從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法
2023-04-29 01:27:01 3
專利名稱：從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法
技術領域：
本發明涉及一種從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法。
為實現上述目的，本發明採取以下設計方案一種從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法，其特徵在於它包括以下步驟三七生粉以甲醇浸提，得甲醇提取液和殘渣，將甲醇提取液濃縮乾燥，獲得甲醇提取物，甲醇提取物加水，並以石油醚萃取，取水相，以正丁醇萃取，得正丁醇相，蒸乾後，得三七皂甙粗提取物，該皂甙粗提取物分離得三七皂甙R1和人參皂甙Re；甲醇提取後三七生粉殘渣以水提取，得到水提取物，水提取物以正丁醇萃取，將水層冷凍乾燥得三七素粗提取物，三七素粗提取物進一步分離純化得三七。
圖3為發明中利用HSCCC第二步分離得到的兩種皂甙的薄層色譜4A、圖4B為第二步HSCCC分離得到的一種皂甙液相色譜圖(203nm)(16管、15管)圖5A、圖5B為第二步HSCCC分離得到的另一種皂甙色譜圖(203nm)(17管、18管)
二、利用高速逆流色譜(HSCCC)第一步分離得到三七皂甙R1、人參皂甙Re的混合物。
1、採用氯仿、甲醇、丙醇、水體系，其中氯仿∶甲醇∶丙醇∶水＝6∶6∶1∶4(體積比)取三七皂甙粗提物，其上樣量200mg，柱體積200ml，主機轉數800rpm，上相作固定相，下相作流動相，流動相流速2ml/min。
2、操作步驟按各溶劑體積比配製溶劑體系，在分液漏鬥中靜置分層，分出上下相，上相作固定相、下相作流動相，使逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然後使其主機轉動，再將流動相泵入柱內，由進樣閥進樣。(該分離採用北京市新技術應用研究所研製的逆流色譜儀完成。)由於三七皂甙R1及人參皂甙Re沒有紫外吸收，所以無法使用高速逆流色譜儀(HSCCC)所配的常規紫外檢測器檢測出峰及分離情況。因此，本實驗中採用自動集分收集器，設定時間，分段收集高速逆流色譜儀上樣後洗脫下的各級分。然後以薄層色譜檢測分析各吸分管，採用與藥典相同的展開條件，通過與藥典中提供譜圖比較。收集含有三七皂甙R1和人參皂甙Re的級分(25-38管)其薄層展開譜圖如
圖1所示。
通過以上分離，可得三七皂甙R1及人參皂甙Re混合物13mg。其高效液相色譜分析譜見圖2所示。
三、用高速逆流色譜儀將上述分離得到的混合物進行進一步分離(第二步分離)1、採用乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3體積比，上樣量為第一步多次分離所得產物共40mg，柱體積200ml，主機轉數800rpm。上相作固定相，下相作流動相，流動相流速2ml/min。
2、操作步驟同上，以集分收集器收集，洗脫的各級分經薄層色譜檢測分析並與藥典中提供譜圖比較，保留含有三七皂甙R1與人參皂甙Re的級分(15-18)管，其薄層展開圖見圖3所示。
3、經高效液相色譜檢測分析第15至16管為一種皂甙(24mg)見圖4A、圖4B，第17-18管為另一皂甙(13mg)見圖5A、圖5B，且兩者完全分離。
實施例2(本實施例系從三七生粉甲醇提取後的剩餘殘渣中提取三七素的提取步驟三七生粉經甲醇提取後的殘渣，用水提取，所得水提取物，經正丁醇萃取，水相經冷凍乾燥即可得三七素粗提物，100g三七生粉可得三七素粗提物約10g，經胺基酸分析其中主要含三七素和精氨酸等幾種胺基酸成分。三七素粗提取物以Sephadex LH-20的凝膠色譜柱分離，以柱填料的1/10的比例上樣，去離子水洗脫，用餾分收集器收集各級分，分別點樣，用茚三酮顯色法分析，將能與茚三酮反應，呈顯紫紅色的級分，再分別用紙色譜點樣，茚三酮顯色分析。合併含三七素的級分經冷凍乾燥得中間產物。該產物經過CMSephadex C-25再次層析分離，採用同樣的方法分析，收集目標級分，冷凍乾燥。必要時，可進行重複的CM-Sephadex C25柱分離或重結晶，即可得到三七素純品。
三七素的分析方法1、胺基酸分析儀自動分析法層析柱4.6×150mm陽離子交換樹脂緩衝液流速0.425ml/min柱溫50℃，進樣量50μl，分析時間50min。
2、紙層析一茚三酮顯色法支撐物層析濾紙展開劑正丁醇-乙酸-水-無水乙醇(4∶1∶2∶1)顯色法噴霧1％茚三酮水溶液後，加熱3分鐘即顯紫紅色，此法為胺基酸的特徵顯色方法，三七素的位移值Rf＝0.1。
本發明優點本發明提供的方法中可分別得到純化的產品，且方法簡便，所得純品經過認定可作為質量控制的標準品或參考物，很有實用價值。
權利要求
1.一種從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法，其特徵在於它包括以下步驟三七生粉以甲醇浸提，得甲醇提取液和殘渣，將甲醇提取液濃縮乾燥，獲得甲醇提取物，甲醇提取物加水，並以石油醚萃取，取水相，以正丁醇萃取，得正丁醇相，蒸乾後，得三七皂甙粗提取物，該皂甙粗提取物分離得三七皂甙R1和人參皂甙Re；甲醇提取後三七生粉殘渣以水提取，得到水提取物，水提取物以正丁醇萃取，將水層冷凍乾燥得三七素粗提取物，三七素粗提取物進一步分離純化得三七。
2.根據權利要求1所述的從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法，其特徵在於所述的粗三七皂甙分離是採用高速逆流色譜方法，分別收集各分離級分，檢測分析，得三七皂甙R1和人參皂甙Re的混合物，本分離溶劑體系為氯仿、甲醇、丙醇、水；應用高速逆流色譜進一步分離上述混合物、分別得到三七皂甙R1和人參皂甙Re，其所用溶劑體組成為乙酸乙酯、正丁醇、水。
3.根據權利要求2所述的從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re、三七素的方法，其特徵在於所述的氯仿、甲醇、丙醇、水體系中各體積比為6∶6∶1∶4，上相做固定相、下相做流動相；所述的進一步分離用的溶劑體系中體積比為乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3。
4.根據權利要求1所述的從三七生粉提取分離三七皂甙R1、人參皂甙Re三七素方法，其特徵在於所述的三七素粗提物分離純化方法為將三七素粗提物以凝膠色譜柱Sephadex Lh-20分離，用去離子水洗脫，收集能與茚三酮發生顯色反應組分，分別點樣，用紙層析-茚三酮顯色法分析；合併含三七素組分，經冷凍乾燥得中間產物，產物再次以CM SephadexC-25層析分離。
全文摘要
一種從三七生粉提取分離三七皂甙R
文檔編號C07C235/80GK1414009SQ0113669
公開日2003年4月30日 申請日期2001年10月26日 優先權日2001年10月26日
發明者梁瑞安, 鄺志威, 任貴興, 魏英偉, 劉子芸, 楊成安, 田宇, 曹學麗, 張天佑, 賈立軍 申請人:香港生物科技研究院