阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用的製作方法

2023-05-18 11:11:01 1

專利名稱：：阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種試劑的新用途。
背景技術：
：血液標本是臨床實驗室使用最多的標本類型。常用的血標本抗凝劑如EDTA-K2、肝素鋰等可幹擾某些項目檢測，故僅局限於某類標本的抗凝[1—3]。當患者檢査不同項目時，需使用多種抗凝管，而每類標本又未盡其用，造成標本的極大浪費，並增加患者痛苦和醫療成本。因此，尋求一種通用抗凝劑是亟待解決的問題，但目前國內外對臨床實驗室使用新抗凝劑的研究報導很少。阿加曲班(Argatroban)能強烈地直接抑制凝血酶(IIa)活性，阻止血液凝固，且不會引起出血等副作用，因而在臨床抗血栓治療領域應用較為廣泛。
發明內容本發明的目的在於提供一種阿加曲班的新用途，是阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用。本發明的技術解決方案是一種阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用。所述的阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用，在進行血細胞和生化常規分析時，阿加曲班濃度約為0.70-0.75mg/ml。本發明選用的阿加曲班是一種活性強、高度選擇性的凝血酶抑制劑，能直接與凝血酶(因子IIa)結合，不但滅活血液中游離狀態的凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白結合的凝血酶，極低濃度時即可抑制由凝血酶所致的纖維蛋白形成和血小板聚集，達到抗凝目的。目前大多數臨床實驗室在一個工作日(8h)內出具血細胞和生化常規分析報告。本發明通過實驗選定重複性、穩定性和幹擾性實驗的阿加曲班濃度約為0.7mg/ml，因為其可保證血液在10h內不凝固。下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明圖1是不同濃度阿加曲班的抗凝效果圖。圖2是10例WBC和PLT在一定時間段內的變化情況圖。具體實施例方式一種阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用。所述的阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用，在進行血細胞和生化常規分析時，阿加曲班濃度約為0.70-0.75mg/ml。本發明的實驗材料如下1.材料阿加曲班(Argatroban)購自天津藥物研究院藥業有限責任公司。外觀呈白色晶狀粉末，純度99.2%，批號070814，CAS登記號74863-84-6，有效期3年。無任何添加劑的空白試管(矽化玻璃)購自江蘇康健醫療用品有限公司，批號080718，有效期2年，規格3ml，13x75mm。按照實驗設計方案稱取一定量阿加曲班加入空白試管內製成實驗用試管。2.標本收集共93例標本，來自志願者和本院門診就醫者(排除影響血液凝固的血液病、肝臟疾病等患者)，其中男41例，女52例，年齡(31士3)歲(2041歲)。由2名熟練的專業技術人員從肘靜脈、嚴格按實驗要求定量採集血液。3.儀器、試劑和檢測方法檢測儀器為全自動血細胞分析儀(SysmexXE-2100)和全自動生化分析儀(Hitachi7600-020)，血細胞分析採用儀器配套試劑，生化分析採用實驗室日常檢測用試劑。室內質控品為Sysmexe-CHECKlevel2，批號82030802(血細胞分析)和BeckmanCoulterTriadNYSSPATHlevel2，批號M705512(生化分析)。檢測時儀器均在控。表l分析項目、檢測方法和試劑來源。，，2英Jf寫方法原理試劑廠商批號目名稱(單位)AST(U/L)ALT(U/L)ALP(U/L)LDH(U/L)GGT(U/L)CHE(KU/L)TB(umol/L)DB(umol/L)總蛋白TP(g/L)白蛋白Alb(g/L)葡萄糖Glu(mmol/L)尿素Urea(mmol/L)肌酐Cr(umol/L)AST-蘋果酸脫氫酶法ALT-乳酸脫氫酶法AMP緩衝液法乳酸-丙酮酸法(L—P)連續監測法(甘氨醯甘氨酸)連續監測法(丁醯硫代膽鹼)重氮鹽法重氮鹽法雙縮脲法溴甲酚綠法葡萄糖氧化酶法(Trinder)尿素酶-穀氨酸脫氫酶法鹼性苦味酸法上海復旦張江生物醫藥股份有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司上海復旦張江生物醫藥股份有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司溫州東甌津瑪生物科技有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司上海復星長徵醫學科學有限公司溫州東甌津瑪生物科技有限公司上海復旦張江生物醫藥股份有限公司自配080801D080932081001D080913D0810232008080032L080514L080524L080924L0809842008090047080701氨基酶酸轉磷脫氣移酯紅膽冬氨移氨基酶性酶酸酶t轉鹼膽接素天酸轉丙氨移鹼酸乳氫^醯酶膽酶總素直紅續表l檢測項英文縮寫目名稱(單位)方法原理試劑廠商批號尿酸UA(umol/L)膽固醇Choi(mmol/L)三醯甘油高密度脂蛋白膽固醇低密度脂蛋白膽固醇載脂蛋白Al載脂蛋白B鉀、鈉、氯鈣磷白細胞中性粒細胞數淋巴細胞數單核細胞數嗜酸性粒細胞數嗜鹼性粒細胞數紅細胞血紅蛋白紅細胞壓積平均紅細胞體積TG(mmol/L)HDL-c(mmol/L)LDL-c(mmol/L)apoAl(mg/dl)apoB(mg/dl)K、Na、Cl(mmol/L)Ca(mmol/L)P(薩ol/L)WBC(x09/L)NE(#)LY(#)MO(#)EO(#)BA(#)RBC(xl012/L)訓抓)HCT(L/L)MCV(fl)尿酸酶-過氧化物酶法(Trinder)膽固醇氧化酶法(Trinder)氧化酶法(Trinder)直接一步法(Trinder)直接一步法(Trinder)免疫透射比濁法免疫透射比濁法離子選擇電極法(間接ISE)鄰甲酚酞絡合酮法紫外分光光度法(磷鉬酸法)雷射流式雷射流式+細胞化學雷射流式+細胞化學雷射流式+細胞化學雷射流式+細胞化學雷射流式雙鞘流電阻抗法(十二烷基硫酸鈉)SLS-HGB法雙鞘流電阻抗法計算上海復星長徵醫學科學有限公司上海北海生物技術工程有限公司上海北海生物技術工程有限公司上海北海生物技術工程有限公司上海北海生物技術工程有限公司上海申峰生物技術有限公司上海申峰生物技術有限公司日立儀器(蘇州)有限公司曰本第一化學藥品株式會社曰本和光純藥工業株式會社D080813BH-20808BH-20卯7BH-20707BH-208070808330讓5L1046/J1191/K1042803RIFAR155Sysmex公司配套試劑平均紅細胞血紅蛋白MCH(pg)計算量平均紅細胞血紅蛋白MCHCCg/L)計算濃度紅細胞直方圖分布寬RDW(%)度血小板PLT(xl09/L)雙鞘流電阻抗法平均血計算小板體MPV(fl)積血小板直方圖分布寬PDW(%)度血小板壓積PCT(L/L)雙鞘流電阻抗法4.凝固時間與劑量的關係共5位受試者參與本實驗，每人採集定量全血分別加入1支空白管和4支自製阿加曲班抗凝管，各管阿加曲班最終濃度依次約為0、0.13、0.33、0.52、0.74mg/ml,再分別於0.5、2、5、10、14、24h觀察標本凝固情況。傾斜試管，如血液保持正常流動狀態為未凝固，記為0分，輕度粘稠記為l分，重度粘稠記為2分，完全凝固記為3分。5.重複性實驗共IO位受試者，第1組(5人)進行血細胞常規分析的重複性實驗，第2組(另5人)進行生化常規分析的重複性實驗。阿加曲班最終濃度約為0.70mg/ml。所有標本連續重複檢測5次，1h內完成。6.穩定性實驗共20位受試者，第1組(10人)進行血細胞常規分析的穩定性實驗，第2組(另10人)進行生化常規分析的穩定性實驗。阿加曲班最終濃度約為0.75mg/ml。標本分別於採血後1、3、5、7、9、11h(血細胞分析)禾B1、2、4、6、8h(生化分析)檢測，以1h檢觀lj結果為參照值。實驗過程中，血細胞分析標本始終置於室溫，而生化分析標本在全血離心後將血清或血漿移入另一試管置於2°C8°C冰箱保存，分別於相應檢測時間點取出檢測。7.幹擾性實驗共58位受試者，分為2組(每組29人)。第1組每人抽取定量全血注入1支EDTA-K2抗凝管和2支自製阿加曲班抗凝管，第2組每人抽取定量全血注入1支空白管和2支自製阿加曲班抗凝管，各管抗凝劑最終濃度約為1.8mg/ml(EDTA-K2)和0.7、1.5mg/ml(阿加曲班)。血細胞分析以EDTA-K2抗凝血檢測值為參照，生化分析以空白管血清值為參照。8.統計學處理實驗數據採用統計軟體SigmaStat3.5和SigmaPlot10.0處理。根據數據分布特點，穩定性實驗數據採用單因素重複測量方差分析或基於秩的Friedman重複測量方差分析，幹擾性實驗數據採用單因素方差分析或基於秩的Kruskal-Wallis方差分析。臨床可接受範圍(clinicallyacceptablelimits,CAL)=參考值±參考值乂[1.65乂<:￥八+0.25x(CVw.s2+CVB.s2)1/2]，其中CVA我們取日常室內質控結果的變異係數，CVw.s和CVB-s分別為個體內和個體間生理變異係數m。結果1.凝固時間與劑量的關係阿加曲班濃度越高，抗凝時間越長。當阿加曲班濃度為0.74mg/ml時，抗凝時間可達10h，見圖l。2.重複性實驗阿加曲班抗凝標本中，各檢測項目的變異係數(CV。X)均小於或接近TEa的1/4[8]或本實驗室批內精密度，見表2。_表2重複性實驗結果_項目實驗濃度實驗cvx1、本科室cvxAST(U/L)ALT(U/L)ALP(U/L)LDH(U/L)GGT(U/L)CHE(KU/L)TB(umol/L)續表2項目實驗濃度實驗cvxCLIA'88(1/4TEa,%)本科室cv%DB(umol/L)3.321.22±0.715.001.66TP(g/L)75.10.80±0.142.501.61Alb,)45.20.70±0.132.500.57Glu(mmol/L)5.720.86±0.592.500.78Urea(mmol/L)4.661.49±0,402.250.73Cr(umol/L)60.21.81±0.693.751.29UA(u咖l/L)328.90.86±0.194.250.58Chol(mmol/L)4.021.09±0.662.501.29TG(mmol/L)1.262.21±U06.251.66HDL-c(mmol/L)1.500.70±0.297.501,45LDL-c(mmol/L)1.981.52±0.727.502.31叩oAl(mg/dl)131.2Ul±0.171.45apoB(mg/dl)63.11.03±0.480.95K(mmol/L)3.651.24±0.卯3.420.75Na(mmol/L)139.41.13±0.810.720,80Cl(mmol/L)107.81.92±1.111.251.73Ca(mmol/L)2.250.89±0.332.780.79P(mmol/L)0.921.57±0.782.681.03WBC(xl09/m8.01.69±0.483.752.02NE(%)80.90.78±0.310.59LY(%)15.26.93±3.355.20MO(%)3.425.20±5.8718.卯EO(%)0.537.99±30.3528.49BA(%)0,0681.03±84.0960.77RBC(xl012/L)4.40.67±0.211.500.54HGB(g/L)133.90.39±0.081,750.43HCT(L/L)38.00.62±0.231.501.28MCV(fl)86.80.21±0.110.24MCH(pg)30.50.66±0.190.64MCHC(g/L)351.90.60±0.160.70RDW(%)13.10.50±0.090.64PLT(xl09/L)167.52.43±U36.251.49MPV(fl)10.22.01±1.740.81PDW(%)12.53.63±2.042.16PCT(L/L)0.34.05±3.062.28注實驗CV。/。以5人的CVT。均值士SD表示；空格處為無CLIA'88的TEa值或本科室CV%。3.穩定性實驗部分生化項目(ALP、LDH、TB、TP、Alb、Urea、UA、Chol、TG、HDL-c、LDL-c、apoAl、apoB、K、Na、Cl、Ca、P)和血細胞項目(WBC、NE#、PLT)各測試點的檢測值間有統計學差異，其中僅WBC檢測值超出該項目臨床可接受範圍(表3)，差異具有臨床意義，但從圖2看出，WBC在採血5h後趨於穩定。雖然PLT檢測值在臨床可接受範圍內，但9h後有下降趨勢(圖2)。中性粒細胞數(NE#)變化情況與WBC相似。tableseeoriginaldocumentpage13續表3tableseeoriginaldocumentpage14續表3tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16注正態分布數據採用xis表示；偏態分布時，採用中位數(25%百分位數，75%百分位數)表示。CAL:clinicallyacceptablelimits,臨床可接受範圍。*:表示此測試點檢測值超出臨床可接受範圍，差異具有臨床意義。4.幹擾性實驗0.7、1.5mg/ml阿加曲班抗凝標本的TP和Na檢測值與血清標本檢測值間有統計學差異，但均在臨床可接受範圍內，差異不具有臨床意義(表4)。抗凝血K檢測值低於臨床可接受範圍，MCHC值略高於臨床可接受範圍。其它血細胞和生化分析項目均無統計學差異且都在臨床可接受範圍內。tableseeoriginaldocumentpage18tableseeoriginaldocumentpage19權利要求1、一種阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用。2、根據權利要求1所述的阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用，其特徵是在進行血細胞和生化常規分析時，阿加曲班濃度約為0.700.75mg/ml。全文摘要本發明公開了一種阿加曲班在血細胞和生化常規分析中的應用。本發明選用的阿加曲班是一種活性強、高度選擇性的凝血酶抑制劑，能直接與凝血酶(因子IIa)結合，不但滅活血液中游離狀態的凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白結合的凝血酶，極低濃度時即可抑制由凝血酶所致的纖維蛋白形成和血小板聚集，達到抗凝目的。目前大多數臨床實驗室在一個工作日(8h)內出具血細胞和生化常規分析報告。本發明通過實驗選定重複性、穩定性和幹擾性實驗的阿加曲班濃度約為0.7mg/ml，因為其可保證血液在10h內不凝固。文檔編號G01N33/50GK101598725SQ20091003167公開日2009年12月9日申請日期2009年6月23日優先權日2009年6月23日發明者明崔,王惠民申請人:南通大學附屬醫院