性蛋白的酶。胰彈性蛋白酶EC 3.4.21.36就是一個例子。胰彈性蛋白酶催化蛋白質(包括彈性蛋白)的水解，擇優切割Ala-Xaa。
胰蛋白酶是一種擇優切割Arg-Xaa和Lys-Xaa的絲氨酸內切蛋白酶。胰蛋白酶為EC 3.4.21.4。
胰凝乳蛋白酶是絲氨酸內切酶EC3.4.21.1。
鏈黴蛋白酶(Calbiochem/Behring，La Jolla，California的註冊商品名)是從鏈黴菌得到的各種菌外和菌內蛋白酶的混合物。它能將任何蛋白質基本上完全水解成游離胺基酸。
分散酶是一種通常從多粘芽孢桿菌(Bacillus polymyxa)得到的中性金屬蛋白酶。
菠蘿蛋白酶是一種具有廣特異性的半胱氨酸蛋白酶，鑑定為EC 3.4.22.32。
梭菌蛋白酶是一種特異性切割Arg-Xaa和Arg-Pro鍵的半胱氨酸蛋白酶，鑑定為EC 3.4.22.8。
嗜熱菌蛋白酶是一種擇優切割Xaa-Leu和Xaa-Phe的金屬內切蛋白酶，鑑定為EC3.4.24.27。
枯草桿菌蛋白酶是一種催化蛋白質水解的絲氨酸內切蛋白酶，對肽鍵特異性廣，鑑定為EC 3.4.21.62。
木瓜酶是一種半胱氨酸肽鏈內切酶，其擇優水解結合於Arg、Lys、Phe殘基上羰基的肽，鑑定為EC 3.4.22.2。木瓜酶還具有酯酶、硫酯酶、醯胺轉移酶和轉酯酶活性。
木瓜凝乳蛋白酶是一種具有與木瓜酶類似特異性的內切蛋白酶。木瓜凝乳蛋白酶為EC3.4.22.6。
纖溶酶也稱為血纖蛋白溶酶，是一種將血凝塊中的難溶性纖維蛋白轉化成可溶性產物的絲氨酸蛋白酶。它是通過蛋白水解從纖溶酶原形成的，擇優切割Lys-Xaa和Arg-Xaa。纖溶酶為EC 3.4.21.7。
組織蛋白酶G是一種具有與木瓜凝乳蛋白酶類似特異性的糖蛋白絲氨酸內切蛋白酶。該蛋白酶為EC 3.4.21.20。
纖溶酶原激活劑包括任何能將纖溶酶原轉化成纖溶酶的絲氨酸蛋白酶。
多形核(PMN)白細胞絲氨酸蛋白酶包括在多形核白細胞中發現的絲氨酸蛋白酶。
其它蛋白酶包括(但不限制於)胰酶和舍雷硫代肽酶。
核酸酶、脂肪酶和酯酶適用於本發明方法的核酸酶例子包括DNase I和RNase。DNase I(脫氧核糖核酸酶I)是一種能催化將DNA內切成5』-磷酸二核苷酸和5』-磷酸寡核苷酸終產物的酶。DNase為EC 3.1.21.1。RNase是一類切割磷酸二酯鍵和RNA鏈的核酸酶。
適用於本發明方法脂肪酶的例子包括膽固醇脂肪酶。
適用於本發明方法酯酶的例子包括磷酸酯酶。磷酸酯酶是一種催化甘油磷脂水解的酶。已將磷酸酯酶分成A1、A2、B、C和D型。
鈣離子還可施用鈣離子來治療前列腺癌。鈣離子可以用以激活膠原酶和/或PSA。可以通過如氯化鈣來提供鈣離子。通常鈣離子的濃度約在1mM到50mM之間，較佳地在10mM和50mM之間，更佳地約為20mM。
在一治療實例中，活化的PSA能降解或溶解前列腺腫瘤並幹擾初始腫瘤生長和/或血管生成。在另一治療實例中，可以將活化的PSA與膠原酶聯合施用，活化的PSA可以增加膠原酶的降解蛋白活性。從而使膠原酶降解前列腺腫瘤。在另一治療實例中，可以將膠原酶與鈣離子和/或蛋白酶、酶、蛋白質、非離子表面活性劑或抗生素一起聯合施用來治療前列腺癌。
非離子表面活性劑適用於本發明方法的組合物還可含有非離子表面活性劑或與其一起施用。表面活性劑輔助前列腺癌組織的溶解和裂解。合適的表面活性劑的例子包括烷基苯基多氧乙烯表面活性劑如TritonX-100(辛烷基苯氧基多乙氧基乙醇，可以從Rohm and Haas，Philadelphia，PA購得的一種辛烷基苯基多氧環氧乙烷)和其它多氧亞烷基-基的非離子表面活性劑如Tween20/80(Atlas Chemical)、Genapol X-080/100/150、C-100(Hoechst AG)、Thesit(Destin-Werk GMBH)、Brij35、Lubrol PX(ICI Americas)、Igepal CO-630/710(GAF)、Surfonic N-95(Jefferson)、Tergitol NP-27(Union Carbide)。其它合適的表面活性劑包括環氧乙烷與山梨糖醇的部分脂肪酸脂及山梨糖醇酐的縮合產物，如Tween系列(Atlas Chemical)，其中環氧乙烷與醇的摩爾比例在15∶1到25∶1的範圍內，脂肪酸成分包括月桂酸、硬脂酸或油酸(C10-C20)。
其它可有用本發明的非離子表面活性劑包括C6-C12烷基酚的環氧乙烷酯，如壬烷苯氧基多氧乙烯醚。特別有用的由8-10摩爾環氧乙烷與壬基苯酚縮合製備的酯。可購得的這種類型的表面活性劑包括Igepal CO系列(GAF Corp.)。
其它可用的非離子表面活性劑包括環氧乙烷與疏水聚氧亞烷基縮合的產物，如環氧丙烷與丙二醇縮合。這種類型的化合物包括可購得的表面活性劑Pluronic E-127、Pluronic PX和Pluronic L-62(Wyandotte Corp.)。
其它可用的表面活性劑包括C8-C22烷基醇(每摩爾醇含有2-50摩爾環氧乙烷)的縮合產物。這種類型的表面活性劑包括C10-C20脂肪烷基醇(每摩爾醇含有3-45摩爾環氧乙烷)的縮合產物。這些化合物是可購得的，如Poly-Tergent SLF系列(Olin Chemicals)或Tergitol系列(Union Carbide)。
這些適合的表面活性劑的表現會受如pH、溫度、離子強度和表面活性劑濃度的影響。
較佳地，加入濃度佔組合物體積約0.1％到10％的表面活性劑。更佳地，表面活性劑存在的濃度約為0.5％到5％(體積)。
抗生素適用於本發明方法的組合物還可含有抗生素，或可與抗生素一起施用。一般，通過如直接注射前列腺局部適用於前列腺是安全、簡單且有效的將組合物引入身體的手段。當然一些局部施用方法可能會有患細菌感染的危險，而後者將導致如發燒、菌尿和菌血病。
抗生素常常可以迅速減輕急性前列腺感染的症狀。但，沒有一種抗生素是能夠有效抵抗所有致病尿道微生物。各種抗生素都具有其自身抗一種或幾種微生物品種的範圍。較佳地，用於治療細菌前列腺炎的藥物是高脂溶性的；具有鹼性pKa；對血漿蛋白質的結合極小；且是常規革蘭氏陰性尿路病原體的殺菌劑。
較佳地，本發明的組合物含有合適的抗生素以預防或降低可能與本發明自身方法相關的細菌感染的發病率。所用的抗生素通常提供足夠的保護抵抗常遇到的尿路病原體細菌菌株包括大腸桿菌、糞鏈球菌、變形菌/單孢菌和凝固酶陽性葡萄球菌。較佳地，抗生素選自基本不抑制組合物酶促活性的抗生素。
本發明組合物中的抗生素(較佳地為慶大黴素或三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑)可選自表現出具有合適抗常遇到的尿道病原體細菌菌株活性範圍的抗生素，包括青黴素(青黴素G、青黴素V、苄星青黴素)、氨基青黴素(氨苄青黴素、羥氨苄青黴素)、羧基青黴素(羧苄青黴素、氧哌嗪青黴素、美洛西林)、抗青黴素酶的青黴素(甲氧苯青黴素、苯唑青黴素、乙氧萘青黴素)、先鋒黴素(頭孢氨苄、頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢唑啉)、氨基糖苷類(鏈黴素、新黴素、卡那黴素、妥布黴素、阿米卡星、奈替米星、西索米星)、四環素(脫氧土黴素、米諾四環素、四環素)、多粘菌素(多粘菌素B和E)、磺胺類藥(磺胺異噁唑、琥珀磺胺噻唑)、氟代喹諾酮(環丙沙星、諾氟沙星)、鹼性大環內酯(紅黴素、竹桃黴素)、潔黴素、氯潔黴素、氯黴素、呋喃妥因和萘定酸。
適用於本發明方法的抗生素包括硫酸慶大黴素(Garamicin，ScheringCrop.，Kenilworth，New Jersey)、三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑(Septra，Burroughs Wellcome，Research Triangle Park，N.C.)、呋喃妥因、萘定酸、妥布黴素、阿米卡星和硫酸奈替米星。
較佳地，施用硫酸慶大黴素或三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑。如今施用三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑是治療細菌性前列腺炎的首選藥物。最近的研究表明在預防手術後細菌的尿道感染中，單劑量慶大黴素、三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑或硫酸奈替米星能有效地長期起作用。
三甲氧苄二胺嘧啶是脂溶性鹼，與血漿蛋白質的結合有限，通常表現為前列腺組織血清濃度為2∶1到3∶1。三甲氧苄二胺嘧啶/磺胺甲噁唑(TMP/SMX)在尿和前列腺分泌物中產生治療濃度，且有合適的抗菌活性範圍。最佳用TMP/SMX的治療包括160mg TMP和800mg SMX劑量，一天口服2次，共30天。如果不能耐受TMP/SMX(過敏)，推薦慶大黴素治療。
在組合物中抗生素存在的量通常約為0.15到150μg/ml濃度。優選的抗生素(硫酸慶大黴素)在組合物中存在的濃度為1.5-150μg/ml，較佳地為10-25μg/ml。另外，就那些一般對氨基糖苷過敏，尤其是對慶大黴素過敏的人而言，甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的聯用藥物可以替代慶大黴素作為本發明組合物中的優選抗生素。甲氧苄啶存在的優選濃度為1-10μg/ml，較佳地為5-10μg/ml。磺胺甲噁唑存在的優選濃度為30-105μg/ml，較佳地為50-105μg/ml。
所示組合物的製備和測試本發明作為優選實施例公開了局部施用的組合物水溶液，其含有安全且有效治療濃度的水解酶膠原酶和透明質酸酶除垢劑TritonX-100和抗生素慶大黴素。較佳地，將所公開的組合物製備成在相對小體積中水解酶較濃的水溶液。
較佳地，所公開的組合物以適用於前列腺內注射的單位製劑提供。可以在生理可接受液態稀釋劑(如無熱原的鹽水)中化合物的溶液或懸浮液的可注射用劑型適用於患者。例如，可以製備裝有該冷凍乾燥組合物的小瓶，從而可以重新溶解該組合物的無菌成分，得到適用於注射入活哺乳動物的藥學上可接受的水溶液。單位劑型優選含有250到250,000U/ml膠原酶；160到160,000U/ml透明質酸酶；0.1％到10％非離子表面活性劑；和0.15到150μg/ml抗生素。較佳地，單位劑型含有2,500到25,000U/ml膠原酶；1,600到16,000U/ml透明質酸酶；0.5到5％非離子表面活性劑；和15到150μg/ml抗生素。
製備本發明的組合物。得到冷凍乾燥的膠原酶(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo.)和透明質酸酶(Boehringer/Mannheim Corp.，Indianapolis，Ind.)，用含有20mM到50mM CaCl2(CBSCa)的檸檬酸鹽緩衝鹽水重新溶解所需的濃度。將從溶組織梭菌(Clostridium hystolyticum)中得到的膠原酶進行層析純化，此膠原酶含有原低汙染量的酶梭菌蛋白酶、胰蛋白酶和酪蛋白酶。同樣層析純化自綿羊睪丸得到的透明質酸酶。所有酶的活性都以每mg國際單位表示。
當在4℃以冷凍乾燥保存時，這些酶都是穩定的。但這有利於防止溼氣進入冷凍乾燥的酶。例如，通常在開啟前將裝有冷凍乾燥酶的冷小管升溫至室溫。一般將酶稀釋重新溶解的溶液避光存儲於4℃，當在工作檯進行操作使將它們置於冰浴中。
較佳地，用新鮮蒸餾的去離子無菌水來還原酶，和製備用於注射用溶液的緩衝液。在一優選實施例中，所用的緩衝液是0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水(CBS，pH6.7)，含有足夠量(較佳地為0.01M到0.05M，更佳地為0.02M到0.05M)的鈣離子以活化膠原酶。據信任何合適的緩衝溶液如Ringers鹽水或Tris緩衝鹽水都是可用的。但緩衝液通常含有足以活化膠原酶的鈣離子，且通常不含鈣鰲合劑如EDTA或酶活性的其它抑制劑(如半胱氨酸)。
優選的緩衝液表現為生理pH，其範圍約為6.5到7.5，優選的是6.7到7.0。鹽水如氯化鈉濃度約0.1M到0.2M，優選的是0.15M到0.2M。類似地，檸檬酸鹽的濃度較佳地為0.02M到0.1M，優選的為0.05M到0.1M。，0.05M CBS+20mM CaCl2(pH 6.7)的製備物由550mg檸檬酸鈉、190mgNaOH和876mg NaCl溶解於100ml無菌無熱原的去離子水中構成。用3ml 1NNaOH將溶液的pH調節至6.7，並加入294mg CaCl2。加入表面活性劑TritonX-100(Malinckrodt，Paris，Ky)和抗生素慶大黴素(Sigma Chemical Co.)至合適的終濃度。TritonX-100在20℃的密度為1.082g/ml(20℃924μl/g)。在100ml混合物中加入1.5ml 10mg/ml(15mg)抗生素的無菌溶液，從而得到含有終濃度為150μg/ml慶大黴素的溶液。
用標準方法純化和滅菌此法得到的溶液。用含有TritonX-100(0.1％到10％)、抗生素慶大黴素(1.5到150μg/ml)和CaCl2(20mM)的檸檬酸鹽緩衝鹽水(pH6.7)無熱原的水製備膠原酶和透明質酸酶(0.1％到10％)的酶溶液(5ml)，並通入1ml柱(Detoxi-Gel)中以除去潛在的內毒素。藥學上可接受的溶液製備的最後步驟包括將此組合物通過孔徑為0.2m微米的已確定為無菌無熱原的微孔聚碸過濾器。由聚碸構成的低蛋白結合濾膜顯示明顯比相當的醋酸/硝酸纖維素膜過濾器更少的蛋白質吸收。用0.2mm無菌過濾器過濾起到抗微生物汙染的保護作用。另外，過濾使患者接觸不溶性顆粒或微團聚體的危險性最小。
按醫院藥房標準方法進行人腸胃外用藥的藥學上可接受的溶液的重新溶解和製備。當在4℃儲存時，在含有20mM CaCl2(CBSCa 6.7)(濃度範圍為0.1％到10％)的0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水的膠原酶/透明質酸酶/TritonX-100/慶大黴素(CHTG)的溶液能穩定2周，且保持高度有效地溶解人和犬的前列腺組織。據信組合物的毒性不會高於已知的各成分的毒性。
從Sigma Chemical Company購得自溶組織梭菌(Clostridium hystolyticum)衍生的膠原酶(EC 3.4.24.3)(XI型，產品#C-7657，批號96F-6801和96F-6838；XI-S型，產品#C-4785，批號17F-6814)。觀察到酶活性(以膠原酶U/mg計)和汙染酶水平的批間的變化，範圍為膠原酶1910到2450 U/mg、梭菌蛋白酶0.86到1.4U/mg、酪蛋白酶40到85U/mg和胰蛋白酶0.05到0.52U/mg。
一個單位膠原酶活性的定義為在鈣離子存在時，37℃，pH7.4，5小時內能從天然膠原釋放肽(相當於茚三酮顏色)成1微摩爾L-亮氨酸的膠原酶量。存在2.5mM二硫蘇糖醇時，在25℃pH7.6，1個單位梭菌蛋白酶每分鐘能水解1微摩爾N-α-苯甲醯基-L-精氨酸乙酯(BAEE)。在pH7.5，37℃，1個單位的酪蛋白酶(非特異性蛋白酶)在5小時內能將酪蛋白水解產生顏色相當於1微摩爾(181μg)L-酪氨酸。pH 7.6，37℃，一個單位的胰蛋白酶活性每分鐘能水解1微摩爾N-α-苯甲醯基-L-精氨酸乙酯(BAEE)。
可以按本領域已知的方法確定膠原酶和其它酶的活性。Gokcen等人的美國專利No.5,116,615公開了膠原酶和透明質酸酶分析的實例，本文將其納入作為參考。
組合物基本無內毒素，內毒素指已知對人和動物有劇烈副作用的革蘭氏陰性菌的熱原性脂多糖成分。
給藥方法本發明的一個方法涉及活化體內PSA。在一實施例中，通過如局部施用治療有效濃度的鈣離子在體內活化PSA。通過與局部施用治療有效量的膠原酶(通常可以和選定的蛋白酶、蛋白質或酶、鈣離子、表面活性劑和/或抗生素合併施用)聯用，可以在體內活化PSA。
本發明的其它方法涉及施用可用於治療前列腺癌的腸胃外組合物的水溶液。合適的組合物如上所述，且包括治療有效量的膠原酶且任選含有一種或多種如下成分如上所述選定的蛋白酶、蛋白質或酶、鈣離子、表面活性劑和抗生素。在一實施例中，該組合物含有膠原酶、透明質酸酶、鈣離子、表面活性劑和抗生素。可用如CaCl2提供鈣離子。表面活性劑可以是如TritonX-100，而抗生素可以是如慶大黴素。
將此組合物局部施用於前列腺。局部施用包括將組合物施用於前列腺和/或癌細胞或腫瘤內或其附近，較佳地為腫瘤內。局部施用包括用組合物包圍前列腺和/或癌性腫瘤或將組合物適用於前列腺和/或癌性腫瘤的表面。例如，通過直接的前列腺內注射或灌注入前列腺，能局部施用組合物。較佳地，小容量如約5cc或更少，通過注射。而較大的容量如5cc以上通過緩慢灌注約15-20分鐘。
為了證明施用的精確性，即組合物是否施用於前列腺細胞或腫瘤的附近或進入它們，泌尿科醫生通常可以通過如成像(可以在診斷過程和前列腺活體檢查過程中得到)得到前列腺圖像。
局部施用組合物，從而局部給予治療有效量的組合物來治療前列腺癌。較佳地，該量足以降解前列腺腫瘤，治癒或減輕前列腺癌。
在一實施例中，通過前列腺內局部注射施用組合物。通過在指診直腸控制(digital rectal control)和/或超聲波指導下，將一長的細針插入前列腺內進行前列腺內注射。這種注射通常是在局部麻醉下進行的，且注射溶液可以用碘卡因(iodocaine)稀釋。在注射過程中，針可以不時地重定位，以使組合物得到能最好地分布。有一些注射途徑將本文所公開的組合物引入前列腺。
施用的優選路徑是經尿道的前列腺內(病損內)注射。經尿道方法是在插入導管後迅速進行的。注射的組合物的量通常為1到50cc。
為了使注射的組合物的有效性最佳，可以用充氣囊擴張前列腺尿道。通過膀胱鏡插入的囊，抑制注射入的酶溶液通過多孔管道系統(流注入尿道)的立即溢出。這種注射方法的優點是此方法能直接用膀胱鏡觀察病損的瘤狀區域。在前列腺直接注射的過程中，患者所經受的痛苦和不適最小，且可以與肌內注射相比。
另外，可以用前列腺注射的經腹膜或經直腸路徑。注射的經腹膜路徑包括在超聲波和/或指診指導下，將22g×20cm的針吸活檢用的針通過會陰插入前列腺。然後，將1-50cc所公開的組合物局部注射入前列腺的各側葉。通常在局部麻醉下進行注射。在注射過程中，針可以不時地重定位，以使組合物得到能最好地分布。在指診直腸控制下可以用超聲波指導針的定位。這種經會陰路徑的注射是一種較好的替代經尿道或經直腸的方法，能減少由注射後細菌感染而引起的潛在併發症。
為了降低與經會陰前列腺內注射相關的細菌感染，推薦使用無菌注射方法而且這是本領域技術人員已知的。將多種標準殺菌製劑(如Phiso-Hex、Betadine、聚乙烯吡啶酮-碘或洗必泰)中的任何一種施用於會陰的皮膚上，以提供適當的注射前的抗菌保護。使用無菌尿、適當的皮膚保護和殺菌方法，整個過程發生感染併發症的比例應較低。
經直腸路徑將針引入直腸壁，並在進行直腸指診時注射入前列腺。用微弧形的22g×20cm柔韌型針吸活檢用的針進行通過經直腸路徑的注射。使用Franzen針導向器(Precision Dynamics，San Fernando，Calif)，在超聲波和/或觸感指導方法下，能讓針安全地插入所懷疑的病損處。將無菌前列腺針導向器置於帶有手套的食指上。通過導向器將針插入直腸，並觸摸前列腺疑有病損的區域。可以將約1-50cc溶液注射入前列腺的側葉。為了注射足夠的物質，將針前後移動3-5次。可以在注射前使用麻醉膠以降低針插入時的疼痛。
一旦注射，前列腺葉就膨脹，尺寸增加並變得漲滿。在注射位點通過的注射液可以引起的分布很廣的與微梗塞相關靜脈痙攣。在注射後可能發生急性無尿。注射入前列腺的液體充滿注射位點葉泡，且通過泡小管可以通過鄰近的葉泡進入前列腺尿道。有1/3到1/2的注射液最終進入前列腺尿道。
在前列腺原位將5cc以上的組合物注射入體內，導致反射性平滑肌收縮，使治療性酶溶液迅速通過多孔管遠離靶組織而進入尿道。注射的衝力將導致注射位點的前列腺組織破裂。注射的液體可能進入腺泡系統的管，並完全充滿該腺。一旦腺被充滿，液體就佔據了阻力最小的通道並進入尿道。
注射液可以進入前列腺循環並可能會分散梗塞的小區域。引起血管血栓靜脈炎的酶可能是廣布的出血性梗塞產生的原因。由包括腎的亞甲籃分泌的試驗證明約1/5前列腺注射用可能進入體循環。前列腺的囊下和尿道周的區域天然具有更多的血管，且可以提高液體進入血流的循環。將印度碳黑染料顆粒注射入前列腺，在股盆的淋巴腺內肉眼或顯微鏡未觀察到可檢查的顆粒。前列腺注射液通過針的插入點可能還到達前列腺表面和前列腺周圍的組織。
在前列腺內注射硫酸鋇的不透放射線的微乳劑後，立即進行的放射照相顯示前列腺囊下液體漏出，並進入膀胱。偶爾，看見液體還滲漏到囊外。
被注射的前列腺小葉會壞死，主要是因為注射組合物的酶促反應，部分是因為注射液體在壓力下的剪切力。通過針插入點漏出的部分液體可能會導致表面血管的形成血栓且可能會造成附近臟器的粘附。滲漏出的液體量取決於局部壓力，而且可能為增加注射的壓力。通過尿道周圍靜脈的注射液可能會使它們發炎和形成血栓，而後尿道上皮壞死和脫落。
預計在前列腺尿道的周圍可能為發生尿道和尿道周增溶，而導致尿道上皮剝落。與注射組織增溶酶相關的組織生理學變化包括那些因腺管的液體逸出而造成的導管和周圍小泡的損傷。自針孔留出的液體可能為影響那裡的囊管和平滑肌纖維肌性的基質。
前列腺的直接局部注射而導致的高濃度治療性酶是主要問題，但沒有代謝失效的危險。當感染急性加劇時不推薦這種前列腺內注射，因為通常會有注射劑侵染及可能的敗血症的危險。在注射後的幾周可能會存在血尿和血性精液。
按所治療的患者的情況，所施用的組合物的治療有效劑量範圍為1cc到50cc，較佳地含有160到160,000U/ml透明質酸酶、250到250,000膠原酶、0.1到10％非離子表面活性劑(較佳地為TritonX-100)；和0.15到150μg/ml抗生素(較佳地為慶大黴素)。更佳地，劑量包括2,500到25,000U/ml膠原酶、1,600到16,000U/ml透明質酸酶、0.5到5％非離子表面活性劑(較佳地TritonX-100)和15到150μg/ml抗生素(較佳地慶大黴素)。這些劑量範圍表示估計能有效治療前列腺癌的組合物各成分的量。但組合物的劑量可以按患者的年齡、病症的特性和嚴重程度、組合物的效力及施用的途徑變化。可以每天、每周或每月注射施用指示劑直到達到所需的治療結果。
在一些實施例中，為了確定合適的劑量，確定腫瘤的尺寸因為較大的腫瘤可能需要較高濃度的施用於本發明方法的組合物。例如，對小於7g的腫瘤，通常施用單次灌輸的劑量。灌輸劑量可以為5cc，較佳地含有250-250,000U/ml膠原酶、160-160,000透明質酸酶、0.1％到10％非離子表面活性劑、0.15-150μg/ml抗生素和20mM-50mM CaCl2的檸檬酸鹽緩衝液(pH 6.7)。較佳地緩慢將此注射劑注射入腫瘤，如約幾分鐘。如果需要在此注射後還可再注射。例如，可以再次施用這種治療，如在1周或1個月內，也可重複施用如每周或每月。
當腫瘤為7到15g時，通常在第一次注射劑量後可以用較大劑量的組合物。例如，第一次施用所述的5cc灌注劑量。然後，緩慢地施用第二份25到45cc的相同組合物，如約15-20分鐘。如果需要可以順序施用這些指示劑，但一般不超過50cc總體積。例如，可以再次施用這種治療，如可以在一周或一個月重複施用，例如每周或每月。
對大於15g的腫瘤，第一次施用灌注劑量可以給予至多50cc，隨後可以施用如上所述的更大的劑量。
其它給藥方法如果遇到限制或抑制本發明組合物治療效果的問題，可以使用其它送遞方法。例如，酶治療的有效性可能受如下限制外部給予的酶的半衰期短、外源蛋白質的免疫應答的產生、抗蛋白酶效應子(α-1-抗胰蛋白酶、α-2-巨球蛋白)的抑制、或將酶特異性導向病損瘤狀區域的能力的喪失。
可用許多不同的載體系統將酶促組合物送遞到所需的前列腺位點。通常，合適的載體將治療劑送遞到其靶點而不會喪失特異性或反應性。較佳地，載體能與治療性酶連接且可以保持成複合物直到送遞完成。較佳地載體應避免觸發導致本發明組合物生物降解或失活的免疫防禦機制。
可以施用緩釋組合物，即可以緩釋、防止進入體循環並增加組合物的前列腺特異性定位。可以用緩釋植入法提供這種製劑，或以微膠囊或吸附於生物可降解聚合物或前列腺特異性免疫球蛋白提供。
較佳地將抗體用作酶脂質體載體系統。用抗體作為將治療劑送遞到特定組織的載體系統開發了能獨特識別和結合抗原的抗體。同樣，攜帶治療劑的抗體能更有效地結合於組織(天然分布許多血管或經歷血管生成)。另外，可用不同品種識別不同細胞類型的免疫酶螯合物混合劑。
可以產生組織特異性單克隆抗體，更好地確定將定位的抗原性細胞靶。可以用F(ab)或F(ab』)2片段改善定位特性。含有F(c)片段的抗體比F(ab)或(Fab』)2片段能特異性結合更長的時間，而後兩者表現出加速的清除機制。最近對人-鼠(嵌合的)單克隆抗體的開發可以有治療應用，且與傳統鼠衍生的單克隆抗體相比具有優越性。人-小鼠抗體表現出廣範圍且高度的特異性。當注射入人體時，嵌合的抗體比常規自鼠衍生的小鼠單克隆抗體更不易觸發免疫反應。人單克隆抗體的製備及其作為載體的使用可以進一步降低接受外源蛋白質的接受者的免疫應答程度。將這些因素如抗體製備、劑量和注射途徑，也可以控制抗球蛋白應答。
免疫定向酶治療的目的是將有效濃度的酶送遞到組織的活性特異性位點降低對附近正常組織的毒性，從而提高治療指數。可以將酶複合於單克隆抗體，這種單克隆抗體共價結合於酶而不影響酶的催化活性。與天然的保持水解蛋白活性的酶相比，綴合於組織特異性單克隆抗體的酶能在所定向的組織中實現更高程度的特異性定位。
其它特異性定位構思包括酶原-抗體複合物(胰蛋白酶原)或酶-抗體複合物(膠原酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶、DNase)，它們保留了酶和抗體活性。可以將酶包囊於組蛋白、血紅細胞(RBC)空胞(ghost)、聚乳酸和其它生物可降解膜或合成的微膠囊(含有前列腺特異性抗體)，以增加和維持溶解的蛋白酶在前列腺組織中的定向、定位和活性。
施用膠原酶和透明質酸酶能有免疫效果，重複注射可能導致產生抗體滴度且伴隨過敏症及嚴重性較低的過敏反應的危險。另外，存在膠原酶後透明質酸酶的特異性抗體可能為抑制酶的活性。如果受體免疫系統將活性酶識別為外源的，則可能發生潛在的免疫問題。可能會針對酶產生抗體且使酶失活或沉澱。使用人類的酶或那些由重組方法產生的酶可以將這些潛在的免疫併發症最小化。
避免免疫監視系統的策略包括將酶製劑包埋在生物可降解小泡中的方法，以保護酶的活性且有利於特異性送遞。將組織特異性蛋白質(單克隆抗體)附著於這些小泡，可以實現對細胞病理特異性位點的定位。可以將酶包埋在脂質體或其它生物可降解微膠囊中，與用於特異性定位的組織特異性單克隆抗體相連。
脂質體是含有水相的同心磷脂雙層小球體，已表明可用作載體系統。現今的脂質體製備技術已可以將各種藥物、激素或酶摻入各相。可以將單克隆抗體摻入脂質體的外層，從而增加含治療劑的脂質體的送遞特異性。
除了讓酶免受生理失活且防止免疫併發症外，將酶包埋在合成的微膠囊或生物可降解的小泡中，還可以提供特異性送遞的有價值的方法。各種形式的酶包埋技術可用於包埋酶，包括活細胞空胞、合成的聚合物微膠囊；和由膽固醇、卵磷脂和磷脂酸構成的脂類小泡(脂質體)。用受體本身的紅細胞送遞活性酶可以避免由潛在的在合成載體(如脂質體和微膠囊)中施用酶所引起的免疫和生理問題。
將聚乙二醇(PEG)共價連接於酶可以使這些蛋白質無免疫原性，可以延長它們的循環半衰期，從而逃避天然酶抑制劑的抑制作用，而且可以在減少自體溶解的情況下提高酶活性。PEG與蛋白質的連接是很簡單的，且可以通過超濾純化可以得到均勻的反應產物。
用如下典型實施例進一步說明本發明。這些實施例無任何限制作用。
實施例實施例1患有局部前列腺癌男性的研究的第一個病例一位70歲的男性被診斷出患有未擴散前列腺癌(即由放射性核素掃描和CAT掃描檢測沒有擴散)。估計前列腺內腫瘤的大小為7克。由聲像圖看出腫瘤的位置為右側葉。血液的PSA水平為40ng/ml。
如上所述(組合物的製備和測試)製備注射用組合物，包括12,500U/ml膠原酶、7,500 U/ml透明質酸酶、1％(v/v)TritonX-100、150μg/ml慶大黴素和40mmolCaCl2的0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水(Ph6.7)。將最終的組合物注入注射用的針筒(5cc)中。
在患者進行膀胱鏡檢查前先局部麻醉。將膀胱鏡置於尿道中，將注射針插入病損區(腫瘤)，並用超聲波成像監測。一旦將針固定好，將在約4-5分鐘內緩慢地注射5cc注射用組合物。在注射過程中，監測表徵中毒、過敏或其它不良反應的生命徵象。
患者恢復正常，沒有任何表徵對注射組合物不良反應的徵象。臨床過程中沒有情況發生。在3個月的過程中血液PSA水平逐漸減低到正常水平(4ng/ml或更低)並保持正常。5年後，患者被診斷為無前列腺癌。
實施例2患有局部前列腺癌男性的第二個病例一位65歲的男性被診斷出患有局部前列腺癌(即由放射性核素掃描和CAT掃描檢測沒有擴散)。估計前列腺內腫瘤的大小為15克。腫瘤的位置為右側葉且是一個實體瘤。
如上所述(組合物的製備和測試)製備注射用組合物，包括2,400U/ml膠原酶、1,600U/ml透明質酸酶、1％(v/v)TritonX-100、150μg/ml慶大黴素和120mmolCaCl2的0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水(Ph6.7)。注射液的總體積為30cc。
在膀胱鏡的監測下，將組合物注射入腫瘤。首先，緩慢注射5cc劑量。然後，將剩下的25cc緩慢地在約25-20分鐘內灌注。完成注射後，監測表徵中毒、過敏或其它不良反應的生命徵象。
患者恢復和注射預後都沒有異常情況發生。在3個月的過程中血液PSA水平逐漸減低到正常水平(4ng/ml或更低)並保持正常。5年後，患者被診斷為無前列腺癌。
實施例3患有局部前列腺癌男性的第三個病例一位72歲的男性被診斷出患有局部前列腺癌(即由放射性核素掃描和CAT掃描檢測沒有擴散)。估計前列腺內腫瘤的大小為9克，且其分布比較分散。血液的PSA水平為30ng/ml。
製備10cc含有50mM氯化鈣的0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水(pH6.7)的組合物。在膀胱鏡的監測下，將此氯化鈣組合物注射入前列腺的多個位點。完成注射後，監測表徵中毒、過敏或其它不良反應的生命徵象。約一個月後，約75％腫瘤已降解。隨後，在病損處第二次注射25mM氯化鈣的0.05M檸檬酸鹽緩衝鹽水指示劑(約5cc)。3年後，臨床診斷患者沒有癌症，且患者的PSA水平在正常範圍內。
必須指明，除非特別指明，在本發明說明書和權利要求書中所用的「一」和「該」包括複數形式。因此，如含有「一種化合物」的組合物包括含有兩種或多種化合物的混合物。
已參考各種特別和優選實施例和技術描述了本發明。但可以理解，在本發明的精神和範圍內還可以有許多變化和改進。
權利要求
1.一種治療哺乳動物前列腺癌的方法，其特徵在於，所述的方法包括施用含有治療有效濃度膠原酶的組合物。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的方法還包括施用糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物。
3.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的糖苷酶包括透明質酸酶、神經氨酸酶、澱粉酶、溶菌酶或它們的混合物。
4.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的蛋白酶包括彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、梭菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、纖溶酶、舍雷硫代肽酶、胰酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、多形核白細胞絲氨酸蛋白酶或它們的混合物。
5.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的核酸酶包括DNase I、Rnase或它們的混合物。
6.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的脂肪酶包括磷酸酯酶。
7.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的酯酶包括膽固醇酯酶。
8.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的方法包括施用透明質酸酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、彈性蛋白酶、DNase I、分散酶、纖溶酶或它們的混合物。
9.如權利要求8所述的方法，其特徵在於，所述的方法包括施用透明質酸酶。
10.如權利要求9所述的方法，其特徵在於，所述的組合物包含濃度約為250到250,000U/ml的膠原酶和濃度約為160到160,000U/ml的透明質酸酶。
11.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，所述的組合物包含濃度約為1,600到16,000U/ml的透明質酸酶。
12.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的組合物還含有有效濃度的非離子表面活性劑。
13.如權利要求12所述的方法，其特徵在於，所述的非離子表面活性劑包括C10-C20脂肪酸的縮水甘油酯、C8-C22烷基醇的縮水甘油酯或它們的混合物。
14.如權利要求12所述的方法，其特徵在於，所述的非離子表面活性劑包括TritonX-100。
15.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的組合物還含有有效濃度的抗生素。
16.如權利要求15所述的方法，其特徵在於，所述的抗生素包括慶大黴素。
17.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的組合物還含有有效濃度的鈣離子。
18.如權利要求17所述的方法，其特徵在於，所述的組合物含有CaCl2。
19.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的組合物還含有透明質酸酶、TritonX-100、慶大黴素和鈣離子。
20.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的局部施用包括前列腺內注射。
21.如權利要求20所述的方法，其特徵在於，所述的前列腺內的注射包括病損內的注射。
22.如權利要求20所述的方法，其特徵在於，所述的前列腺內的注射包括經尿道的注射。
23.一種治療活哺乳動物前列腺癌的方法，其特徵在於，所述的方法包括局部施用含有治療有效濃度膠原酶的組合物，且所述的組合物中的膠原酶與糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物聯用。
24.一種治療活哺乳動物前列腺癌的方法，其特徵在於，所述的方法包括體內激活前列腺-特異性-抗原。
25.如權利要求24所述的方法，其特徵在於，所述體內激活前列腺-特異性-抗原包括施用鈣離子。
26.如權利要求25所述的方法，其特徵在於，所述的方法還包括局部施用治療有效濃度的膠原酶。
27.如權利要求26所述的方法，其特徵在於，所述的方法還包括施用非離子表面活性劑、抗生素或它們的混合物。
28.如權利要求26所述的方法，其特徵在於，所述的方法還包括施用糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶或它們的混合物。
29.如權利要求26所述的方法，其特徵在於，所述的糖苷酶包括透明質酸酶、神經氨酸酶、溶菌酶、澱粉酶或它們的混合物。
30.如權利要求28所述的方法，其特徵在於，所述的蛋白酶包括彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、鏈黴蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、梭菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、纖溶酶、舍雷硫代肽酶、胰酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、多形核白細胞絲氨酸蛋白酶或它們的混合物。
31.如權利要求24所述的方法，其特徵在於，所述的局部施用包括前列腺內注射。
32.如權利要求24所述的方法，其特徵在於，所述的方法還包括引發宿主的免疫應答。
全文摘要
一種治療活哺乳動物前列腺癌的方法,包括局部施用含有治療有效濃度膠原酶的組合物。在一實施例中,治療活哺乳動物前列腺癌的方法包括局部施用含有治療有效濃度膠原酶和至少一種糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、纖溶酶原激活劑、鏈激酶和它們混合物的組合物。較佳地施用糖苷酶,如透明質酸酶。用於治療前列腺癌方法中的組合物還包括鈣離子、非離子表面活性劑如Triton R X－100和抗生素如慶大黴素,或與它們一起施用。治療活哺乳動物前列腺癌的其它方法包括如通過局部施用鈣離子激活體內前列腺－特異性－抗原(PSA)。
文檔編號A61K31/7036GK1384754SQ00814920
公開日2002年12月11日 申請日期2000年10月25日 優先權日1999年10月28日
發明者M·高克森 申請人:免疫分解學股份有限公司