一種無花果粗多糖的製備及純化方法與用途

2023-05-04 12:40:06 2

一種無花果粗多糖的製備及純化方法與用途
【專利摘要】本發明是一種無花果粗多糖的製備方法，其步驟如下：取無花果乾若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾後殘渣用70%乙醇回流去小分子雜質；然後取殘渣，作為無花果多糖的提取原料；取殘渣，用水作為溶劑在微波條件下提取後，抽濾，取濾液用旋轉蒸發濃縮至100Ml，加95%乙醇後靜置24h，離心後取沉澱，沉澱用Sevage法除去蛋白後，冷凍乾燥，即得無花果粗多糖；提取時，殘渣和水的料液比1：20-23；微波功率為550W，提取時間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。本發明還公開了無花果粗多糖的純化方法及用途。
【專利說明】一種無花果粗多糖的製備及純化方法與用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種多糖的製備方法，特別是一種無花果粗多糖的製備方法；本發明還涉及前述方法製得的無花果粗多糖的純化方法；本發明還涉及無花果粗多糖或者無花果多糖純品在製備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的用途。
【背景技術】
[0002]無花果Ficus carica.L隸屬桑科榕屬，可食用部分是它的乾燥花託，不僅味道甜美，還具有廣泛的營養價值和藥用價值。據報導，無花果可用於健胃清腸、消腫解毒，並可抑制腫瘤、提高機體免疫力。無花果富含多糖，多糖具有多種生理活性，如抗腫瘤、免疫調節、抗菌、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶等。關於抗腫瘤等生物活性均可從文獻中找到實驗依據，但其抑制葡萄糖苷酶的作用卻沒有人研究，α -葡萄糖苷酶能催化α -1, 4-糖苷鍵水解，是小腸內麥芽糖、蔗糖等寡糖水解的酶，抑制α-葡萄糖苷酶的活性，可使葡萄糖的生成及吸收減緩，降低餐後血糖峰值。故α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類新型的二型糖尿病用藥，可用於餐後血糖調節，保持患者的餐後血糖平穩。

【發明內容】

[0003]本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種方法簡單合理、操作方便、得率高的無花果粗多糖的製備方法。
[0004]本發明所要解決的 另一技術問題是提供了上述方法製備的無花果粗多糖的純化方法。
[0005]本發明所述方法製得的無花果粗多糖或者所述的純化方法純化得到的無花果多糖純品可以用於製備α-葡萄糖苷酶抑制劑。
[0006]本發明所要解決的技術問題是通過以下的技術方案來實現的。本發明是一種無花果粗多糖的製備方法，其特點是，其步驟如下:取無花果乾若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾後殘渣用70%乙醇回流去小分子雜質；然後取殘渣，作為無花果多糖的提取原料；取殘渣，用水作為溶劑在微波條件下提取後，抽濾，取濾液用旋轉蒸發濃縮至100Μ1，加95%乙醇後靜置24h,離心後取沉澱,沉澱用Sevage法除去蛋白後,冷凍乾燥，即得無花果粗多糖；提取時，殘渣和水的料液比1:20-23 ;微波功率為550W，提取時間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。
[0007]本發明所述的無花果粗多糖的製備方法中，最優選的技術特徵是:提取時，殘渣和水的料液比1:22.45 ;醇沉用乙醇量為提取液體積的3.55倍。
[0008]本發明還公開了一種如以上技術方案所述方法製得的無花果粗多糖的純化方法，其特點是，其步驟如下:
(I)離子交換纖維素DEAE-52經蒸餾水充分溶脹後，用0.5 M的NaOH和0.5 M的HCl交替處理數次後再用蒸餾水反覆洗滌，直至其PH至6進行裝柱，採用2.0cm X 30 cm常壓砂芯玻璃柱，裝好的離子柱再用蒸餾水進行平衡24小時待用；(2)取無花果粗多糖以蒸餾水配製成質量濃度為1%的溶液；然後將無花果多糖溶液上已經平衡好的DEAE-52離子交換柱，上樣體積為5 mL，用O-1M NaCl 200 mL以50 mL/h的流速過柱，用自動部分收集器以每管5mL的量進行收集，以苯酚一硫酸比色法測定每管的總糖濃度作洗脫曲線，根據洗脫曲線收集相同組份，於40°C減壓濃縮並冷凍乾燥得到無花果多糖；
(3)Sephacryl S-300HR經蒸餾水輕柔洗滌數次、減壓脫氣後裝柱，採用1.6 cm X 80cm柱，以蒸餾水平衡；將步驟(2)得到的無花果多糖溶於去離子水，配製濃度為15mg/mL的多糖溶液，上已經平衡好的Sephacryl S-300HR分子篩柱，上樣量為2mL，用去離子水以6mL/h的流速進行洗脫；用分部收集器進行收集，用苯酚一硫酸比色法測每管的總糖濃度，再根據洗脫曲線合併相同組份，去鹽透析後，40°C減壓濃縮後冷凍乾燥；如上操作反覆進行純化若干次冷凍乾燥得到無花果多糖純品。
[0009]以下對本發明方法進行更為詳細的描述。
[0010]1.1材料與試劑
無花果乾果購於連雲港市海連路市場；α-葡萄糖苷酶(批號:EC3.2.1.20);4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG，批號:026K1516);阿卡波糖(批號:lot 16869);以上均購自Sigma公司；4_硝基苯酚(PNP，上海晶純試劑有限公司)；硫酸、葡萄糖、苯酚、乙醇等均為國產分析純。
[0011]2 方法
2.1無花果粗多糖(CFCP)的製備及含量測定
2.1.1標準曲線
採用苯酚-硫酸法以葡萄糖為標準品，在490nm比色測定多糖提取液的吸光度，以吸光度(A)與溶液多糖質量濃度(c)進行線性回歸，得回歸方程為:A=14.568c-0.0082,r=0.9972。結果表明，葡萄糖在7.5-52.5 μ g/mL與吸光度線性關係良好。
[0012]2.1.2 CFCP 提取
由於經典的水提取方法耗時，得率低等缺陷，在無花果多糖粗提過程中，採用微波法提取，為得到最大的多糖得率，採用了響應面法進行提取各因素的優化。採用了對無花果多糖得率影響較大的四個因素，即微波功率、微波時間、料液比和醇沉時加醇的體積倍數。
[0013]提取前預處理:取無花果乾若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾後殘渣用70%乙醇回流去小分子雜質，然後取殘渣，作為無花果多糖的提取原料。取殘渣用水作為溶劑在微波條件下提取後，抽濾，取濾液用旋轉蒸發濃縮至IOOmL左右，加若干倍體積95%乙醇後靜置24h，離心後取沉澱，沉澱用Sevage法除去蛋白後，冷凍乾燥，即得無花果粗多糖CFCP。並配製成一定濃度的CFCP溶液，待用。
[0014]表I無花果多糖提取響應面分析因素與水平
【權利要求】
1.一種無花果粗多糖的製備方法，其特徵在於，其步驟如下:取無花果乾若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾後殘渣用70%乙醇回流去小分子雜質；然後取殘渣，作為無花果多糖的提取原料；取殘渣，用水作為溶劑在微波條件下提取後，抽濾，取濾液用旋轉蒸發濃縮至IOOMIJp 95%乙醇後靜置24h，離心後取沉澱，沉澱用Sevage法除去蛋白後，冷凍乾燥，即得無花果粗多糖；提取時，殘渣和水的料液比1:20-23 ;微波功率為550W，提取時間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。
2.根據權利要求1所述的無花果粗多糖的製備方法，其特徵在於:提取時，殘渣和水的料液比1:22.45 ;醇沉用乙醇量為提取液體積的3.55倍。
3.—種如權利要求1或2所述方法製得的無花果粗多糖的純化方法，其特徵在於，其步驟如下: (1)離子交換纖維素DEAE-52經蒸餾水充分溶脹後，用0.5 M的NaOH和0.5 M的HCl交替處理數次後再用蒸餾水反覆洗滌，直至其PH至6進行裝柱，採用2.0cm X 30 cm常壓砂芯玻璃柱，裝好的離子柱再用蒸餾水進行平衡24小時待用； (2)取無花果粗多糖以蒸餾水配製成質量濃度為1%的溶液；然後將無花果多糖溶液上已經平衡好的DEAE-52離子交換柱，上樣體積為5 mL，用0_1M NaCl 200 mL以50 mL/h的流速過柱，用自動部分收集器以每管5mL的量進行收集，以苯酚一硫酸比色法測定每管的總糖濃度作洗脫曲線，根據洗脫曲線收集相同組份，於40°C減壓濃縮並冷凍乾燥得到無花果多糖； (3)Sephacryl S-300HR經蒸餾水輕柔洗滌數次、減壓脫氣後裝柱，採用1.6 cm X 80cm柱，以蒸餾水平衡；將步驟(2)得到的無花果多糖溶於去離子水，配製濃度為15mg/mL的多糖溶液，上已經平衡好的Shacryl S-300HR分子篩柱，上樣量為2mL，用去離子水以6mL/h的流速進行洗脫；用分部收集器進行收集，用苯酚一硫酸比色法測每管的總糖濃度，再根據洗脫曲線合併相同組份，去鹽透析後，40°C減壓濃縮後冷凍乾燥；如上操作反覆進行純化若干次冷凍乾燥得到無花果多糖純品。
4.一種如權利要求1或2所述方法製得的無花果粗多糖或者如權利要求3所述的純化方法純化得到的無花果多糖純品 在製備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的用途。
【文檔編號】C08B37/00GK103435714SQ201310408513
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月10日 優先權日:2013年9月10日
【發明者】李盈蕾, 陳建華, 孫吉佑, 詹永成, 宋曉凱 申請人:淮海工學院