鯊魚軟骨骨髓萃取組成物的製作方法

2023-05-20 06:47:11

專利名稱：鯊魚軟骨骨髓萃取組成物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種鯊魚軟骨萃取物，特別涉及一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。
背景技術：
1983年，Lee和Langer 二位博士於科學期刊上發表鯊魚軟骨含有抑制癌細胞增生的新血管增生抑制劑(angiogenesis inhibitor)後，全世界隨即湧起一陣堇魚軟骨熱潮。Lee和Langer是以2M的胍(guanidine)萃取鯊魚鰭(fm)的可溶成分，使之與動物肺瘤直接接觸，可以有效抑制腫瘤的新血管增生，通過切斷腫瘤細胞的營養成分供應，從而間接消滅癌細胞。類似描述鯊魚軟骨抗癌功效的報告接踵而出有以鯊魚軟骨萃取的蛋白質，於血管注射以抑制肺瘤細胞的增生；掃除活性氧分子(Reactive oxygen species)成為抗氧化劑；植入老鼠而抑制肺瘤細胞；抑制發炎反應；口服也可抑制新血管增生。 一時間，鯊魚軟骨搖身一變，仿佛成了治療癌症的新星，世界各地無數廠商、學校、醫院全力研究。雖然有對口服後的功效存疑的意見，美國NIH仍於1987年開始進行人體試驗，目前已進行到phase III的測試。
而現有的對於鯊魚軟骨的處理， 一般僅將鯊魚軟骨打碎或研磨至粉狀，因此所獲取的產品不僅於氣味上殘留有濃烈的魚腥味，於顏色則呈現對消費者不具吸引力的灰色或黑色，且無法萃取出其中的有效成分。
為解決上述問題，本發明的發明人已提出一解決方案。首先，利用壓碎裂、清洗、漂除雜質、去除腥味以及加熱殺菌五步驟，來達到將豈魚軟骨處理從而獲得無腥味且色澤純白透明的萃取物的目的。此技術內容已公開於發明人的臺灣發明專利公告號第467731號的"一種鯊魚軟骨的製造方法"專利案中。
隨後，發明人以上述方法為基礎，再提出一發明專利申請案(臺灣發明專利申請號第97117281號)，其中公開了利用酵素溶解、水解、均質化、沉澱以及分離等步驟來處理鯊魚軟骨骨髓的方法，從而獲得高純度的鯊魚軟骨骨髓萃取物，而本發明即是利用上述方法所獲得的最終的新穎萃取物。

發明內容
本發明的主要目的在於提供一種以硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)為主要活性成分的莖魚軟骨骨髓萃取組成物，具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促進血液循環等功效。
為達上述目的，本發明提供一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其分子量介於21至100千道耳頓(KiloDaltons)，且含有重量百分比為50-60wt。/。的硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)。
上述組成物優選包括以下成分
闢b酸軟骨素，其重量百分比為56.3wt%;
總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;
灰份，其重量百分比為11.8wt%;
水分，其重量百分比為7.7wt%;以及
鈉，其重量百分比為0.2wt%。
本發明的有益效果是口服鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可明顯抑制癌細胞增生和轉移，延長注射癌細胞老鼠的壽命；對於抑制胃酸過度分泌以及保護消化系統功能方面的測試也有顯著的功效；還具有促進血液循壞的功效。


圖1為本發明的豈魚軟骨骨髓萃取組成物的SDS/PAGE分析圖；圖2為實驗組與對照組老鼠死亡累積數目與時間的線性關係圖；圖3為實驗後實驗組與對照組的存活老鼠的紅血球與白血球含量比較圖；圖4A與4B為實驗組與對照組老鼠的血液生化數值比較圖；圖5為實驗組與對照組老鼠的解剖相片圖；圖6A為豬胃液體外實驗中pH值與時間的關係圖；圖6B為豬胃液中和實驗中pH值與時間的關係圖；圖7A為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的微血管照相圖；圖7B為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物後的微血管照相圖；圖8A為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的頭皮微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果；圖8B為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物後的頭皮微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果；
圖9A為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的生殖器微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果；
圖9B為服用本發明的豈魚軟骨骨髓萃取物後的生殖器微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果；
圖10A為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的乳房微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果；
圖10B為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取物後的乳房微血管的超音波都卜勒儀血流速測試結果。
具體實施例方式
以下結合附圖，對本發明上述的和另外的技術特徵和優點作更詳細的說明。
本發明提供一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其分子量介於21至100千道耳頓(Kilo Daltons),含有重量百分比為50-60wt%的硫酸軟骨素(ChondroitinSulfate),且該組成物每一百克所含的熱量為300至350千卡路裡。
上述組成物中，硫酸軟骨素的重量百分比優選為56.3wt%,且該組成物包括如下所列的其它成分
總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;
灰份，其重量百分比為11.8wt%;
水分，其重量百分比為7.7wt%;以及
鈉，其重量百分比為0.2wt%。
此外，上述組成物是白色細緻粉末，且其每一百克所含的熱量為323千卡路裡。
以下是以實施例驗證本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物的功效。實施例1
本實驗以鯊魚軟骨萃取物(SDS)餵食老鼠，並觀察黑色素皮膚癌(melanoma)在老鼠腹腔的生長情況，用來評估其抗癌作用。其步驟與方法如下所述一、黑色素癌細胞的增生與純化
黑色素癌細胞抹(B16)以含有2.5%胎牛血清(Fetus Bovine Serum)的
5Dulbelcco，s Modified Eagle Medium (DMEM),在37°C ， 5°/。 C02培養箱，培養至 90%的豐度(confluency),以1ml的1:10胰蛋白(trypsin; Gibco)將其消化5 min 後，再取出細胞並計算細胞數目。
二、 老鼠腹腔癌腫瘤的誘發
80隻四周歲的BALB/C老鼠(臺灣大學醫學院動物實驗中心)分成兩組， 對照組餵食正常飼料，實驗組則添加5%鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。二周後，在 老鼠腹腔打入2.5xl(^黑色素癌細胞，14日後開始計算老鼠的死亡只數。死亡老 鼠加以解剖，將肺瘤組織分離後，取出臟器，加以比較、照相。死亡只數超過 半數以後，剩餘的老鼠則以斷頸處理，並抽血作血球分析及血液生化分析。老 鼠血液加入肝素(Heparin)之後，進行血球分析及血液生化分析。血球以Sysmex SE卯OO cell counter (Japan)分析，血液生化以Hitachi 7150分析。結果以 Kaleidagraph作分4斤、統計、畫圖。
三、 結果分析
1、 鯊魚軟骨可溶性成分SDS PAGE分析
如圖l所示，鯊魚軟骨經過均質後，離心取上層液進行SDS PAGE分析， 其主要成分分布於21-100 kDalton。
2、 攝食鯊魚軟骨骨髓萃取組成物明顯延長腹水癌老鼠壽命。 四十隻實驗組老鼠餵食添加有5%豈魚軟骨骨髓萃取組成物的飼料，兩組對
照組老鼠(各四十隻)餵食一般飼料，餵食2周後，在腹腔施打2.5x106melanoma cells。經2-3周後，由於melanoma在腹腔內部大量增生，形成腫瘤組織，轉移 並擠壓內臟，造成老鼠臟器萎縮、變黑最後窒息死亡。記錄每日死亡只數，統 計之後畫圖比較。如圖2所示，以到達半數死亡所需日數為準，攝食5%鯊魚軟 骨骨髓萃取組成物的實驗組為19.5日，對照組平均為17.8日，顯示有明顯的差 異。注射melanoma 24日之後，各組死亡數目均超過半數，存活的老鼠則以斷 頸處理，並抽血作血球分析及血液生化分析。在血球分析方面，如圖3所示， 白血球和紅iu求含量並無顯著差異。血液生化方面，如圖4A所示，血紅素(HGB)、 血容比(HCT)、紅血球平均體積(MCV)、平均血球血紅素量(MCH)以及紅血球 血紅素平均濃度(MCHC)等值並無顯著差異；然而，如圖4B所示，穀氨酸草乙 酸轉氨酶/天冬氨酸轉氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase/aspartate aminotransferase、 GOT /AST)以及穀氨酸丙酮酸轉氨酶/丙氨酸轉氨酶(glutamic pyruvic transaminase/alanine aminotransferase、 GPT/ALT)的j直貝'J均有顯著差異。
6在人體血液生化分析中，GOT/AST及GPT/ALT同時增加可判定肝臟功能受損。 由於本品是老鼠的正常範圍無法得知，因此難以GOT/AST及GPT/ALT的差異 來判定肝臟是否受損，以及其相對受損程度。
3、 死亡老鼠肺瘤組織及臟器的比較。
對於死亡的老鼠，經解剖之後，比較其肺瘤組織及臟器(心臟、腎臟、脾 髒、肝臟)大小及色澤，我們無法以肉眼區別腫瘤組織及臟器大小及色澤。
4、 皮下注射melanoma的比較。
餵食鯊魚軟骨的實驗組老鼠在注射腫瘤細胞實驗中，有較長的存活，由於 無法以解剖之後比較其腫瘤組織大小，我們決定以腹部皮下注射肺瘤細胞比較 其腫瘤組織增生的差異。老鼠餵食含有5%鯊魚軟骨骨髓萃取組成物飼料及正常 飼料，經12日後，在腹部皮下施打105 melanoma cells,經過二周後以斷頸處理， 解剖、照相、並比較腫瘤的大小。如圖5所示，餵食正常銅料老鼠的解剖結果 可以發現，肺瘤組織除明顯較大以外，還有轉移進入腹腔的情況發生。相比而 言，實驗組中的癌腫瘤明顯較小，且無明顯轉移現象。因此可知，攝食本發明 的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可抑制皮下黑色素癌細胞增長效果並抑制腫瘤轉 移。
綜合上述實驗結果，口服鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可明顯抑制癌細胞增生 和轉移，延長注射癌細胞老鼠的壽命。雖然大部份的文獻是以注射或是手術的 技術將鯊魚軟骨萃取物和腫瘤組織直接接觸以彰顯其作為新血管形成抑制劑 (angiogenesis inhibitor)的效果，以攝食的方式，經過腸胃道消化吸收，仍然可以 測出其抗癌的效杲。
實施例2
以離乳三個月藍瑞斯和藍嶼迷你豬混種豬為實驗動物。如圖6A所示，於空 腹時抽取胃液所測得的pH值為2.2;而將所抽取的胃液在體外與篁魚軟骨骨髓 萃取物混合後，其pH值明顯上升至3.4。此外，如圖6B所示，於活體實驗中以 綠茶灌入豬胃中，每隔20分鐘抽取胃液，胃液的pH值有下降趨勢。經灌入液 狀均質的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物後，胃液pH值明顯上升，畫魚軟骨有明顯延 遲胃液pH值因喝綠茶而降低的作用。
因此可見，鯊魚軟骨骨髓萃取組成物對胃液有中和作用，對於抑制胃酸過 度分泌以及保護消化系統功能方面的測試也有顯著的功效。
實施例將上述組成物以乳劑塗抹於表皮層開始作用時，會促使人體微細血管擴張 開啟生物電流水通道，因而增加血液流速並提升循環代謝，使得人體末梢表皮
層的溫度升高以形成熱效應。由於人體中水分體液約佔總體積70%,因此當表 層熱效應產生時，水分及體液會出擾動現象，水分子因動能增加互相撞擊、共 振而出現深層熱效應。
理論上通常人體必須經由不停的運動方能產生此種深層熱效應，而使動能 轉變成熱能，並消耗體脂肪代謝為糖類運用而排出體外。通過分子共振以及深 層熱效應，並輔以不同方式以及不同物質，對於解決人體因血液循環不良所產 生的功能性障礙，都將會產生具體的成效。
圖7A與7B所示為微血管的照相圖，由圖可看出對於微血管血流流速測試 的結果;其中，圖7A與7B分別為服用本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物前後 的照片。比較兩圖可以發現，服用本發明的組成物後，微血管的血液流速可增 力口至三倍。
此外，圖8A與8B則為服用上述組成物前後對頭皮微血管所進行的超音波 都卜勒4義血流速測試，由圖可知，J良用上述組成物後，孩史血管血流流速有顯著 的提升。
率，以解除因血液供輸失衡引起頭部不適，強化頭皮組織避免汙染源傷害，延 緩老化、退化的掉發現象，並得以供應毛嚢充足營養素培育新發。因此，本發 明組成物在復發方面具有顯著效能。
圖9A與9B所示為服用上述組成物前後對生殖器微血管所進行的超音波多 普勒4義血流速測試，由圖可知，服用上述組成物後，該處4敫血管的血流流速有 顯著的提升。
由此結果可知，通過服用本發明的組成物，得以開啟生物電流開關以恢復 神經纖維叢訊號暢通，從而排除障礙。此外，還可增加人體基礎溫度提升新陳 代謝率，通過加快微血管的血液流速來幫助男性生殖器官迅速充血，使女性生 殖器官富有彈性以及增加潤滑液的提供。總而言之，可排除生殖泌尿系統以及 代謝系統的功能性障礙，並可抗衰老、退化。
圖IOA與10B為服用上述組成物前後對乳房微血管所進行的超音波都卜勒 儀血流速測試。如圖所示，服用上述組成物後，該處微血管的血流流速有顯著 的提升。由此結果可知，通過服用本發明的組成物，可以增加血液循環速度，由此 激發組織分子熱效應提升新陳代謝率，可產生類運動效果以改善發育不良現象。 此類運動的效果可增加胸大肌以刺激激素產生，從而協助乳房的第二次發育運 動，使胸部更為挺拔。
綜合上述實驗結果，本發明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物有促進血液循環的 功效。
綜上所述，根據上文所揭示的內容，本發明確實可達到發明的預期目的，
提供一種以硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)為主要活性成分，並具有抗黑色素 瘤、中和胃酸以及促進血液循環等功效的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。
以上說明對本發明而言只是說明性的，而非限制性的，本領域普通技術人 員理解，在不脫離所附權利要求所限定的精神和範圍的情況下，可做出許多修 改，變化，或等效，但都將落入本發明的保護範圍內。
權利要求
1、一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特徵在於其分子量介於21至100千道耳頓，且含有重量百分比為50-60wt％的硫酸軟骨素。
2、 如權利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特徵在於所述組成物每一百克所含的熱量是為300至350千卡路裡。
3、 如權利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特徵在於所述硫酸軟骨素的重量百分比為56.3wt°/。，且該組成物還包括以下成分總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;灰份，其重量百分比為11.8wt%;水分，其重量百分比為7.7wt%;以及鈉，其重量百分比為0.2wt%。
4、 如權利要求3所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特徵在於所述組成物每一百克所含的熱量是為323千卡路裡。
5、 如權利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特徵在於所述組成物為白色細緻粉末。
6、 權利要求l-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在製備抑制癌細胞增生和轉移的藥物中的應用。
7、 權利要求1-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在製備抑制胃酸過度分泌、保護消化系統功能的藥物中的應用。
8、 權利要求1-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在製備促進血液循環的藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其主要活性成分是重量百分比為50-60wt％的硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)，該組成物的分子量介於21至100千道耳頓(Kilo Daltons)，而每一百克組成物所含的熱量介於300至350千卡路裡。該鯊魚軟骨骨髓萃取組成物具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促進血液循環等作用。
文檔編號A61K35/56GK101669971SQ200810212348
公開日2010年3月17日 申請日期2008年9月10日 優先權日2008年9月10日
發明者陳俊源 申請人:陳俊源