一種高f值葵花低聚肽的製備方法
2023-04-25 05:27:01 2
專利名稱：一種高f值葵花低聚肽的製備方法
技術領域：
本發明屬於植物深加工技術領域，具體涉及到一種高F值葵花低聚肽的製備方法。
背景技術：
葵花籽的產量在世界主要植物油料資源中佔第二位。我國葵花籽產量也比較豐富，東北是我國葵花籽的主要產區。制油後的葵花柏是較好的食用蛋白質資源(蛋白質含量在40飛0%)，並且不具有其它植物油中典型的有毒成份，是一種很理想的植物蛋白資源。但由於葵花籽中有顯色酚，限制了其在食品中的直接使用。因此，以葵花籽蛋白為資源，通過生物技術製備具有顯著生理功效的低聚肽是非常有前景的，尤其是對於製備成高F值低聚肽來說是一個非常好的資源。高F值低聚肽是指一類由Tl個胺基酸殘基所組成的低聚肽，其中支鏈胺基酸(主要指必需胺基酸亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)的含量與芳香族胺基酸(主要指苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)含量的比值大於20。高F值低聚肽在改善肝功能方、抗疲勞、降血清膽固醇濃度方面具有顯著的生理功效。它在抗疲勞方面主要作用機理在於，高F值低聚肽具有含量較高的支鏈胺基酸，通過補充高F值低聚肽，支鏈胺基酸進入肌肉組織中氧化脫氨，一方面生成相應的a -酮酸進入三羧酸而氧化供能，另一方面，脫下來的氨基與丙酮酸或穀氨酸偶聯，促進丙氨酸和穀氨醯胺的形成，從而成為可提供能量的物質，從而減輕疲勞。目前，國內外較多的研究人員是採用動物蛋白(如魚蛋白、乳清蛋白)、植物蛋白(玉米黃粉、玉米醇溶蛋白、大豆分離蛋白)為原料，尚未見有報導是採用葵花柏蛋白為提取原料。在精製分離時國內外常採用活性碳色譜法和凝膠過濾法除去芳香族胺基酸來提高F值，然後再蒸汽加熱濃縮，這些方法存在一定的產業化局限色譜法會會消耗大量的水淋洗液，水洗液中肽類濃度較低(0. 19T0. 5%)，由此需要較長時間進行濃縮，不僅濃縮成本高，而且濃縮時間過長，易破壞產品的活性。
發明內容
本發明的目的是提供一種高F值葵花低聚肽的製備方法，該方法採用新原料製備高F值低聚肽，進一步提高葵花籽蛋白的利用價值，解決目前這類產品不足的問題。本發明是以葵花濃縮蛋白為原料，配以緩衝溶液形成酶解體系，然後採用三酶法聯合水解技術水解，即將葵花濃縮蛋白水解成以芳香族胺基酸為端基的多肽，然後用第二種酶水解多肽成芳香族胺基酸肽和游離胺基酸，進而採用微濾和超濾二級膜技術進行脫鹽以及除去游離胺基酸，提高F值的比例，最後經脫鹽、濃縮、冷凍乾燥而成。具體包括以下步驟
(1)混和取葵花柏蛋白，加水攪拌形成酶解體系；
(2)—酶水解在步驟(I)中所得的酶解體系中，加入鹼性蛋白酶，調節溫度4(T55°C，pH7. 5 9，反應時間為3(T240min，然後升溫至85 90°C，保持15 20min，滅酶，獲得以芳香族胺基酸為端基的多肽溶液
(3)二酶水解在步驟(2)中所得的多肽溶液中加入肌動蛋白酶，調節溫度45飛5°C，pH3. 5 7，反應時間為3(T240min，然後升溫至85 90°C，保持15 20min，滅酶，獲得低芳香族胺基酸肽和游離胺基酸；
(4)離心將步驟(3)中所得的酶解液進行離心，採用高速離心機，離心速度2000 4500rpm,離心時間5 30min,獲得酶解離心液；
(5)一級膜技術將步驟(4)中所得的酶解離心液進行微濾，除去分子量較大的物質，獲得澄清的多肽濾液；
(6)二級膜技術在步驟(5)中所得的多肽濾液中進一步採用納米過濾，將低聚肽與芳香族胺基酸、游離胺基酸、鹽分離出同時起到濃縮的作用，獲得高F值的葵花低聚肽。所述步驟(I)中酶解底物體系調配至質量比為廣20%。所述步驟(2)中採用的鹼性蛋白酶是指通過枯草桿菌發酵提取或動物胰臟提取而得的鹼性蛋白酶，其添加量是底物質量的0. I 1%。所述步驟(5)中微濾採用的濾膜的孔徑範圍是0. riO微米。所述步驟(6)中納米過濾採用的濾膜是NF-1014S、NF-1015S或NF-1016S，截留分子量300 2000，操作壓差0. 5 2. OMPa0與現有的技術相比，本發明具有以下技術效果
(1)本發明製備方法反應條件溫和、獲得的產品活性高；
(2)本發明製備方法清潔環保，無汙染，符合國家清潔生產的相關政策；
(3)本發明製備方法製得的產品具有顯著的生理功效，能充分適用於保健品行業。
具體實施例方式以下實施例僅用於闡述本發明，而本發明的保護範圍並非僅僅局限於以下實施例。所述技術領域的普通技術人員依據以上本發明公開內容和各參數所取範圍，均可實現本發明的目的。實施例I
稱取10克葵花柏蛋白，加入50亳升水，用氫氧化鈉調節PH7. 5，加入0. 05克鹼性蛋白酶，升溫到40°C，保持40分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後將酶解液冷卻到45°C，用檸檬酸調節pH4，加入0. 05克肌動蛋白酶，保持40分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後進行離心，調整離心速度2000rpm，離心時間保持10分鐘，然後倒出離心液選擇膜孔徑0. 5微米的膜進行微濾，獲得澄清的多肽溶液。將濾液進一步納濾，選擇NF-1014S膜，截留分子量300，操作壓差0. 6MPa，將芳香族胺基酸和游離胺基酸以及鹽分分離出來，同時將葵花低聚肽溶液進行濃縮，最後進行冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。實施例2
稱取50克葵花柏蛋白，加入500亳升水，用氫氧化鈉調節pH7. 6，加入0. Ig鹼性蛋白酶，升溫到45°C，保持60分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後將酶解液冷卻到50°C，用檸檬酸調節pH4，加入0. Ig肌動蛋白酶，保持120分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後進行離心，調整離心速度2500rpm，離心時間保持15分鐘，然後倒出離心液選擇膜孔徑0. 3微米的膜進行微濾，獲得澄清的多肽溶液。將濾液進一步納濾，選擇NF-1001T膜，截留分子量500，操作壓差0. 5MPa，將芳香族胺基酸和游離胺基酸以及鹽分分離出來，同時將葵花低聚肽溶液進行濃縮，最後進行冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。實 施例3
稱取100克葵花柏蛋白，加入2000亳升水，用氫氧化鈉調節PH8. 5，加入0. 5g鹼性蛋白酶，升溫到45°C，保持45分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後將酶解液冷卻到45°C，用檸檬酸調節pH4，加入0. 5g肌動蛋白酶，保持45分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後進行離心，調整離心速度3000rpm，離心時間保持15分鐘，然後倒出離心液選擇膜孔徑8微米的膜進行微濾，獲得澄清的多肽溶液。將濾液進一步納濾，選擇NF-1016S膜，截留分子量1000，操作壓差0. 5MPa，將芳香族胺基酸和游離胺基酸以及鹽分分離出來，同時將葵花低聚肽溶液進行濃縮，最後進行冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。實施例4
稱取300克葵花柏蛋白，加入5000亳升水，用氫氧化鈉調節pH8，加入Ig鹼性蛋白酶，升溫到50°C，保持55分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後將酶解液冷卻到50°C，用檸檬酸調節pH5，加入Ig肌動蛋白酶，保持120分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後進行離心，調整離心速度3500rpm，離心時間保持20分鐘，然後倒出離心液選擇膜孔徑6微米的膜進行微濾，獲得澄清的多肽溶液。將濾液進一步納濾，選擇NF-1016S膜，截留分子量500，操作壓差IMPa，將芳香族胺基酸和游離胺基酸以及鹽分分離出來，同時將葵花低聚肽溶液進行濃縮，最後進行冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。實施例5
稱取500克葵花柏蛋白，加入6000亳升水，用氫氧化鈉調節pH8. 2，加入I. 3g鹼性蛋白酶，升溫到53°C，保持100分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後將酶解液冷卻到50°C，用檸檬酸調節pH6，加入I. 3g肌動蛋白酶，保持60分鐘，然後將酶解液繼續升溫到90°C，保持15分鐘進行滅酶，滅酶後進行離心，調整離心速度4000rpm，離心時間保持10分鐘，然後倒出離心液選擇膜孔徑5微米的膜進行微濾，獲得澄清的多肽溶液。將濾液進一步納濾，選擇NF-1015S膜，截留分子量1500，操作壓差IMPa，將芳香族胺基酸和游離胺基酸以及鹽分分離出來，同時將葵花低聚肽溶液進行濃縮，最後進行冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。
權利要求
1.一種高F值葵花低聚肽的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟(O混和取葵花柏蛋白，加水攪拌形成酶解體系；(2)—酶水解在步驟(I)中所得的酶解體系中，加入鹼性蛋白酶，調節溫度4(T55°C， pH7. 5 9，反應時間為3(T240min，然後升溫至85 90°C，保持15 20min，滅酶，獲得以芳香族胺基酸為端基的多肽溶液；(3)二酶水解在步驟(2)中所得的多肽溶液中加入肌動蛋白酶，調節溫度45飛5°C， pH3. 5 7，反應時間為3(T240min，然後升溫至85 90°C，保持15 20min，滅酶，獲得低芳香族胺基酸肽和游離胺基酸；(4)離心將步驟(3)中所得的酶解液進行離心，採用高速離心機，離心速度 2000 4500rpm,離心時間5 30min,獲得酶解離心液；(5)一級膜技術將步驟(4)中所得的酶解離心液進行微濾，除去分子量較大的物質， 獲得澄清的多肽濾液；(6)二級膜技術在步驟(5)中所得的多肽濾液中進一步採用納米過濾，將低聚肽與芳香族胺基酸、游離胺基酸、鹽分離出同時起到濃縮的作用，獲得高F值的葵花低聚肽。
2.根據權利要求I所述的高F值葵花低聚肽的製備方法，其特徵在於，所述步驟(I)中酶解底物體系調配至質量比為廣20%。
3.根據權利要求I所述的高F值葵花低聚肽的製備方法，其特徵在於，所述步驟(2)中採用的鹼性蛋白酶是指通過枯草桿菌發酵提取或動物胰臟提取而得的鹼性蛋白酶，其添加量是底物質量的O. f 1%。
4.根據權利要求I所述的高F值葵花低聚肽的製備方法，其特徵在於，所述步驟(5)中微濾採用的濾膜的孔徑範圍是O. Γ10微米。
5.根據權利要求I所述的高F值葵花低聚肽的製備方法，其特徵在於，所述步驟(6)中納米過濾採用的濾膜是NF-1014S、NF-1015S或NF-1016S，截留分子量300 2000，操作壓差 O. 5 2. OMPa0
全文摘要
本發明公開了一種高F值葵花低聚肽的製備方法，該方法是以葵花粕蛋白為原料，採用多酶法聯合水解技術酶解，將葵花濃縮蛋白水解成以芳香族胺基酸為端基的多肽，然後用第二種酶水解多肽成芳香族胺基酸、游離胺基酸和低聚肽，進而採用微濾和納濾二級膜技術進行脫鹽以及除去游離胺基酸和芳香族胺基酸，提高F值的比例，最後經脫鹽、濃縮、冷凍乾燥獲得高F值的葵花低聚肽。本發明具有以下技術效果(1)反應條件溫和、獲得的產品活性高；(2)製備方法清潔環保，無汙染，符合國家清潔生產的相關政策；(3)製得的產品具有顯著的生理功效，能充分適用於保健品行業。
文檔編號C07K1/34GK102618607SQ20111044635
公開日2012年8月1日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者李春榮, 詹耀才, 鍾細娥, 高展炬 申請人:廣東省食品工業研究所