納米分散體的製作方法

2023-05-13 23:47:51 2

專利名稱：納米分散體的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種紫杉烷衍生物的『納米分散體』和它的製備方法。
背景技術：
有許多藥物在水溶液中難溶或不溶。這些藥物面臨的挑戰是具有較差的口服藥物 生物利用度或將它們配製為特別是通過靜脈途徑的藥物輸送。如果藥物通過靜脈給藥，顆 粒必須足夠小以安全地通過毛細管而不會引起栓塞。為了靜脈給藥，以溶液，乳劑，脂質體， 納米分散體等形式進行給藥被認為是安全的。另一個應該滿足的要求是，當配製特別是疏 水性藥物的藥物輸送系統時，配方應該是物理穩定的而且在室溫儲存需要的時間內基本沒 有藥物的聚合或結晶或配方外觀的變化。難溶藥物的一個例子包括紫杉烷衍生物，對於它們的抗癌活性是已知的。紫杉烷 衍生物或紫杉烷是主要來源於Western Yew, Taxus brevifolia的樹皮的複雜的二萜類化 合物的天然產物並基本上具有紫杉烷結構。已經使用紫杉烷類製備各種化療藥物。目前， 兩種紫杉烷衍生物紫杉醇和多烯紫杉醇作為有效的抗瘤劑可商業獲得。紫杉烷衍生物在水和大多數藥物可接受的溶劑中顯示了非常差的溶解性，從而限 制了它們對病人的給藥。由於這一不利的固有特性，紫杉酚注射劑一商業上的紫杉醇注射 劑被配製為在Crem0ph0rTMEL(聚氧乙烯蓖麻油)和無水乙醇中的非水溶液。然而，大量使 用的像Crem0phorTMEL的增溶劑導致例如嚴重的或致命的過敏和高血壓反應，緩慢心律失 常，貧血，嗜中性白血球減少症和/或外周神經病變的各種不良反應。因此，服用紫杉醇的 所有病人術前服用類固醇，抗組胺類和H2受體拮抗劑，並且隨後紫杉醇僅僅在至少3小時 或更長的時間內被非常緩慢地注入。考慮到與紫杉酚配方有關的這些問題，研究人員已經嘗試製備不使用Cremophor EL的紫杉酚配方。美國第6537570號專利描述了基本不溶於水的例如紫杉醇的藥理活性劑的組合 物，其中所述藥理活性劑以塗覆有蛋白質(其作為穩定劑)的懸浮粒子的形式存在。特別 地，蛋白質和生理活性劑在沒有任何的傳統表面活性劑且同樣沒有任何的將粒子聚合的核 心材料的生物相容性分散介質中受到高剪切力。該方法得到的粒子的直徑約小於1微米。 根據這一方法產生的特定系統可以被轉化為包括塗覆有蛋白質的水不溶性藥物的納米粒 子的再分散性乾燥粉末，並且游離蛋白質與藥理劑分子鍵合。美國第6017948號專利涉及一種組合物，所述組合物包括以藥物可接受的，水混 溶性的，非水溶劑(像N-甲基吡咯酮)的紫杉醇溶液形式的紫杉醇並且還包括藥物可接受 的增溶劑(例如甘油醋酸酯)，並規定聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)被排除在所述組合物 以外。在一個優選實施例中，使用大量溶劑，例如4000mg的NMP (例1)或2000mg的NMP和 2000mg的乙醇的混合物(例2)在適度攪拌下溶解IOmg的紫杉醇。如果治療有效量的藥物 通過這類組合物進行輸送，它將在人體內輸入過多量的乙醇，非水溶劑或增溶劑。美國第6046230號專利涉及一種穩定的注射劑配方，所述配方含有紫杉醇和兩種增溶劑一氧乙烯山梨醇油酸酯(oxyethylene sorbitol oleate)和(氧乙烯乙二醇)15_2。 脂肪酸單酯以及例如聚乙烯吡咯酮和聚乙二醇的其它成分。用於配方中的主要增溶劑聚 乙氧基山梨醇油酸聚酯(polyethoxylated sorbitol oleic polyester)是來源於棕櫚油 的油酸的環氧乙烷加成產物，其具有在低於10°C的溫度下凝固的固有特性，這使得它單獨 使用時不適合於紫杉醇的溶解。然而，當與輔助增溶劑聚乙二醇單脂肪酸酯混合時，這兩種 增溶劑一起顯示了在水中和在無水乙醇中的良好的溶解性，並且它們甚至在低溫時仍存在 於液相中。因此，這兩種增溶劑必須一起使用。此外，滿足所期望的特性的這兩種增溶劑的 HLB值應當高達15且不低於13，這是一個基本標準。獲得的配方是一種溶液。PCT第WO 2006/133510號申請公開了一種注射給藥的液體藥物配方，所述配方包 括多烯紫杉醇或其藥物可接受的鹽；一種或多種乙二醇和藥物可接受的非水溶劑系統，其 中所述配方具有2. 5至7. 0範圍內的pH值讀數。這一發明的實施例涉及非常高用量的表面 活性劑(大約25% ν/ν的聚山梨醇酯80或30% ν/ν的Cremophor)，它反過來可能引起毒 副作用。這一申請沒有公開所述配方的功效和毒性曲線。此外，由』 510申請所公開的所述 配方是非水溶劑系統中的藥物溶液，在與輸液稀釋劑(0. 9%的NaCl或5%的葡萄糖溶液) 混合時配製輸液溶液。新型的藥物輸送系統或納米分散體在此方法不能形成。此外，在用 輸液稀釋劑進行稀釋之後，該配方溶液的穩定性非常短，只有4至6小時，這就限制了它的 給藥效率。US2002/0058060(下文稱為專利申請』 060)公開了含有疏水物質和兩種具有不同 的相變溫度的磷脂的脂質體，並且脂質體形成物質類似膽固醇和親水性聚合物改性酯。改 變所述藥物與磷脂和脂質體形成物質的比例以獲得不同的脂質體配方。此專利申請』 060通 過使用兩種指定類的磷脂進行了配製具有升高的藥物脂質比例的紫杉烷的脂質體的各種 嘗試，使得使用的脂質的總量被減少，因為在人體內過量脂質的注射導致一定程度的毒性。因此，顯然現有技術中與配製紫杉烷組合物有關的主要問題是紫杉烷的疏水性， 這(a)使得它難於配製含有穩定形式的藥物並且在需要的時間內是穩定的基本沒有 任何的藥物聚合或結晶或在配方外觀上沒有變化的組合物，(b)必須使用大量的增溶劑，磷脂和表面活性劑。此外，紫杉醇(Cremophor和乙醇中紫杉醇的商業可獲得的溶液)的毒性研究顯示 了如美國第6753006號專利中公開的7. 5-12. 0mg/kg的低的LD5tl值，這說明以溶液形式給 藥的藥物具有非常低的治療指數並且在甚至中等劑量就可能顯示嚴重的副作用和毒性反 應。因此，需要存在一種紫杉烷衍生物的注射劑配方，所述配方(a)避免使用大量的賦形劑，(b)避免使用 Cremophor，(c)通過新型輸送系統輸送藥物，顯示了升高的LD5tl值，從而減少了與溶液形式的 藥物進行給藥有關的毒副作用，和(d)克服了與藥物的疏水本質有關的藥物限制，並且在給藥和儲存過程中需要的 時間內所述配方穩定並基本沒有藥物聚合或結晶或配方外觀上的變化。我們已經開發了一種納米分散體，所述納米分散體包括具有平均大小小於300nm的分散於包括水混溶性溶劑和水的載體中的納米粒子，所述納米粒子包括紫杉烷衍生物， 聚合物和低量的表面活性劑。本發明提供了一種避免使用Cremophor的配方，其包括使用 量大大減少的添加劑(磷脂)並以納米粒子的形式輸送藥物，從而減少了與藥物給藥有關 的毒性反應和副作用。所觀察到的本發明的配方的LD5tl值是342. 5mg/kg,其大大高於美國第 6753006號專利中公開的市售TAX0L 溶液的7. 5-12. Omg/kg的LD5tl值。此外，本發明的配方 在給藥和儲存所需要的時間內是穩定的而基本沒有藥物的聚合或結晶或配方外觀的變化。發明目的本發明的一個目的是提供一種紫杉烷衍生物的納米分散體，所述納米分散體在注 射途徑給藥之前和過程中所需要的時間內是穩定的。本發明的另一個目的是提供一種納米分散體，所述納米分散體在室溫下儲存超過 4小時沒有聚合跡象或外觀沒有變化。本發明的又一個目的是提供一種紫杉烷衍生物的預濃縮劑，所述預濃縮劑是化學 穩定的並在室溫下儲存至少3個月沒有聚合跡象或外觀沒有變化，並且當用水溶液液體載 體稀釋時提供了穩定的納米分散體。本發明的再一個目的是提供一種具有兩個容器的試劑盒，第一個容器包括水混溶 性溶劑中的紫杉烷衍生物的預濃縮劑，並且第二個容器包括水溶液的液體載體，使得第二 個容器的內含物添加至第一個容器的內含物中時，或與之相反，形成了穩定的納米分散體， 所述納米分散體適合於僅僅使用適度攪拌或振蕩就可以進行靜脈給藥。本發明的再一個目的是提供一種具有多於兩個容器的試劑盒，例如，兩個容器，第 一容器包括凍幹形式的納米分散體，並且第二容器包括水溶液液體載體，使得第二容器的 內含物添加至第一容器的內含物中時，或與之相反，形成了穩定的納米分散體，所述納米分 散體適合於僅僅使用適度攪拌或振蕩就可以進行靜脈給藥。本發明的又一個目的是提供一種治療癌症的方法，所述方法包括將所述納米分散 體組合物給藥給需要的病人。

發明內容
本發明提供了一種納米分散體，所述納米分散體包括具有平均大小小於300nm的 分散於包括水溶性溶劑和水的載體中的納米粒子，所述納米粒子包括一種或多種紫杉烷衍 生物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括由脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物 或它的鹽組成的混合物。本發明還提供了一種溶液，所述溶液包括一種或多種紫杉烷衍生物，聚合物和表 面活性劑，所述表面活性劑包括在水溶性溶劑中的脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或 它的鹽組成的混合物，當用水溶液液體載體稀釋時產生納米分散體。本發明還提供了一種顆粒平均大小小於300nm的納米粒子，所述納米粒子包括紫 杉烷衍生物，表面活性劑，所述表面活性劑包括固醇或它的衍生物或它的鹽和脂肪酸或它 的鹽的混合物以及聚合物。


圖1表示根據例27中詳細描述的研究對照樣品，參考樣品(ABRAXANE )和試驗樣品(本發明的例12a的組合物)在Balb/c雌性裸鼠中植入人類乳腺腫瘤異種移植(MX-I) 的隨著時間(以天計)的腫瘤體積變化的對照說明。圖2表示根據例28中詳細描述的研究對照樣品，參考樣品(ABRAXANE )和試驗樣 品(本發明的例9的組合物)在Athymic雌性裸鼠中植入人類乳腺腫瘤異種移植(MX-I) 的隨著時間(以天計)的腫瘤體積變化的對照說明。圖3表示根據例29中詳細描述的研究對照樣品，試驗樣品(本發明的例9的組合 物)和兩組參考樣品(ABRAXANE 和ONCOT AXEL )在Athymic雌性裸鼠中植入人類結腸腫 瘤異種移植(HT-29)的隨著時間(以天計)的腫瘤體積變化的對照說明。圖4(a)的柱狀圖顯示了在起始時間例9的納米分散體的粒子大小分布，且圖4(b) 的柱狀圖顯示了當室溫儲存24小時例9紫杉醇的納米分散體的粒子大小分布。圖5(a)的柱狀圖顯示了在起始時間例24D的納米分散體的粒子大小分布，且圖 5(b)的柱狀圖顯示了當室溫儲存8小時例24D的多烯紫杉醇的納米分散體的粒子大小分 布。
具體實施方案本發明提供了一種納米分散體，所述納米分散體包括具有顆粒平均大小小於 300nm的分散於包括水溶性溶劑和水的水溶液載體中的納米粒子，所述納米粒子包括紫杉 烷衍生物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生 物或它的鹽的混合物。本發明還提供了一種溶液，所述溶液包括紫杉烷衍生物，聚合物和表面活性劑，所 述表面活性劑包括在水溶性溶劑中的脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混 合物，當用水溶液載體稀釋時獲得納米分散體。本發明還提供了一種具有顆粒平均大小小於300nm的納米粒子，所述納米粒子包 括紫杉烷衍生物，表面活性劑，所述表面活性劑包括固醇或它的衍生物或它的鹽和脂肪酸 或它的鹽的混合物以及聚合物。本發明的納米分散體沒有像Cremophor的毒性賦形劑並 涉及使用大量減少的添加劑，所述添加劑是配製穩定的紫杉烷衍生物的納米分散體所必須 的，從而減少了有關的毒性反應。納米粒子或納米級粒子本身在有效藥物輸送方面提供了許多優點。已經認識到， 與以藥物的自由形式進行給藥相比，將藥物添加至輸送載體或將藥物附著於載體可以提供 許多優點。在載體中添加藥物可以影響組織特異性分布，特別是在某目標組織或病灶中優 先積累，使藥物靶向對特定細胞類型，減少與血液成分的相互作用，加強保護藥物避免過早 降解並提高了循環時間。納米粒子就是這樣一種重要的藥物輸送載體。納米粒子具有設計 特異性，允許它們將較高濃度的藥劑輸送至需要的位置或作用的靶點(Kayser等，Current Pharmaceutical Biotechnology，2005，6，3-5頁)。靶向藥物輸送在許多應用中是重要的， 特別是當如果進行全身輸送藥物的毒性針對的是組織時。在其它有益特點中，靶向藥物輸 送可以幫助消除或至少減少毒副作用並降低所需要的劑量。有不同的方法使藥物靶向作用 位點。一種非常簡單的但實用性有限的方法是在靶位點進行直接注射，例如注射進入腫瘤 組織。另一種方法是對不同的給藥途徑(例如局部輸送的轉移器具)使用特定的載體系 統，對口服和注射給藥使用微球體或納米粒子。注射途徑以外，靜脈注射使用的最為頻繁。一旦靜脈注射給藥，粒子被肝臟和脾巨噬細胞識別並優先由肝臟巨噬細胞優先獲取。可以 使用這一效果將負載了藥物的載體靶向至肝臟和脾或通常至巨噬細胞以治療MPS(單核吞 噬系統)或RES (網狀內皮系統)的感染，並且這一靶向現象通常被稱為「被動靶向」。通過 用聚乙二醇(PEG)基團或含有例如Poloxamine908的聚合物的PEG鏈修飾載體表面可以逃 避MPS/RES的識別。這增加了當靜脈注射時血流中的載體的循環周期。這些正常以及長循 環載體可以配有通常被稱為配體的靶向基團(外源凝集素或單克隆抗體或像甘露糖/半乳 糖等的糖類)。這些配體將含有載體的藥物引向需要的攜帶對所述配體有適當受體的靶細 胞。通過使用靶向配體實現的這一位點特定輸送包括一種主動過程；因此它同樣被稱為「主 動靶向」。具有特定大小的納米粒子可以通過使用腫瘤生物學特點的現象被動靶向實體腫 瘤。腫瘤組織的血管滲血，滲透性增加和淋巴流向差。相反，與腫瘤組織相比，正常組織中 的血管內皮細胞對納米粒子具有較低的滲透性。這使得納米載體積聚在腫瘤中。這一效應 已知為高滲透性和滯留效應或EPR效應(Nanoparticle Technology for drug delivery, edited by Ram B. Gupta 禾口 Uday B. Kompella, published by Taylor and Francis,2005, 539頁)。此外，小於200nm的納米粒子更有效地躲避了網狀內皮組織系統並保留長時間 的循環(Naoparticle Technology for drug delivery, edited by Ram B. Gupta 禾口 Uday B. Kompella, published by Taylor and Francis,2005,540 頁)。在此使用的術語納米粒子意思是具有受控大小的納米級的粒子。本發明要求保護 的納米粒子可以是高分子納米粒子(包埋藥物的聚合物基體)和/或高分子納米顆粒(封 裝藥物的聚合物穩定的納米大小的顆粒)和/或納米膠囊(包圍藥芯中藥物的聚合物膜) 和/或由表面活性劑穩定的藥物的納米大小粒子，和具有平均大小小於300nm的類似物。納 米粒子的粒子大小使用傳統的測量方法進行確定並且像Malvern粒子大小分析，篩選，光 散射光學顯微鏡，圖像分析，沉降和現有技術中本領域技術人員已知的其它方法進行粒子 尺寸的表示。粒子大小分布信息可以通過Dltl，D5tl和D9tl值獲得，例如可以通過Malvern粒 子大小測定產生而不希望受到任何理論的限制，本申請人認為通過包括具有平均大小小於 300nm的納米粒子的納米分散體進行藥物輸送可以提高藥物在靶向腫瘤組織和細胞中的內 化(internalization)和積聚。這一增加的內化水平為與癌症有關的腫瘤治療提供了有效 的治療方案。根據本發明的一個實施例，納米粒子的粒子尺寸範圍在IOnm至275nm之間。在本 發明的一個優選實施例中，粒子尺寸小於200nm。在本發明的最優選實施例中，粒子大小在 IOnm 至 200nm 之間。本發明提供了一種納米分散體，所述納米分散體包括具有平均大小小於300nm的 分散於包括水溶性溶劑和水的載體中的納米粒子，所述納米粒子包括一種或多種紫杉烷衍 生物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或 它的鹽的混合物。本發明還提供了一種溶液，所述溶液包括一種或多種紫杉烷衍生物，聚合物和表 面活性劑，所述表面活性劑包括在水溶性溶劑中的脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或 它的鹽的混合物，當其用水溶液液體載體稀釋時得到納米分散體。本發明的納米粒子平均大小小於300nm，其中所述粒子包括一種或多種紫杉烷衍 生物，表面活性劑，所述表面活性劑包括固醇或它的衍生物或它的鹽和脂肪酸或它的鹽的混合物以及聚合物。如本發明的實施例中提到的紫杉烷衍生物是那些主要具有紫杉烷結構並主要來 源於例如Yew，Taxus brevifolia的樹皮或來自細胞培養或化學合成分子的複雜的二萜類 化合物的天然產物的化合物。紫杉烷類藥物的主要作用機理是阻斷微管功能。這通過穩定 微管中的GDP-結合微管蛋白實現。微管是細胞分裂所必需的，而紫杉烷阻止這一過程_其 被稱為「凍結有絲分裂」。用於本發明組合物中的這組最重要的代表包括紫杉醇和多烯紫杉醇和它們藥物 上可接受的鹽，衍生物，類似物和異構體等和它們的混合物，例如7-表紫杉醇，t-乙醯紫杉 醇，10-去乙醯-紫杉醇，10-去乙醯-7-表紫杉醇，7-木糖紫杉醇，10-去乙醯-7-戊二醯 紫杉醇，7-N，N- 二甲基甘氨醯紫杉醇，7-L-丙氨醯紫杉醇。紫杉醇是具有抗癌活性的天然產物。通過短葉紅豆杉和/或歐洲紫杉的半合成方 法獲得紫杉醇。紫杉醇的化學名稱是5 β，20-環氧-1，2 α，4，7 β，10 β，13 α -六羥基紫杉 烷-11-烯-9-酮-4，10- 二乙酸酯-2-苯甲酸酯_13[ (2，R，3，S)_N_苯甲醯-3-苯基異絲 氨酸酯]。紫杉醇在美國作為TAXOL注射劑可以獲得。紫杉醇被作為晚期卵巢癌治療的一 線和隨後治療。作為一線治療，紫杉醇與順鉬結合使用。紫杉醇還用於淋巴結陽性乳腺癌 的輔助治療，在標準的含有阿黴素的結合化療之後連續給藥。紫杉醇還可在6個月的輔助 化療中轉移性疾病或復發的聯合化療失敗之後對乳腺癌進行治療。紫杉醇與順鉬結合還被 用於未進行手術治療和/或放療的非小細胞肺癌病人的一線治療。紫杉醇還被用於與AID 有關的波西氏肉瘤的二線治療。多烯紫杉醇是屬於紫杉家族的另一種抗腫瘤劑。它通過起始於來自紫杉植物 的可再生的針狀生物質(renewable needle biomass)提取的前體進行半合成製備。多 烯紫杉醇的化學名成是三水合5β，20_環氧_1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉 烷-11-烯-9-酮-4乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-[ (2』 R，3』 S) -N-羧基-3-苯基異絲氨酸酯， N-叔-丁酯。多烯紫杉醇在美國以TAXOTERE 注射濃縮劑的形式獲得。多烯紫杉醇作為 單一試劑用於以鉬為基礎的化療失敗之後局部晚期或轉移性非小細胞肺癌病人的治療中。 多烯紫杉醇與順鉬結合用於先前未接受化療的不能手術的，局部晚期或轉移性非小細胞肺 癌病人的治療中。多烯紫杉醇與強的松結合用於治療具有雄激素非依賴性(激素難治)轉 移性前列腺癌的病人。多烯紫杉醇與順鉬和氟尿嘧啶結合用於治療晚期胃腺癌病人，包括 胃食管交界處的腺癌，其中病人先前未接受過化療治療該晚期疾病。多烯紫杉醇與順鉬和 氟尿嘧啶結合用於治療具有頭部和頸部的不能手術的局部晚期鱗狀細胞癌的病人。本發明 的實施例包括用量範圍在0. 001mg/ml至15. Omg/ml之間的紫杉醇，較優選範圍在0. Img/ ml至10. 0mg/ml之間且最優選範圍在1. 5mg/ml至5. 0mg/ml之間。本發明的實施例中使 用的多烯紫杉醇的用量範圍在0. 001mg/ml至10. 0mg/ml之間，較優選範圍在0. lmg/ml至 1. 0mg/ml之間且最優選範圍在0. 3mg/ml至0. 7mg/ml之間。包括納米粒子的納米分散體可以進一步包括附加的治療活性劑，其選自由消炎 劑，抗組胺劑，5-肌3拮抗劑，H2-受體拮抗劑，維生素和它們的混合物組成的組中。用於本 發明的組合物中的消炎劑可以選自類固醇消炎藥物和非類固醇消炎藥物。本發明的實施 例優選包括例如糖皮質激素的類固醇消炎藥物。可以用於本發明的組合物的糖皮質激素的 例子可以選自皮質醇或氫化可的松，強的松，氫化波尼松，地塞米松，被他米松，布地縮松，氟羥氫化潑尼松等和它們的混合物。在本發明的優選實施例中，地塞米松用作消炎劑。可 以用於本發明的組合物的抗組胺劑或組胺拮抗劑可以選自第一代抗組織胺劑，例如乙二胺 類((美吡拉敏，安他唑啉)，乙醇胺類(苯海拉明，卡比沙明，氯馬斯汀，乘暈寧)，烷基胺類 (非利拉明，chlorpheneramine，右氯苯那敏，曲普利啶)，哌嗪類(苯甲嗪，氯環嗪，羥嗪，美 其敏)，三環和四環類(異丙嗪，阿列馬嗪，賽庚啶，阿扎他定，酮替芬)等；第二代抗組織胺 劑，例如阿伐斯汀，阿司咪唑，西替利嗪，氯雷他定，咪唑斯汀，特非那丁，氮卓斯汀，卡巴斯 汀，奧洛他定等；第三代抗組織胺劑，例如左西替利嗪，地氯雷他定，非索非那定等和它們的 混合物。可以用於本發明的組合物中的5-HT3拮抗劑可以選自昂丹司瓊，格拉司瓊，多拉司 瓊，託烷司瓊，帕洛諾司瓊，阿洛司瓊，西蘭司瓊等和它們的混合物。可以用於本發明的組合 物中的H2-受體拮抗劑或H2-拮抗劑可以選自甲氰咪胍，雷尼替丁，尼扎替丁，法莫替丁，羅 沙替丁，布立馬胺，甲硫咪胺等和它們的混合物。可以用於本發明的組合物中的維生素可以 選自例如維生素A，維生素D，維生素E和維生素K的脂溶性維生素和例如維生素C和維生 素B (包括維生素Bl 硫胺；B2 核黃素；B3 煙酸；B5 泛酸；B7 生物素；B9 葉酸；B12 氰 鈷維生素)的水溶性維生素和它們的混合物。在本發明的一個實施例中使用的維生素是維 生素D。在本發明的納米分散體中存在的納米粒子包括一種或多種聚合物，適用於本發明 的納米粒子的聚合物優選水溶性的。水溶性聚合物的例子包括但不限於聚乙烯吡咯烷酮， 泊洛沙姆，聚乙二醇，聚乙烯醇，海藻酸鈉，透明質酸鈉，結冷膠，卡拉膠，黃原膠，硫酸葡聚 糖，硫酸軟骨素，果膠，肝磷脂，甲基丙烯酸共聚物，硫酸皮膚素，纖維素聚合物例如羧甲基 纖維素鈉，羥乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素等和它們的混合物。聚乙烯吡咯烷酮是具有線性排列的1-乙烯基-2-吡咯烷酮的單體單元的三級醯 胺聚合物，下面將其稱為PVP並同樣已知為聚維酮。它在商業上可獲得具有平均分子量範 圍在10，000至700，000之間的一系列的產品。各種產品根據平均分子量指定的K-值進行 銷售；例如GAF公司提供具有下面K-值的PVP K-值 平均分子量15約 10，00030約 40，00060約 160，00090約 360，000另一個供應商BASF提供了稱為科利當的不同等級的水溶性聚乙烯吡咯烷 酮，其具有例如分子量2000至3000 (科利當12PF)，7000-11，000 (科利當17PF)， 28，000-34, 000 (科利當25)，1，000, 000-1, 5000, 000 (科利當90F)的等級。在實施例中，聚 乙烯吡咯烷酮作為水溶性聚合物。適用於本發明的聚乙烯吡咯烷酮的等級包括具有分子量 範圍在1，000至45，000，優選4，000至30，000的聚乙烯吡咯烷酮。根據本發明的一個實施 例，用於納米分散體中的聚合物的用量範圍從0. 001% ν/ν至20% ν/ν。優選聚合物的用量 範圍從0.01% ν/ν至5.0% ν/ν。最優選聚合物的用量範圍從0.01% ν/ν至1.0% ν/ν。本發明的納米分散體包括一種或多種表面活性劑。術語表面活性劑是「表面活性 試劑」的另一種名稱。表面活性劑是分子，包括水溶性(親水)和脂溶性(親脂)部分。用 於本發明的納米分散體的表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物。術語脂肪酸包括來自或以酯化形式含在動物或植物脂肪，油或蠟中的脂肪族(飽 和或不飽和)一元羧酸。可以用於本發明的組合物中的脂肪酸或它的鹽的例子包括但不限 於具有「η」個碳原子的脂肪酸或它的鹽，其中「η」範圍從4至28。脂肪酸可以是飽和脂肪 酸或不飽和脂肪酸，和它們的鹽和它們的混合物。飽和脂肪酸和它的鹽可以選自丁酸，己 酸，辛酸，葵酸，月桂酸，肉豆蔻酸，棕櫚酸，硬脂酸，花生酸，二十二酸，辛酸鈉，月桂酸鈉，肉 豆蔻鈉，棕櫚酸酯鈉等和/或它們的混合物。不飽和脂肪酸和它的鹽可以選自肉豆蔻酸，棕 櫚油酸，油酸，亞油酸，α亞麻酸，花生四烯酸，二十碳五烯酸，芥酸，十二碳六烯酸，油酸鈉， 花生四烯酸鈉等和/或它們的混合物。可以用於本發明的納米分散體或納米粒子的固醇或它的衍生物或它的鹽的例子 可以是固醇的酸酯。可以適用於本發明的固醇包括但不限於膽固醇，植物固醇，麥角脂醇， 膽汁酸鹽和它們的混合物。可以使用的膽固醇的酸鹽包括但不限於膽固醇硫酸鹽，膽固醇 乙酸鹽，膽固醇氯乙酸鹽，膽固醇苯甲酸鹽，膽固醇肉豆蔻酸鹽，膽固醇半瑚珀酸鹽，膽固 醇磷酸鹽，磷酸鹽，硼酸鹽，硝酸鹽，膽固醇桂皮酸鹽，膽固醇crotanoate，膽固醇丁酸鹽， 膽固醇庚酸鹽，膽固醇己酸鹽，膽固醇辛酸鹽，膽固醇壬酸鹽，膽固醇癸酸鹽，膽固醇油酸 鹽，膽固醇丙酸鹽，膽固醇戊酸鹽，雙膽留醇碳酸鹽等和它們的混合物。可以用於本發明 的組合物的植物留醇類包括谷留醇，油菜留醇，豆留醇，菜籽留醇和它的衍生物，鹽和它們 的混合物。美國，Sigma公司銷售的植物留醇類*含有谷留醇，油菜留醇和二氫菜籽甾醇 (dihydrobrassicasterol)。膽汁酸包括膽酸，鵝去氧膽酸，脫氧膽酸，甘氨膽酸，牛磺膽酸， 熊去氧膽酸和它的衍生物，鹽和它們的混合物。固醇還可以是包括膽固醇半琥珀酸的膽固 醇的酯，包括膽固醇氫硫酸和膽固醇硫酸的膽固醇的鹽，麥角固醇，包括麥角固醇半琥珀酸 的麥角固醇的酯，包括硫酸氫麥角固醇和麥角固醇硫酸的麥角固醇的鹽，羊毛留醇，包括羊 毛甾醇半琥珀酸的羊毛留醇的酯，包括硫酸氫羊毛留醇和羊毛留醇硫酸的羊毛留醇的鹽。根據本發明的一個實施例，納米粒子包括表面活性劑，其是固醇或它的衍生物或 它的鹽和脂肪酸和它的鹽的混合物。在另一個優選實施例中，納米粒子包括極性酸的膽固 醇酯。在一個優選實施例中，用於納米分散體中的表面活性劑是辛酸和膽固醇硫酸鹽的混 合物。辛酸(caprylic acid)同樣已知為辛酸(octanoic acid)，可以 0. 001 % w/v 至 5. 0% w/v,優選0. 01 % w/v至1. 0% w/v且最優選0. 01 % w/v至0. 5% w/v的用量範圍用於實施 例中。用於本發明的實施例中的膽固醇硫酸鹽用量範圍是0. 001% w/v至5. 0% w/v，較優 選是 0. 01% w/v 至 1. 0% w/v 且最優選是是 0. 01% w/v 至 0. 5% w/v。已經驚訝地發現，表面活性劑的這一特定的混合提供了一種甚至在表面活性劑與 紫杉烷衍生物的低比例下保持超過6小時穩定的紫杉烷衍生物的納米分散體。在本發明的 納米分散體中，表面活性劑與紫杉烷衍生物的比例是1 5至1 10。本發明的納米分散 體穩定至少6小時，特別地，發現包括紫杉醇的納米分散體保持24小時穩定，而發現包括多 烯紫杉醇的納米分散體發現保持8小時穩定。根據另一個優選實施例，使用的表面活性劑選自油酸和膽固醇硫酸和/或它們的 混合物。根據本發明的另一個實施例，使用的表面活性劑選自飽和脂肪酸和膽汁酸或膽鹽 和/或它們的混合物。根據優選實施例，使用的表面活性劑選自由辛酸和甘氨膽酸鈉或熊去氧膽酸和/或它們的組合物組成的組中。使用的膽鹽的用量範圍是0. 001% w/v至5. 0% w/v，較優選的用量範圍是0. 01% w/v至1. 0% w/v且最優選的用量範圍是0. 01% w/v至0. 75% w/Vo本發明的組合物還可以包括低含量的卵磷脂/磷脂和/或它們的衍生物。在此使 用的術語「低含量」意思是磷脂與紫杉烷衍生物的比例是1 4至1 10，即如果使用了磷 脂，磷脂的用量很低，即與紫杉烷衍生物的用量相比，磷脂的用量非常低。通常，現有技術的 組合物是脂質體，與藥物的用量相比需要大量的磷脂。當使用少量磷脂時在一些實施例中，這些磷脂的實例包括但不限於天然卵磷脂， 部分氫化或氫化卵磷脂或鞘脂。天然卵磷脂是不同磷脂的混合物。用於本發明的組合 物的磷脂選自磷脂醯膽鹼，(二豆蔻醯磷脂醯膽鹼，dipalmitotylphosphatidyl膽鹼， distearyloylphosphatidyl膽鹼，，二油醯磷脂醯膽鹼，二月桂醯磷脂醯膽鹼，1棕櫚醯 磷脂醯膽鹼，1豆蔻-2-palmitoyI磷脂膽鹼，1_棕櫚醯_2_豆蔻醯磷脂醯膽鹼，1_硬脂 醯-2-棕櫚醯磷脂醯膽鹼)；磷脂醯乙醇胺(二肉豆蔻醯磷脂醯乙醇胺，二棕櫚醯磷脂醯乙 醇胺，二硬脂醯磷脂醯乙醇胺，溶血磷脂醯乙醇胺)；鞘磷脂(腦磷脂，二棕櫚醯神經鞘磷 脂)，溶血卵磷脂，腦苷脂等和它們的混合物。此外，例如聚乙二醇_ 二硬脂醯磷脂醯乙醇 胺(PEG-DSPE)，甲氧基聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯膽鹼m-PEG-DSPC等和它們的混合物的脂 質的聚乙二醇衍生物還可以用於本發明的組合物中。優選的，可以用於本發明的組合物的 butylenesids是m-PEG_DSPE(甲氧基聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺)。在本發明的一個實施例中，使用的磷脂是m-PEG-DSPE。它的用量範圍是0. 001 % w/v 至 10. 0% w/v，較優選 0. 01% w/v 至 5. 0% w/v 且最優選 0. 03% w/v 至 0. 5% w/v。用於本發明的組合物中的非水溶劑是一種紫杉烷衍生物相對可溶的溶劑。該非水 溶劑是與水或水溶劑易混合的。用於本發明的這類水溶性溶劑的粒子包括但不限於例如乙 醇，η-丙醇，異丙醇的醇類；例如乙二醇，丙二醇，丁二醇和它的衍生物的二醇類；像PEG400 或PEG3350的聚乙二醇；例如PPG-10 丁二醇，PPG-10甲基葡萄糖醚，PPG-20甲基葡萄糖醚， PPG-15硬脂醚的聚丙二醇和它的衍生物；丙三醇；四氫呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)等和 它們的混合物。在本發明的一個實施例中，非水溶劑可以選自由乙醇，聚乙二醇和/或它們的混 合物組成的組中。在本發明的優選實施例中，乙醇和PEG(聚乙二醇)的混合物作為水溶性 溶劑使用。用於本發明的納米分散體組合物中的乙醇用量範圍是0. 001% w/v至5% w/v, 較優選是0. 05% w/v至0. 5% w/v且最優選是0. w/v至0. 25% w/v。優選使用的聚乙 二醇包括PEG-400和PEG-3350。用於本發明的實施例的PEG-400的用量範圍是是0. 01% w/v 至 20. 0 % w/v,較優選是 0. 05 % w/v 至 5. 0 % w/v 且最優選是 1. 0 % w/v 至 2. 5 % w/ ν。用於本發明的實施例的PEG-3350的用量範圍是是0. 001 % w/v至10. 0% w/v，較優選是 0. 05% w/v 至 5. 0% w/v 且最優選是 0. w/v 至 3% w/v。通常，需要紫杉烷的預濃縮劑，即用水溶液載體稀釋溶液時可以提供保持至少4 小時穩定的納米分散體。這一時間是將納米分散體以注射形式給藥至病人的時間。從而， 它始終是需要的以實現本發明的納米分散體的至少4小時的穩定性。載體還可以在注射用 水中包括5%至10. 0%w/v葡萄糖溶液或任何其它的藥物可接受的靜脈水液體載體和它的 混合物。其中紫杉烷衍生物是紫杉醇的本發明的一個實施例中，水性液體載體還包括5 %的葡萄糖溶液以提高穩定性但其它的穩定劑也可以存在於所述水相中。這些穩定劑的例子是 羥乙基澱粉，葡萄糖，透明質酸鈉，穀胱甘肽，鳥氨酸-L-天冬氨酸鹽等和它們的混合物。在 另一個實施例中，發現在5%的葡萄糖溶液中使用0.01%的精氨酸獲得了可以穩定8小時 的多烯紫杉醇的納米分散體，而在5%的葡萄糖溶液中使用的組氨酸產生了可以穩定5 小時的多烯紫杉醇的納米分散體。在使用多烯紫杉醇作為紫杉烷衍生物的實施例中，水溶 液載體還可以包括羥乙基澱粉，葡聚糖，透明質酸鈉，穀胱甘肽，鳥氨酸天冬氨酸鹽，例如組 氨酸，精氨酸等的胺基酸和它們的混合物。這些其它的穩定劑可以在水溶液載體中以0. 05 至5%的用量範圍存在。在一個優選實施例中，發現在5%的葡萄糖溶液中使用0. 5%的羥 乙基澱粉產生的多烯紫杉醇的納米分散體以粒子大小穩定超過5小時。本發明的紫杉烷衍生物的納米分散體通常可以通過下面列出的任何一種方法進 行製備1)治療活性成分(紫杉烷衍生物和/或其它試劑)，聚合物和選自脂肪酸或它的 鹽，固醇或它的衍生物或它的鹽和它們的混合物的表面活性劑被溶解於例如乙醇和/或 PEG的水溶性溶劑中，同時伴隨攪拌和加熱以獲得藥物的濃縮溶液。這樣獲得的所述溶液 通過薄膜過濾器進行過濾。在這一溶液中緩慢地添加水溶液液體載體(5%的葡萄糖溶液) 並將混合物振蕩/攪拌，從而形成本發明的納米分散體。這樣形成的納米分散體可選地進 行均質和/或超聲降解，過濾或凍幹。在給藥給病人之前，所述藥劑的凍乾粉末可以與液體 介質重新溶解配製成原來濃度，再次形成本發明的納米分散體。2)紫杉烷衍生物，聚合物和選自脂肪酸或它的鹽，固醇或它的衍生物或它的鹽和 它們的混合物的表面活性劑被溶解於例如乙醇和/或PEG的水溶性溶劑中，同時伴隨攪拌 和加熱以獲得藥物的濃縮溶液。這樣獲得的所述溶液通過薄膜過濾器進行過濾，並被添加 至水性介質中(5%的葡萄糖溶液)並將混合物振蕩/攪拌，從而形成本發明的納米分散體。 這樣形成的納米分散體可選地進行均質和/或超聲，過濾或凍幹。在給藥給病人之前，所述 藥劑的凍乾粉末可以與水性液體介質重新溶解配製成原來濃度，再次形成本發明的納米分 散體。3)紫杉烷衍生物和包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物 的表面活性劑通過在圓底燒餅中40°C的輕度加熱被溶解於例如乙醇和/或PEG的水溶性溶 劑中，並且將溶劑蒸發以形成藥物的薄膜。聚合物被溶解於需要數量的水性液體介質中並 且這一溶液伴隨適度攪拌並振蕩3-4小時被添加至所述薄膜，從而形成本發明的納米分散 體。這樣形成的納米分散體可選地進行均質和/或超聲，過濾或凍幹。在給藥給病人之前， 所述藥劑的凍乾粉末可以與水性液體介質重新溶解配製成原來濃度，再次形成本發明的納 米分散體。由於本發明的納米分散體是包括具有平均大小小於300nm的納米粒子的紫杉烷 衍生物的膠體納米分散體，分析它們是物理和化學穩定的。觀察到在室溫8小時至24小時 儲存後粒子沒有發生聚集，並且納米分散體的外觀沒有顯示變化，從而推斷在給藥之前和 過程中納米分散體在所需要的時間內是穩定的。此外，當對紫杉烷衍生物和/或水溶性溶劑中的其它試劑的溶液進行試驗時，觀 察到所述溶液在至少3個月的時間內保持物理和化學穩定，在藥物試驗中沒有明顯的變化 且在配方的外觀上基本沒有聚集或變化。觀察結果將在下面的例子中顯示。
本發明的納米分散體可以作為具有兩個或多個容器的試劑盒提供，例如兩個容 器，其中第一容器包括紫杉烷衍生物，聚合物和表面活性劑，其中所述表面活性劑包括在水 溶性溶劑中的脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物，且第二容器包括水 性液體載體，使得第二容器的內含物添加至第一個容器的內含物中時，或與之相反，隨著適 度攪拌或振蕩，形成了本發明的納米分散體並且它是適合於進行靜脈給藥。其它的容器可 以包括在形成紫杉烷納米分散體之前或在所述紫杉烷的納米分散體形成之後用於混合的 第三容器組件。本發明還提供了具有兩個容器的試劑盒，第一容器包括凍幹形式的納米分散體且 第二容器包括水溶液液體載體，使得在給藥給病人之前，隨著適度攪拌或振蕩，第二容器的 內含物添加至第一容器的內含物中時，或與之相反，形成了本發明的納米分散體。在病人需要的時候將本發明的納米分散體進行給藥將對現有技術中已知的各種 類型的癌症的治療提供有效的方法。本發明的納米分散體的功效和毒性與商業可獲得的例如Abraxane , Oncotaxel
等的紫杉烷產品進行對照。根據下面的參數進行功效評估1.腫瘤評估根據以天計算的時間在腫瘤體積(mm3)減少上進行評估腫瘤。對腫 瘤進行42天的評估。2. T/C百分數=(藥物治療χ天的組的平均腫瘤體積/藥物治療χ天的組的平均 腫瘤體積)χ 1003.腫瘤縮小臨床意義上的試驗動物腫瘤模型的重要端點中的腫瘤縮小。如果腫 瘤體積減少至在治療開始時腫瘤體積的50%以下而沒有減少至測量值以下被記錄為部分 (PR)，或如果腫瘤大小已經變得感知不到被記錄為完全(CR)。4.特定腫瘤生長延遲(S⑶)被定義為藥物治療過的腫瘤和對照腫瘤達到給定體 積(V)的時間差異的比例和對照腫瘤達到相同體積(V)的時間，其中V是在從治療開始的 最初腫瘤體積的兩個體積加倍之後的腫瘤體積，且Tv是藥物治療或對照組達到給定體積 的時間。如果V值在45天在試驗組或參照組動物未達到，相同的值X45天被認為是這一 動物的Tv。如果S⑶參數大於1，認為試驗是有效的。5.體重變化被計算為(χ天動物的體重-0天動物的體重/0天動物的體重)X 100。6.由Kaplan Meier方法完成的生存分析。P值< 0. 05被認為是顯著的。雖然， 本發明的納米分散體的功效通過上述參數進行評估，可以使用任何其它的適合的或相似的 試驗方法以確定納米分散體的功效。通過例27，28和29的例證發現進行試驗的本發明的 納米分散體是有效的。本發明的納米分散體的毒性通過以靜脈注射的方式給藥給CD-I老鼠進行確定。 在末次注射之後，在給藥後4-6小時之間觀察動物1小時。之後，對老鼠進行臨床症狀每天 觀察兩次並觀察15天死亡率。在給藥後第1，7和14天記錄所有存活動物的體重。在第15 天，進行存活動物的屍體解剖並記錄肉眼病變。毒性研究的結果在紫杉醇納米分散體和紫 杉萜納米分散體的例25和26中分別進行了詳細描述。雖然上面總體的公開本發明，但其它的內容根據下面的例子進一步討論和說明。 然而，所公開的實施例僅僅是為了說明本發明而不能認為限制本發明。例1-5本發明的納米分散體在下面的表1中進行描述。
表 1 方法 藥物，膽固醇硫酸酯，辛酸和PVP K-30在玻璃瓶中被精確稱重。內含物被溶解於 需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以獲得溶液。 溶液通過0.2 μ PVDF的薄膜過濾器進行過濾。·隨後，緩慢地將葡萄糖溶液(5% )添加至含有所述藥物溶液的玻璃瓶中並緩慢 振蕩以獲得透明至半透明的納米分散體。·通過ρΗ值計(Mettler Toledo-seven easy)確定納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern)進行測定。觀察到的組合物的可見外觀，pH值和粒子大小總結在下面的表2中。表2
小時可以看出本發明的納米分散體是物理穩定的，室溫儲存24小時配方基本沒有聚 集或外觀的變化。這些例子的納米分散體組合物含有150mg/100ml的紫杉醇。對於70kg的人來說， 用於人體的紫杉醇的劑量大約是300mg，200ml的每種納米組合物可以給藥給病人。從而， 例1-5的紫杉醇組合物的一次成人劑量包括20-80mg的膽固醇硫酸酯，25-100mg的辛酸， 65-250mg的PVP和300mg的乙醇。從而，本發明的組合物提供了將具有非常低量的賦形劑 與活性劑共同給藥的納米級粒子。下面例6-7中描述的藥物組合物是濃縮溶液，其在給藥給病人之前，已經用稀釋 劑(5% w/v葡萄糖溶液)稀釋多次以獲得本發明的納米分散體。雖然本發明已經根據它的特定實施例和應用進行了描述，但是本領域技術人員根 據這一教導可以獲得其它的實施例和改進而不會背離本發明的精神或超出要求保護的發 明的範圍。應該強調的是本發明的上述實施例，特別是「優選」實施例僅僅是實施本發明的 可能的例子，僅僅是為了清楚的說明本發明的原理而給出的。因此，應該理解的是在此的附圖和說明書優選通過舉例的方式以便於理解本發明 而不應該被認為是發明範圍的限制。M 6-7本發明的藥物組合物作為紫杉烷衍生物的濃縮溶液描述在下面的表3中。表3
15 方法·藥物，膽固醇硫酸酯，辛酸和PVP K-30在玻璃瓶中被精確稱重。 內含物被溶解於需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得溶液。 溶液通過0.2 μ PVDF的薄膜過濾器進行過濾。 例6的溶液被裝在玻璃瓶(每瓶Igm含有60mg的藥物)中並對穩定性進行試驗。穩定樣品以納米分散體的形式進行分析。隨著適度振蕩，葡萄糖溶液(5%w/v) (40ml)被緩慢地添加至含有藥物濃縮劑(60mg藥物)的玻璃瓶中以獲得具有1. 5mg/ml的 稀釋液的半透明的藥物納米分散體。納米分散體進行如下面的表4進行的試驗分析外觀， 藥物試驗，PH 值(Mettler Toledo-seven easy，pH 計)和粒子大小(Nano-ZS，Malvern 粒 子大小分析器)。表4:例6的穩定性數據 超過3個月試驗紫杉醇沒有變化，推斷出所述配方是化學穩定的。此外，可以看出 本發明的組合物是物理穩定的，在儲存中配方基本沒有發生聚集或外觀發生變化。例 8使用了 PVP K-12的本發明的藥物組合物在下面的表5中被描述。納米分散體的 製備過程與例1-7中描述的一樣。表5 觀察組合物的可見外觀，pH值和粒子尺寸並在下面的表6中總結。表6
RT:室溫可以看出本發明的組合物是物理穩定的，在室溫儲存24小時配方基本沒有發生 聚集或在外觀上發生變化。例 9本發明的組合物作為紫杉醇衍生物的濃縮溶液描述在下面的表7中。表 7 穩定性樣品進行如下分析並且在表8中提供穩定性數據。藥物試驗以濃縮藥物溶 液進行。為了其它觀察，隨著適度振蕩，葡萄糖溶液(5% w/v) (40ml)被緩慢地添加至含有 藥物濃縮劑(60mg藥物)的玻璃瓶中以獲得具有1.5mg/ml的稀釋液的透明至半透明的藥 物納米分散體。隨後，納米分散體進行如下的試驗分析外觀，PH值(Mettler Toledo-seveneasy, pH計)和粒子大小(Nano_ZS，Malvern粒子大小分析器)。表8 例9的穩定性數據 RH:相對溼度超過3個月儲存試驗紫杉醇沒有變化，推斷出所述配方是化學穩定的。此外，可以 看出本發明的組合物是物理穩定的，在各種儲存條件下儲存時配方基本沒有發生聚集或在 外觀上發生變化。圖4(a)顯示的柱狀圖顯示了在起始時間例9的納米分散體的粒子大小 分布，且圖4(b)顯示的柱狀圖顯示了當室溫儲存24小時例9紫杉醇的納米分散體的粒子 大小分布。這些柱狀圖顯示在室溫儲存24小時之後，平均粒子大小基本不變，從而顯示了 納米分散體的穩定本質。例10含有PEG-3350的本發明的藥物組合物在表9中進行描述。表9 製備·藥物，膽固醇硫酸酯，辛酸，PVP K-30和PEG3350在玻璃瓶中被稱重。 玻璃瓶中的內含物被溶解於需要數量的無水乙醇中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得透明的溶液。·緩慢地將上述乙醇溶液添加至葡萄糖溶液(5% )中並攪拌以形成納米分散體。·通過pH值計(Mettler Toledo-seven easy)檢查納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern粒子大小分析 器)進行測定。·納米分散體通過0. 2 μ的薄膜過濾器進行過濾。·將20ml的上述納米分散體裝入玻璃瓶並凍幹(Virtis)。在凍幹之前，製備之後立即觀察納米分散體的可見外觀和粒子大小，並在室溫儲 存24小時和48小時進行觀察。這些總結在下面的表10中表 10 RT:室溫可以看到室溫儲存24至48小時本發明的組合物是物理穩定的，配方基本沒有聚 集或發生外觀上的變化。凍幹餅的解凍在凍幹之後，玻璃瓶中獲得的餅通過適度振蕩分散於注射用水 (20ml)中以獲得具有1. 5mg/ml濃度的紫杉醇納米分散體。重新配製的納米分散體的每個玻璃瓶的內含物和特點分別在下面的表11和12中 給出表11 每個玻璃瓶的組合物中含有30mg的紫杉醇。對70kg的人來說，人體劑量大約是 300mg的紫杉烷，可以取上述組合物的10小瓶並再次溶解在例如WFI的60至600ml的稀釋 液中以獲得0. 5至5. Omg/ml的紫杉醇注射劑。如果將這一稀釋過的組合物給藥給病人將 含有20mg的膽固醇硫酸酯，25mg的辛酸和125mg的PVP。表 12 可以看出本發明的組合物在室溫儲存24小時之後是物理穩定的並且基本沒有聚 集並且配方的外觀沒有發生變化。例11和對照例I-III表 13 表14:觀察 例12在表15中進一步描述本發明的藥物組合物並且在表16中描述對各種參數的觀察。表 15 表 16
例13-14使用油酸和硬脂酸製備的本發明的納米分散體組合物描述在下面的表17中表17 這些組合物的製備方法與例1-5中的相同。獲得的納米分散體基本是透明至半透 明的並且分別具有134nm和155nm的平均粒子大小。例15
使用膽固醇製備的本發明的藥物組合物描述在下面的表18中。表 18 方法·藥物，膽固醇，辛酸和PVP K-30在玻璃瓶中被精確稱重。·內含物被溶解於需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得濃縮溶液。·濃縮溶液通過0. 2 μ的PVDF薄膜過濾器進行過濾。·緩慢地將葡萄糖溶液(5% )添加至含有濃縮溶液(IOOmg藥物)的小瓶中並適 度攪拌以獲得1. 5mg/ml稀釋度的透明至半透明的納米分散體。·通過pH值計(Mettler Toledo-seven easy)檢查納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern)進行測定。這一例子的納米分散體基本透明至半透明並具有217nm的平均粒子大小。例 16使用膽汁酸/鹽(甘氨膽酸鈉和熊去氧膽酸)製備的本發明的藥物組合物描述在 下面的表19中。表 19 方法·藥物，膽汁酸/鹽，辛酸，PVP K-30在玻璃瓶中被精確稱重。 內含物被溶解於需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得濃縮溶液。·濃縮溶液通過0. 2 μ的PVDF薄膜過濾器進行過濾。 緩慢地將葡萄糖溶液(5% w/v)添加至含有濃縮溶液(IOOmg藥物)的小瓶中並 適度攪拌以獲得1. 5mg/ml稀釋度的半透明的納米分散體。·通過pH值計(Mettler Toledo-seven easy)檢測納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern)進行測定。獲得的納米組合物外觀基本是半透明並分別具有197nm和ISOnm的平均粒子尺 寸。例17含有PVP K-90的本發明的藥物組合物描述在表20中。
製備方法與例1-5相同。獲得的納米分散體組合物外觀基本透明至半透明並具有207nm的平均粒子大小。例18含有透明質酸鹽的本發明的藥物組合物描述在表21中。表 21 方法·藥物，膽固醇硫酸酯和辛酸在玻璃瓶中被精確稱重。·內含物被溶解於需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得濃縮的藥物溶液。 濃縮溶液通過0.2 μ的PVDF薄膜過濾器進行過濾。·透明質酸鈉溶解於葡萄糖溶液(5% w/v)中並緩慢地被添加至含有濃縮藥物溶 液(30mg藥物)的小瓶中，隨後適度振蕩添加剩餘的5% w/v葡萄糖溶液以獲得1. 5mg/ml 稀釋度的半透明的納米分散體。·通過pH值計(Mettler Toledo-seven easy)檢測納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern)進行測定。獲得的納米組合物外觀基本半透明並具有263nm的平均粒子尺寸。例19含有聚穀氨酸鹽的本發明的藥物組合物描述在表22中。表22 納米分散體的製備方法與例18中的相同。獲得的納米分散體組合物外觀基本是 半透明的並具有295nm的平均粒子大小。例20含有其它治療劑_地塞米松的本發明的藥物組合物描述在下面的表23中。表 23 獲得的納米組合物外觀基本半透明並具有185nm的平均粒子大小。例 21含有多烯紫杉醇的本發明的藥物組合物描述在表24中。表 24 這一例的納米分散體通過例1-5中給出的方法進行製備。納米分散體是稍帶藍色 的白色並具有172nm的平均粒子大小。所述組合物含有1. 50mg/ml的多烯紫杉醇。對於70kg的人來說，多烯紫杉醇的大 約人體劑量是180mg，120ml的納米分散體組合物可以用於給藥給病人，使得所述組合物中 含有ISOmg的多烯紫杉醇。服用了這一例子的組合物的病人，服用了 12mg的膽固醇硫酸酯，15mg的辛酸， 150mg的PVP和ISOmg的乙醇。從而，本發明的組合物提供了具有活性劑與最低量的賦形劑 共同服用的納米級粒子。乙醇的量不會上癮。例 22下面給出含有多烯紫杉醇的本發明的藥物組合物。表 25 表25中給出的根據配方的多烯紫杉醇預濃縮劑使用不同分子量的聚乙烯吡咯烷 酮進行製備。發現聚乙烯吡咯烷酮分子量提高在聚集方面改進了納米分散體的穩定性並在一 定時間內保持納米分散體的穩定。例23和對照例IV，V和VI表 26
·特定量的藥物，膽固醇硫酸和辛酸在玻璃瓶中被精確稱重。·內含物被溶解於需要數量的無水乙醇和PEG-400中並伴隨攪拌並在45°C加熱以 獲得濃縮的藥物溶液。·所述溶液通過0. 2 μ的PVDF薄膜過濾器進行過濾。 製備葡萄糖溶液(5% w/v)並緩慢地將其添加至含有濃縮藥物溶液(30mg藥物) 的小瓶中，隨後適度振蕩添加剩餘的5% w/v葡萄糖溶液以獲得1. 5mg/ml稀釋度的半透明 的納米分散體。·通過pH值計(Mettler Toledo-seven easy)檢測納米分散體的pH值。·納米分散體的粒子大小通過粒子大小分析器(Nano-ZS，Malvern)進行測定。表27-觀察 例 24表 28
特定量的多烯紫杉醇，膽固醇硫酸鈉，辛酸和聚乙烯吡咯烷酮在玻璃瓶中被稱重。 無水乙醇和聚乙二醇被混合併在40°C適度加熱下溶解於超聲波儀中，直到獲得透明的預濃 縮劑。所述預濃縮劑用表29給出的含有不同添加劑的水溶液液體載體進行稀釋。所形成 的納米分散體使用通過Malvern粒子大小分析器進行平均粒子大小測定。表29 水溶液液體載體中的添加劑對納米分散體穩定性的影響 0. 5%的組氨酸，5%的葡萄糖注射劑中的0. 001%的依地酸二鈉的例子的粒子大 小分布結果在圖5(a)和圖5(b)中表示。圖5(a)顯示的柱狀圖顯示了在起始時間的納米 分散體的粒子大小分布(平均粒子大小=98nm)，且圖5(b)顯示的柱狀圖顯示了當室溫儲 存8小時的納米分散體的粒子大小分布(平均粒子大小=96. 4nm)，從而顯示了納米分散體 的穩定本質。例25本發明的紫杉醇納米分散體在CD-I老鼠中的急性毒性試驗項目
1.例12a的組合物與5% w/v的葡萄糖稀釋至10mg/ml伴隨使用安慰劑2.例9的組合物與5% w/v的葡萄糖稀釋至8mg/ml伴隨使用安慰劑，和3. ABRAXANE 用 0.9% 的氯化鈉稀釋至 10mg/ml。⑶-I老鼠在獨立通風籠系統(IVC)的條件下適應環境5天，動物居住區數為2。 在獸醫健康檢查之後，5隻雄性和5隻雌性老鼠分配至每個劑量組。在試驗期間，老鼠可以 隨意接觸水和飼料。試驗項目和低於劑量的安慰劑通過老鼠尾骨脈使用帶有刻度注射器 的26gaUge號針靜脈給藥，它們都沒有用任何載體進行過任何稀釋。在注射之前，尾部用溫 水擦洗以擴張血管。150，200，250，300，350和400mg/kg的總劑量用於紫杉醇納米分散體 (例12)的試驗，250，300和400mg/kg的劑量用於安慰劑(例12的安慰劑)的試驗，200和 250mg/kg的劑量用於紫杉醇納米分散體(例9)的試驗，250mg/kg的劑量用於安慰劑(例 9的安慰劑)的試驗，以及300mg/kg的劑量用於ABRAXANE 的試驗。所有這些配方分3 次靜脈給藥至⑶-I老鼠，其中兩次劑量/注射之間有1小時停留。在末次注射之後，每天 兩次，每次1小時並在給藥後4-6小時觀察動物。之後，直到45天每天觀察兩次老鼠以記 錄中毒症狀和死亡率。表 30 結果顯示例12的紫杉醇納米分散體在400mg/kg顯示了 90%的死亡率，在300mg/ kg的劑量下顯示了 O死亡率。在最高試驗劑量(400mg/kg)下例12的安慰劑沒有觀察到 死亡率。藉助於紫杉醇納米分散體的線性外推法，獲得的LD5tl和LDltl值分別是342. 5mg/kg 和310mg/kg。類似地，例9的紫杉醇納米分散體在250mg/kg顯示了 20%的死亡率並且紫 杉醇納米分散體的LD5tl > 250mg/kg。在最高試驗劑量(250mg/kg)下例9的安慰劑沒有觀察到死亡率。市售的納米粒子配方ABRAXANE 在300mg/kg顯示了 90%的毒性。這些數據 清楚地顯示了本發明的納米分散體組合物與市售的ABRAXANE 相比是低毒性的。此外，對 照本發明的納米分散體組合物(342.5mg/kg)的LD5tl值和市售的TAXOL配方(7. 5_12. Omg/ Kg ；United States Patent No. -6753006)的LD5tl值，證實本發明的紫杉醇納米分散體觀察 到的LD5tl值大大高於市售的TAXOL溶液的LD5tl值。SD小鼠中的本發明的紫杉醇納米分散體的急性毒性試驗項目1.例9的組合物與5% w/v的葡萄糖稀釋至10mg/ml伴隨使用安慰劑，和2. ABRAXANE 用 0.9% 的氯化鈉稀釋至 5mg/ml。小鼠在獨立通風籠系統(IVC)的條件下適應環境5天，動物居住區數為3。在獸醫 健康檢查之後，5隻雄性和5隻雌性SD小鼠分配至每個劑量組。在試驗期間，小鼠可以隨 意接觸水和飼料。試驗項目和低於劑量的安慰劑通過小鼠尾骨脈使用帶有刻度注射器的2 6gauge號針靜脈給藥，它們都沒有用任何載體進行過任何稀釋。在注射之前，尾部用溫水擦 洗以擴張血管。在注射之後，每天兩次，每次1小時並在給藥後4-6小時觀察動物。之後， 直到14天每天觀察兩次老鼠以記錄中毒症狀和死亡率。表 31 結果顯示例9的本發明的紫杉醇納米分散體在90mg/kg顯示了 40 %的死亡率。在 90mg/kg的最高試驗劑量下沒有觀察到例9安慰劑的死亡率。本發明的紫杉醇納米分散體 的LD5tl值> 90mg/kg。市售的納米粒子配方ABRAXANE 在70mg/kg顯示了 100%的毒性。這些數據清楚地顯示了本發明的納米分散體組合物將與藥物有關的毒性最小化 並且擴大了藥物的有效給藥製劑範圍並且毒性比現有市售的例如ABRAXANE 配方相比是 低毒性的。例26例24B的組合物使用5% w/v的葡萄糖進行稀釋至10mg/ml，伴有安慰劑，市售的 Taxotere 配方被稀釋至10mg/ml通過靜脈給藥途徑在⑶-I老鼠上進行多烯紫杉醇納米分 散體和安慰劑的記性毒性研究。老鼠在實驗室適應6天，動物居住區數為2。在獸醫健康檢 查之後，5隻雄性和5隻雌性老鼠分配至每個劑量組。在研究期間，老鼠可以隨意接觸水和 飼料。試驗項目和安慰劑通過老鼠尾骨脈使用帶有刻度注射器的26gaUge號針靜脈給藥， 它們都沒有用任何載體進行過任何稀釋。在注射之前，尾部用溫水擦洗以擴張血管。200，
33250和300mg/kg的總劑量用於多烯紫杉醇納米分散體(例24B)的試驗，安慰劑(例24B的 安慰劑)以最高劑量使用。這些配方分3次靜脈給藥至CD-I老鼠，其中兩次劑量/注射之 間有1小時停留。在末次注射之後，每天兩次，每次1小時並在給藥後4-6小時觀察動物。 之後，直到15天每天觀察兩次老鼠以記錄中毒症狀和死亡率。所有存活動物的體重在給藥 後1，7和14天進行記錄。在第15天，進行存活動物的屍體解剖並且記錄全部病狀。表32 急性毒性研究的結果 結果顯示例24B的本發明的多烯紫杉醇納米分散體在300mg/kg顯示了 10%的死 亡率，在250mg/kg的劑量下是UV在最高劑量試驗(300mg/kg)的安慰劑沒有觀察到死亡 率。市售配方Taxotere 在120mg/kg顯示了 10%的毒性。這些清楚地顯示了本發明的多烯 紫杉醇納米分散體觀察到的LDltl值與市售的Taxotere 溶液配方相比具有更大的LDltl值。 Taxotere 的報導 LDltl 值是 95mg/kg (參考SBA-NDA_20449)。例27紫杉醇納米分散體(例12a的組合物)對具有MX-I腫瘤異種移植的裸鼠的 抗瘤功效(腫瘤減少)動物種類老鼠，品系:Balb/c裸鼠，性別雌性，年齡:6_8周(18. 9g±l. 8gs)人類腫瘤異種移植MX-I (乳腺)試驗樣品例12a的組合物用5%的葡萄糖進行稀釋至2mg/ml。參照市售配方， ABRAXANE ,用0. 9%的氯化鈉再次稀釋至2mg/ml。安慰劑沒有紫杉烷衍生物的試驗樣品劑量20mg/kg，每天一次連續5天，靜脈給藥，每kg體重10ml。研究設計1.腫瘤通過皮下將30mg至40mg切片植入到動物的右腹，。2.在開始治療之前允許腫瘤增加到125mm3至132mm3的平均大小。3.腫瘤動物被劃分為包括10個動物的若干組。4.動物如上面描述的進行給藥並且按以下的進行評估腫瘤。
結果與對照組相比，從試驗開始第8天起腫瘤體積明顯減少。以天為計，以腫瘤 體積(mm3)進行評估。42天的數據在圖1中圖示表示。對照組20mg/kg (最佳％ T/C < 20)看到中度抗腫瘤活性，而實驗組20mg/kg體重 (最佳％ T/C < 10)看到非常明顯的抗腫瘤活性。試驗組和對照組的最佳％ τ/c值分別是 0和13. 34。通過20mg/kg的在裸鼠中MX-I人類乳腺癌移植瘤的試驗證實了非常明顯的抗 瘤活性。例 28植入有MX-I腫瘤異種移植的裸鼠的紫杉醇納米分散體(例9的組合物)的抗瘤 功效(腫瘤減少)動物種類老鼠，品系=Athymic裸鼠，性別雌性，年齡:6_8周(20_25g)人類腫瘤異種移植MX-I (乳腺)試驗樣品例9的組合物用5%的葡萄糖進行稀釋至2mg/ml。參照市售配方，ABRAXANE ，用0. 9%的氯化鈉再次稀釋至2mg/ml。劑量20mg/kg，每天一次連續5天，靜脈給藥，每kg體重10ml。研究設計1.腫瘤通過皮下將大約2x2的切片植入到動物的右腹。2.在開始治療之前允許腫瘤增加到200mm3至220mm3的平均大小。3.腫瘤動物被劃分為包括10個動物的若干組。4.動物如上面描述的進行給藥並且按以下的進行評估腫瘤。腫瘤評估以天為計，對腫瘤體積(mm3)進行評估。42天的數據在圖2中圖示表
7J\ ο結果非常明顯的抗瘤活性在試驗組和Abraxane 組(optimal% Τ/C < 10)中看 到。試驗組和Abraxane 的最佳％T/C值分別是0.025和0.00。與0天相比，在安慰劑/對 照組沒有觀察到體重的明顯減少。通過20mg/kg的在裸鼠中MX-I人類乳腺癌移植瘤的試 驗(紫杉醇納米分散體濃縮注射劑)證實了非常明顯的抗瘤活性。例 29植入有HT-29人結腸癌異種移植的裸鼠的紫杉醇納米分散體(例9的組合物)的 抗瘤功效(腫瘤減少)動物種類老鼠，品系裸鼠，性別雌性，年齡6-8周(20-25g)人類腫瘤異種移植HT-29人結腸癌裸鼠移植瘤腫瘤試驗樣品例9的組合物用5%的葡萄糖進行稀釋至2mg/ml。劑量20mg/kg，每天一次連續5天，靜脈給藥，每kg體重10ml。參考(a)市售配方，ABRAXANE 被稀釋至2mg/ml，用0. 9%的氯化鈉再次稀釋至2mg/ml。 劑量20mg/kg，每天一次連續5天，靜脈給藥，每kg體重10ml。(b)市售配方，0NC0TAXEL 劑量13. 4mg/kg，每天一次連續5天，靜脈注射。研究設計1.腫瘤通過皮下將2x2x2的切片植入到動物的右腹。
2.在開始治療之前允許腫瘤增加到130mm3至160mm3的大小。3.腫瘤動物被劃分為包括10個動物的若干組。4.動物如上面描述的進行給藥並且按以下的進行評估腫瘤。腫瘤評估以天為計，對腫瘤體積(mm3)的縮小進行評估。49天的數據在圖3中圖
不表不。結果非常明顯的抗瘤活性在試驗組和Oncotaxel 100組(最佳％ T/C < 10)中 看到。20mg/kg的試驗和13. 4mg/kg的Oncotaxel 100組的最佳％ T/C分別是5. 92和8. 79， 而具有20. 33的最佳％ T/C值的Abraxane 的顯示了適度的抗癌活性。通過20mg/kg的在 裸鼠中HT-29人結腸癌裸鼠移植瘤腫瘤的試驗(紫杉醇納米分散體濃縮注射劑)證實了非 常明顯的抗瘤活性。
權利要求
一種納米分散體，所述納米分散體包括具有平均大小小於300nm的分散於載體中的納米粒子，所述載體包括水溶性溶劑和水，所述納米粒子含有一種或多種紫杉烷衍生物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物。
2.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述紫杉烷衍生物選自紫杉醇，多烯紫杉 醇或其藥物可接受的鹽。
3.根據權利要求1所述的納米分散體，其中表面活性劑與紫杉烷衍生物的比例是 1 5至1 10，並且其中所述納米分散體至少穩定4小時。
4.根據權利要求2所述的納米分散體，其中表面活性劑與紫杉醇的比例是1 5至 1 10，並且其中所述納米分散體穩定24小時。
5.根據權利要求2所述的納米分散體，其中表面活性劑與多烯紫杉醇的比例是 1 10，並且其中所述納米分散體穩定8小時。
6.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述納米粒子的平均大小的範圍在IOnm至 200nm之間。
7.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述水溶性溶劑選自醇類，二醇類和它的 衍生物，聚亞烷基二醇類和它的衍生物，丙三醇，四氫呋喃聚乙二醇醚，和它們的混合物。
8.根據權利要求7所述的納米分散體，其中所述的水溶性溶劑選自由乙醇和聚乙二醇 組成的組。
9.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述聚合物是水溶性聚合物。
10.根據權利要求9所述的納米分散體，其中所述水溶性聚合物選自由聚乙烯吡咯酮 和聚乙二醇組成的組。
11.根據權利要求10所述的納米分散體，其中使用的聚乙烯吡咯酮具有1000至 50，000範圍的分子量，並以0. 001% w/v至10% w/v的用量範圍使用。
12.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述脂肪酸或它的鹽選自由辛酸，油酸， 硬脂酸和其混合物組成的組。
13.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述固醇或它的衍生物或它的鹽選自由 膽固醇，極性酸膽固醇酯，植物固醇，膽汁酸和它們的衍生物，鹽，和它們的混合物組成的 組。
14.根據權利要求13所述的納米分散體，其中所述極性酸選自由琥珀酸，半琥珀酸，硫 酸，磷酸，穀氨酸，天冬氨酸，硼酸組成的組。
15.根據權利要求1所述的納米分散體，其中所述表面活性劑的用量範圍在0.001% w/ ν至5. 0% w/v之間。
16.包括一種或多種紫杉醇衍生物，聚合物和表面活性劑的一種溶液，所述表面活性劑 包括水溶性溶劑中的脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物，在用水性液 體載體稀釋所述溶液時獲得納米分散體。
17.粒子平均大小小於300nm的納米粒子，所述納米粒子包括一種或多種紫杉烷衍生 物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它 的鹽的混合物。
全文摘要
本發明提供了一種納米分散體，所述納米分散體包括具有平均大小小於300nm的分散於包括水溶性溶劑和水的載體中的納米粒子，所述納米粒子包括一種或多種紫杉烷衍生物，聚合物和表面活性劑，所述表面活性劑包括脂肪酸或它的鹽和固醇或它的衍生物或它的鹽的混合物。
文檔編號A61K9/51GK101909614SQ200880122577
公開日2010年12月8日 申請日期2008年12月23日 優先權日2007年12月24日
發明者N·阿魯蘇達爾, 埃傑伊·傑伊辛·庫帕德, 撒布哈斯·巴拉姆·博米克 申請人:太陽醫藥高級研發有限公司