治療腦轉移瘤的治療性多種肽T特異性免疫療法的製作方法
2023-05-18 18:06:51 3
本發明涉及醫學領域，特別是腫瘤學，更特別是本發明涉及腦轉移瘤的治療。
背景技術：
全身性癌症的許多不良效應包括轉移擴散到腦，以及對由該器官管控的許多關鍵性功能的後續有害效應。腦轉移瘤(bm)代表了重大的保健問題。腦轉移瘤的通常來源是肺、乳腺、腎和結腸癌、以及惡性黑色素瘤，並且據估計患有這些癌症的一些患者在他們的疾病過程中可能發展腦轉移瘤[langleyrr，fidlerij.internationaljournalofcancer.2011；128(11)：2527–2535)]。來自卵巢癌的腦轉移瘤發生率(7/335，2.1％)高於來自子宮體癌(4/556，0.7％)、子宮頸癌(7/1716，0.4％)、和合計的其他女性生殖道惡性腫瘤(陰道、外陰和輸卵管癌)(0/122，0％)的[ogawak等，neurologiamedico-chirurgica.2008；48(2)：57–62]。腦轉移瘤診斷後存活時間的中位數在1至28月範圍內，所述中位數的中位數是6.4個月。因此，總的說來，來自卵巢癌的腦轉移瘤診斷後患者的生存期差。[ettiepiuraandbenjaminpiura：oncol.2011；2011：527453)
牽涉腦的轉移性腫瘤在頻率上超過了原發性腦腫瘤並且在眾多癌症的全面管理中是重要的併發症。在許多原發性惡性腫瘤之中，肺、乳腺、黑素瘤、腎和結腸癌是腦轉移瘤的主要原因(而其他癌症例如前列腺、肝、膀胱、胰腺和子宮接種腦的傾向性較低)。腦轉移瘤與預後差以及顯著的發病率關聯，在大多數情況下治療是緩和性的。不管腦轉移瘤的位置、來源和臨床表現如何，當前的治療工作仍然限於由皮質類固醇、全腦放療(wbrt)、立體定向放射手術和/或立體定向手術組成的多形式手段，其帶來的中位生存期為3至6個月。迄今為止，尚無有效措施可以用來可靠地預防該事件。因此，對相關症狀的高度警覺和早期證實腦轉移瘤對於能夠幹預和最小化神經系統的不可逆損傷是至關重要的。缺乏基於臨床或生物學的定向療法主要是由於概念框架很少並且研究腦轉移瘤的體外和體內模型系統甚至更少。
腦是肺惡性腺瘤轉移的最常見部位之一[sperdutopw等，jclinoncol2012；30：419-25]。這些患者的中位生存期差，迫切需要更有效的療法。因為傳統化療對轉移性腦腫瘤不太有效，放療仍然是不能手術的中樞神經系統(cns)疾病的主要治療或緩和選項。用類固醇補充的放療對顱內病灶產生50-75％的反應率，提供了迅速削弱神經症狀和改善行為狀態。然而，腦轉移瘤仍然預示著中位生存期小於六個月的差預後。化療後復發的晚期nsclc(非小細胞肺癌)患者一般預後差，特別是在患者有腦轉移瘤的情況下。
腦轉移瘤是轉移性nsclc患者中的常見問題。約7％–10％的nsclc患者在初次診斷時就出現腦轉移瘤，相當數量的患者在他們生病期間在一些位點發展出腦轉移瘤。
針對已經接種在腦中的癌細胞的醫學治療是無效的。化療的失敗總是歸因於完好的血腦屏障和癌細胞獲得耐藥性。
nsclc的腦轉移瘤的標準治療是全腦放療(wbrt)。用這種治療(治療計劃30gy)，取決於病灶數量、它們的放射敏感度和全身疾病的狀態，中位生存期是3-6個月(tsev，brainmetastasistreatment&management-medscapeupdated：apr16，2014)。
用手術或立體定向放療的更侵入性治療只在一部分患者中是可能的(這些形式取決於腫瘤的位置和特性有許多局限性)。在這種環境下全身性治療的作用仍然有爭議。來自大型患者系列的數據(例如，用吉非替尼治療，參見下文)缺乏，因為存在腦轉移疾病大多被考慮在排除標準之中，並且，通常不單獨分析腦轉移瘤的數據。
針對已經接種在腦中的癌細胞的經典醫學治療大多是無效的。化療的失敗總是歸因於完好的血腦屏障(bbb)和癌細胞獲得耐藥性。轉移到腦的大部分腫瘤不是化學敏感的。種種化療劑已經用於治療來自肺、乳腺和黑素瘤的腦轉移瘤，包括順鉑、環磷醯胺、依託泊甙、替尼泊甙、絲裂黴素、依立替康、長春瑞濱、依託泊甙、異環磷醯胺、替莫唑胺、氟尿嘧啶(5fu)和強的松。在大多數情況下，這些藥劑中的2-3種組合併聯合wbrt使用。令人遺憾的是，這種手段的後果並不是有希望的。
小分子酪氨酸激酶抑制劑(tki)的出現有助於改變腦轉移瘤的管理。表皮生長因子受體(egfr)tki——吉非替尼和厄洛替尼，在治療轉移到腦的nsclc中顯示出有希望的結果。但這些治療主要對有egfr突變的患者有效(ceresoligl等(2004)annoncol.15(7)：1042–7。
單克隆抗體例如曲妥珠單抗已經用於治療轉移性乳腺癌。然而，後者在穿過bbb和在中樞神經系統內引起復發上並不那麼有效。
因此，仍然強烈需要療法來治療腦轉移瘤並提供比通常3到6個月更長的生存期。
技術實現要素：
本發明的目的涉及腦轉移瘤的新治療。這種治療依靠使用10種肽的組合(在本文中稱為ose-2101)作為腦轉移瘤的肽t特異性癌症免疫療法。本發明人意外發現，儘管bbb和這樣的疾病預後差，但用ose-2101治療腦轉移瘤患者與比預期長得多的總生存期以及長得多的無疾病進展時間相關。
因此，本發明涉及ose-2101組合物，多表位t特異性癌症免疫療法，供用於治療腦轉移瘤，特別是在hla-a2陽性患者中。它也涉及所述ose-2101組合物在製造用於治療腦轉移瘤、特別是在hla-a2陽性患者中的多表位t特異性癌症免疫療法中的應用。它還涉及治療hla-a2陽性患者中的腦轉移瘤的方法，所述方法包括施用治療有效量的ose-2101組合物、多表位t特異性癌症免疫療法。
所述ose-2101組合物包含下列優化的表位或小肽rllqetelv(seqidno1)、ylqlvfgiev(seqidno2)、lltfwnppv(seqidno3)、kvfgslafv(seqidno4)、klbpvqlwv(seqidno5，b指示α-氨基異丁酸)、smpppgtrv(seqidno6)、imighlvgv(seqidno7)、kvaeivhfl(seqidno8)、ylsgadlnl(seqidno9)、akxvaawtlkaaa(seqidno10，x和a分別指示環己基丙氨酸和d-丙氨酸)。
優選地，所述腦轉移瘤起源於選自下列的癌症：肺癌(即，nsclc非小細胞肺癌和小細胞肺癌)，間皮瘤，乳腺癌，黑素瘤，卵巢、頭頸、結腸、胃腸、淋巴瘤、白血病、子宮癌，尤其是子宮體和/或子宮頸癌，睪丸或腎癌。更優選地，所述腦轉移瘤起源於nsclc。
在優選實施方式中，患者是htl(輔助性t細胞)陽性的。
特別是，所述患者可以在所述治療、即由ose-2101組合物治療之前，已經接受過幾種治療。
優選地，所述治療被胃腸外、優選皮下給藥。
在具體實施方式中，所述小肽在不完全弗氏(freund's)佐劑等、優選montanideisa-51中乳化。優選地，肽的劑量在0.1至10mg肽/注射劑量範圍內。更優選地，每次注射的總肽劑量是5.0mg。
在具體實施方式中，所述肽組合每兩至八周給藥一次，至少注射四到六次。更具體而言，所述肽在前15周每三周給藥一次，然後每2月給藥一次持續一年，然後每3月給藥一次持續兩年。
具體實施方式
本發明涉及基於ose-2101多表位t特異性癌症免疫療法的腦轉移瘤新療法。令人驚訝的是，本發明人已經證明，肽多表位組合在腦轉移瘤治療中給出了意想不到的生存結果。在那以前，據認為，因為bbb和腦轉移瘤疾病的嚴重性，在腦中產生免疫應答將是無效的，或至少，除非做出一些異乎尋常的發現，否則如果不與靶向癌症生物學的關鍵方面的其他形式相結合，基於免疫的療法不會有效(lishengege等，clinicalanddevelopmentalimmunology，2010：296453)。正相反，本發明人已經發現，不僅多表位t特異性癌症免疫療法可對腦轉移瘤有效，而且ose-2101作為肽t特異性癌症免疫療法本身就提供了比已知治療更大的結果。所述ose-2101多表位t特異性癌症免疫療法另外與有趣的基於ctl活性的免疫作用機制相關，並也出人意外地與htl應答相關。
定義
「表位」是分子例如一級、二級和三級肽結構和電荷的集體特徵，其合起來形成免疫球蛋白、t細胞受體或hla分子識別位點。或者，表位可定義為參與被特定免疫球蛋白識別的一組胺基酸殘基，或者在t細胞的環境中，被t細胞受體蛋白和/或主要組織相容性複合體(mhc)受體識別所必需的那些殘基。表位天然存在，並可由人類分離、提純或者另行製備或衍生。例如，表位可通過從天然源分離而製備，或它們可根據本領域的標準規程合成。在整個本公開中，表位有時可以稱作肽或肽表位。
「人白細胞抗原」或「hla」是人i類或ii類主要組織相容性複合體(mhc)蛋白(參見，例如，stites等，《免疫學》(immunology)，第八版，langepublishing，losaltos，ca(1994)。hla分子在共有的肽結合特異性基礎上分類。例如，hla-a2是對帶有某些胺基酸基序的肽享有相似的結合親合性的特定hla分子類型。確定患者中hla-a2狀態的方法是公知的並易於由本領域技術人員得到(即；血清學樣品)。
「肽表位」是包含等位基因特異性基序或超基序的肽，致使所述肽將結合hla分子並誘導ctl和/或htl應答。因此，本發明的肽表位能夠與適當的hla-a2分子結合併其後誘導對所述肽的細胞毒性t淋巴細胞(ctl)應答、或輔助性t淋巴細胞(htl)應答。
「pandr肽」或肽是結合多於一種hlaii類分子的分子家族的成員。定義所述分子家族的圖樣可稱為hlaii類超基序。分子與hlaii類分子結合併體外和體內刺激人htl應答。padre肽在專利ep735893中描述。
「ctl和/或htl應答」是對源自於致病抗原的抗原(例如，來自傳染劑或腫瘤抗原的抗原)的保護性或治療性免疫應答，其在某些方面預防或至少部分遏制疾病症狀、副作用或進展。所述免疫應答也可以包括已經通過刺激輔助性t細胞而促進的抗體應答。
癌症的分期基於原有(原發)腫瘤的尺寸和/或程度(範圍)描述個人癌症的嚴重度，不管癌症在身體內擴散(轉移)與否。nsclc期編號為0至iv。iiib和iv期是最晚期。
醫生和研究人員利用「ecog(東部腫瘤協作組)行為狀態」來評價患者的疾病如何進展和評價疾病如何影響患者的日常生活能力。ecog行為狀態以0至5編號。行為狀態為0對應於充分活動並能夠沒有約束地進行所有疾病前行為的患者。行為狀態為1對應於身體劇烈活動受限但可走動並能夠進行輕度或久坐性質的工作，例如輕家務勞動、辦公室工作。
術語「總生存期」(os)是指從開始治療之日起患者仍存活的時間長度。在臨床試驗中，測量總生存期是了解新治療工作有多好的一種方式。
多表位t特異性癌症免疫療法
多表位t特異性癌症免疫療法能夠幫助免疫系統發展免疫記憶，其可具有持久的腫瘤特異性效應。肽表位已經在許多臨床研究中用於誘導癌症患者的細胞毒性t-淋巴細胞(ctl)應答，有一些令人鼓舞的總體結果。然而，沒有報告腦轉移瘤的生存特異性結果。實際上，由於腦與體循環主要由於bbb而相對隔離，在腦中啟動生產性免疫應答顯得比其他類型的癌症要受限得多。即使局部小膠質細胞可處理並向t淋巴細胞呈遞腫瘤相關抗原，但初始t細胞很少正常運送到腦中。
有效的肽t特異性癌症免疫療法需要誘導寬幅的ctl特異性。這可用靶定多種腫瘤相關抗原(taa)的優化表位作為靶定至少5種腫瘤抗原並基於表位組合的多表位組合來最佳實現。在此使用的原始組合(ose-2101)是由野生型表位和修飾表位(變態(heteroclitic)和固定的錨表位)製成的。對變態和固定的錨表位的更多詳細信息可見於例如專利ep1620456。
ose-2101是由10種合成肽構成的多表位t特異性癌症免疫療法。所述肽中的九種已經設計成誘導對抗taa的ctl應答。更特別地，所述t特異性免疫療法被設計成施用於患者以誘導直接對抗癌胚抗原(cea)、p53、人表皮受體-2/神經(her-2/neu)以及黑色素瘤抗原2和3(mage-2/3)的ctl。這些taa已經基於流行病學加以選擇，因為它們在各種晚期癌症如結腸癌、卵巢癌、乳腺癌和nsclc中經常過表達。各ctl表位由i類主要組織相容性複合體分子的hla-a2超家族制約，從而提供一般人群的大約45％的覆蓋度。第十種合成肽是pan-dr表位(padre)，合理設計的輔助性t-淋巴細胞(htl)表位，只為了增加ctl應答的強度而包括在內。
ose-2101組合物包含以下肽或由所述肽組成：
rllqetelvseqidno1
ylqlvfgievseqidno2
lltfwnppvseqidno3
kvfgslafvseqidno4
klbpvqlwvseqidno5，b指示α-氨基異丁酸
smpppgtrvseqidno6
imighlvgvseqidno7
kvaeivhflseqidno8
ylsgadlnlseqidno9
akxvaawtlkaaaseqidno10，x和a分別指示環己基丙氨酸和d-丙氨酸。
所述肽可利用以適當的樹脂開始的用於固相肽合成的標準boc或fmoc化學來合成，並通過標準方法提純。或者，所述肽可以通過用重組細胞或通過rna、例如通過體外翻譯系統的遺傳工程而產生。
所述ose-2101組合物可以包含可藥用的載體或賦形劑。更優選地，所述可藥用載體是水性載體，尤其是緩衝液。特別是，它可以包含一種或幾種佐劑。例如，佐劑可以是不完全弗氏佐劑、礦物油佐劑、氫氧化鋁、或明礬、gm-csf。其他合適的佐劑是本領域公知的。
在一種實施方式中，所述ose-2101t特異性癌症免疫療法可以包含肽衝擊的抗原呈遞細胞，例如樹突狀細胞。
優選地，在所述ose-2101組合物中，所述肽在不完全弗氏佐劑等中乳化。在優選實施方式中，所述佐劑是與不完全弗氏佐劑相似的礦物油佐劑，由法國巴黎的seppicsa製造和供應。在最優選的實施方式中，所述佐劑是isa51。
所述組合物的每種肽能以0.1mg/ml至1mg/ml、優選0.5mg/ml的濃度存在。優選地，所有肽都以相同濃度存在於所述組合物中。
優選地，ose-2101組合物是所述10肽各為0.5mg/ml濃度的無菌、無防腐劑乳液，在isa51佐劑中以1:1(w:w)的比率配製並填充到有橡膠塞的玻璃小瓶中，在2°至8℃下冷藏。
ose-2101在無菌條件下製造。肽溶解在三種不同溶劑中，無菌過濾，合併，然後在受控條件下經由均化在佐劑中乳化。產品發布試驗包括外觀、內毒素、無菌性、粘度、粒度、各肽的肽濃度、體積、ph和效價。ose-2101組合物的製備在wo2004/094454的圖3a和105-106頁中詳述，其公開內容通過引用結合在本文中。
任選地，除了ose-2101的所述10種肽之外，本發明的肽組合物還可以包含另外的肽，特別是用於誘導細胞毒性t淋巴細胞(ctl)應答和靶定taa的肽表位。
腦轉移瘤：
腦轉移瘤是顱內腫瘤的常見類型。在許多原發性惡性腫瘤之中，肺、乳腺、黑素瘤、腎和結腸癌是腦轉移瘤的主要來源。大約一半的轉移性腦腫瘤來自肺癌。在卵巢、頭頸、間皮瘤、胃腸、肉瘤、生殖細胞腫瘤、腎癌、子宮癌尤其是子宮體和/或子宮頸癌、白血病、淋巴瘤、乳腺癌和膀胱癌之後也可以發生腦轉移瘤。原發性腦腫瘤可以擴散到腦的其他部分(轉移瘤或到脊柱)。
根據本發明的優選方面，用ose-2101組合物治療的受試者是有腦轉移瘤的患者並且是hla-a2陽性的。在優選實施方式中，患者的腦轉移瘤起因於下列癌之一：肺、乳腺、黑素瘤、腎、結腸、卵巢、子宮癌，尤其是子宮體和/或子宮頸癌，頭頸、膀胱、間皮瘤、胃腸、肉瘤、生殖細胞腫瘤、白血病、淋巴瘤和腦癌。優選地，所述患者患有肺癌，特別是nsclc。任選地，所述患者在疫苗接種之前已經接受過幾種治療線。在具體實施方式中，所述患者有正性htl應答。
人類白細胞抗原i類抗原(hla-a2)處理體系(apm)組分表達中的缺陷可對腫瘤的臨床過程和基於t細胞的免疫療法的響應具有負面影響。未配對的50個原發癌和33個腦轉移瘤的比較顯示β2-微球蛋白表達較低，β2-微球蛋白是與腦病灶中的抗原處理和免疫反應相關的轉運蛋白[liuy，等，cancerimmunolimmunother.2012jun；61(6)：789-801]。β2微球蛋白是mhci類分子如hla-a2的重要組分並且是i類mhc的細胞表面表達和肽結合槽的穩定性所必需的。
因此，當hlaa2體系的缺陷被充分描述時，如本發明人觀察到的在這樣的晚期腦轉移瘤患者的情況下獲得t細胞應答和臨床響應是令人意外的。
它還涉及治療hla-a2陽性患者的腦轉移瘤的方法，所述方法包括施用治療有效量的ose-2101t特異性免疫療法。所述方法還可以包含確定患者的hla狀態的預備步驟，選擇hla-a2陽性患者，和向所述hla-a2陽性患者施用治療有效量的ose-2101治療肽。
劑量和方案
在本發明的環境內，術語「治療」表示治癒性、症狀性和預防性治療。本發明的藥物組合物和製劑可用於存在癌症或腫瘤、優選在癌症進展的晚期的人類。本發明的藥物組合物和製劑將不一定治癒所述患癌的患者，但將延遲或減慢疾病的進展或預防進一步進展，從而緩解患者的病情。特別是，本發明的藥物組合物和製劑降低腫瘤的發展、和/或預防轉移瘤發生或發展和癌症復發。在治療所述癌症中，本發明的藥物組合物以治療有效量給藥。
「有效量」是指預防、消除或減少腦轉移瘤有害效應的本發明藥物組合物的量。要理解所述給藥劑量可以由本領域技術人員根據患者、病理、給藥方式等調適。所述劑量和方案取決於要治療的疾病的階段和嚴重度、患者的體重和一般健康狀態以及處方醫生的判斷。更具體地，「ose-2101肽或組合物的治療有效量」意指足以增加有腦轉移瘤的患者的總生存期的量。
以前的癌症試驗測試了在不完全弗氏佐劑中乳化的肽的劑量遞增，範圍從0.1至10mg肽/注射劑量。在所有測試劑量下，所述肽/不完全弗氏佐劑治療被認為是安全和耐受良好的，沒有報告嚴重的劑量相關的全身性毒性。
ose-2101可通過任何適當的途徑給藥，特別是通過胃腸外途徑例如皮下、皮內或肌內途徑或者通過氣溶膠、經黏膜、胸膜內或鞘內途徑。在最優選的實施方式中，所述肽組合物皮下給藥。優選地，ose-2101被設計用於皮下注射。
在優選實施方式中，每次注射或給藥的總肽劑量將是5.0mg(含有每種肽0.5mg的1ml藥品)。
優選地，所述肽組合物在初始劑量後在設立的間隔下以加強的劑量給藥。例如，所述肽組合可以每兩至八周給藥一次，至少注射四到六次，更優選每三至四周給藥一次，至少注射四到六次。
優選地，所述肽組合被每三周給藥一次，至少注射六次。在另一種實施方式中，所述t特異性免疫療法在前15周每三周給藥一次，然後在第1年中每2月給藥一次，然後在第2年中每3月給藥一次，總共13劑。
任選地，用ose-2101t特異性免疫療法治療可以聯合其他癌症治療。在優選實施方式中，它與通常用於治療腦轉移瘤患者的癌症治療聯用。例如，所述化療可以在順鉑、環磷醯胺、依託泊甙、替尼泊甙、絲裂黴素、依立替康、長春瑞濱、依託泊甙、異環磷醯胺、替莫唑胺、氟尿嘧啶(5fu)、強的松、酪氨酸激酶抑制劑例如吉非替尼、厄洛替尼和克唑替尼及其任何組合之中選擇。
htl狀態
本發明還涉及使用htl狀態、即陽性或陰性作為預後標誌。實際上，本發明人意外觀察到htl陽性患者表現出較長的總生存期。因此，htl陽性狀態是總生存期良好的預後標誌和/或對抗癌的治療性多表位響應、特別是對所述ose-2101肽疫苗的響應改善的標誌。
本發明的其他方面和優點將在下面的試驗部分公開，所述試驗部分應該被認為是說明性而不是限制本申請的範圍。
實施例
ose-2101疫苗接種在hla-a2陽性的晚期nsclc患者中的以前研究
進行ose-2101在hla-a2陽性的晚期nsclc患者中的ii期、開放性、多中心、單劑量組、多次給藥研究(nct00104780)。對ctl免疫應答和生存期的結果發表在journalofclinicaloncology(barvem等，jclinoncol.2008sep20；26(27)：4418-25)中。
方法和患者：
所述研究被設計成評價ose-2101在hla-a2陽性的晚期nsclc患者中的安全性、療效(響應和生存期)和免疫原性。所述多表位組合在前15周以5mg的劑量每3周一次皮下給藥，然後在第1年中每2月一次，然後在第2年中每3月一次，總共13劑。
患者在最後一次注射後三個月時隨訪。然後在第三年中每三月一次確定生存狀態，然後每年一次直到第五年。在基線時進行腫瘤分期，並在第9和18周以及第6、9和12月時再評價。在疫苗接種之前(篩選時)和在第9和18周時進行白細胞分離術以得到足夠的細胞進行免疫原性分析。評定血液病學、電解質、肝臟、其他器官功能、尿分析和抗核抗體滴度。根據國立癌症研究院通用毒性標準(nationalcancerinstitutecommontoxicitycriteria)監測毒性並分級。所有患者籤署所述方案專門的當地機構審查委員會批准的知情同意書。實性腫瘤的響應評價標準(responseevaluationcriteriainsolidtumors)用於評價響應。
本研究合格患者是18歲以上，並且組織學證實iiib或iv期或復發的nsclc。患者必須具有0或1的ecog行為狀態，絕對粒細胞計數≥1,500/μl，血小板計數≥100,000/μl，血紅蛋白≥10g/dl，總膽紅素≤2mg/dl，ast(天冬氨酸轉氨酶)和alt(丙氨酸轉氨酶)≤正常上限的2.5倍，和血清肌酐≤正常上限的2倍。有bm的患者如果該病在進入研究之前至少2個月臨床穩定的話，是合格的。
os(總生存期)利用kaplan-meier法估算。無進展的生存期將從患者登記時間到進展、死亡或最後一次評估腫瘤響應的日期確定。為了測量ctl應答，2*106個外周血單核細胞(pbmc)/孔(三到四個孔/表位)用各疫苗肽(10μg/ml)體外刺激。24小時後添加10u/ml的ril-2。培養10天後，測試體外擴增的pbmc的表位特異性(疫苗ctl表位和疫苗類似物的野生型表位)ctl應答，通過18-小時γ幹擾素elispot分析測量。
對生存期的免疫t細胞毒性響應關係通過利用對數秩和統計相對於生存期比較表位數與可測量的酶聯免疫吸附斑點分析(elispot)響應而做出。
htl應答從pbmc測量，無需體外擴增步驟。pbmc解凍，在培養基中靜置過夜，並在γ幹擾素elispot分析中用10μg/mlpadre或不相關的瘧疾肽刺激2*105pbmc/孔。
總共徵集了135個患者，64個患者是hla-a2陽性的，72個患者是hla-a2陰性的。hla-a2陰性組在確定陰性hla類型後沒有前瞻性觀察，只提供了生存期的信息。64個hla-a2陽性患者用一種或多種劑量的ose-2101治療並呈現itt(意向性治療)群體和安全性群體。
64個hla-a2陽性患者的特徵如下：
*中位年齡：64歲(26-87歲)；
*男性：55％，女性：45％；
*高加索人：83％，非裔美國人：9％，亞洲人：8％.
大部分患者(43/64，67％)在入選時有iv期nsclc。從第一次診斷起的中位天數是416(74到1921天的範圍)。
ose-2101治療患者以前的治療線(treatmentlines)是大部分患者接受2種以前的治療線(65.5％)，包括用鉑聯合法的第一線：
*一種以前的治療線：31％的患者；
*兩種以前的治療線：28％；
*3種以上以前的治療線(最多六種治療線)：37.5％.
92％的治療群體以前接受過鉑系化療和34％接受過tki(吉非替尼或厄洛替尼)。
6個患者(9.4％)以前接受過腦轉移瘤的放療。
18個患者在進入時被認為是進展性疾病，代表該被治療的ose-2101群體的28％。
所述hla-a2陰性的未治療群體人口統計數據與hla-a2陽性治療群體相似：72個患者，中位年齡65歲(33-91歲)；51％男性和49％女性；79％的高加索人。72個患者中的一人失去隨訪。
結果：
在上述的以前研究中，腦轉移瘤患者如果在進入研究之前所述疾病臨床穩定至少2個月，則是合格的。6個患者(所述臨床研究的nsclc群體的9.4％)以前接受過腦轉移瘤的放療。所有這6個患者有iv期腦轉移瘤並以行為狀態1進入(參見表1)。
本發明人首次研究了ose-2101治療性癌症疫苗對這6個存在腦轉移瘤的患者的效應。
根據文獻，這些腦轉移瘤患者應該有很差的生存時間並因此應該在所述研究中很快地首先死亡。
令人驚訝的是，這些患者實現了比預期更長期的生存，尤其當考慮到對這些以前被高度治療並患有晚期腦轉移瘤的患者設立的預後差時(參見表1)。
這6個腦轉移瘤患者在接受ose-2101癌症疫苗後，實現了很長期的生存並且還很長時間沒有進展(參見表2)。文獻中描述了行為狀態為1的腦轉移瘤患者的中位os為4個月。在本研究中，本發明人觀察到7個月到41個月的os範圍。
在本研究之前，未解決的問題是要知道所述多表位免疫療法雖然誘導t細胞毒性細胞，但是否能夠繞過bbb。所述6個患者中5個ctl應答評價顯示每個患者都對ose-2101疫苗的肽表位有ctl應答。所述ctl範圍在1至5個ctl表位陽性應答之間(參見表2)。因此，所述ose-2101治療性肽疫苗能夠繞過bbb。
令人意外地，htl應答的研究是有意義的。所述htl應答由合理設計的輔助性t淋巴細胞表位——pan-dr表位(padre)觸發。這種表位因為它被認為輕度改善ctl應答的強度，傳統上包括在多表位癌症疫苗中。
在本研究中，陽性htl患者當與陰性htl患者(9.6和11個月的os)比較時，實現了最長的os(16.6個月、24.4個月和41個月)。此外，與htl陽性患者相比，htl陰性患者的疾病進展更迅速(參見表2)。
陽性htl應答的臨床優勢已經在所述臨床試驗的患者子集中證實。本發明人比較了18個陽性htl應答患者對比15個陰性htl應答患者的os。在htl陽性組中中位os是744天(24.3個月)[448至980]，而在htl陰性組中中位os是520天(17個月)[214至943]。於是，觀察到7.4個月的差異。
結論：
儘管存在bbb和所述疾病在這個階段的嚴重性，但腦轉移瘤令人驚訝地受益於所述治療性癌症疫苗ose-2101。觀察到os的重大增加，尤其是對於以前高度治療過的預後差的群體。
陽性htl應答令人驚訝地給出了os有意義的臨床優勢。htl表位由於影響os而能用作效能分析並在沒有任何體外肽擴增下表現出強烈的優勢。
表1：患者描述
表2：患者生存期和免疫應答
*1：患者在41個月的最後隨訪時還活著，
*2：在注射2次後因進展性疾病停止治療。
考慮到以前重大治療過的這些患者的晚期和差預後，所述6個腦轉移患者的分析讓人看出非常令人感興趣的存活時間。
腦轉移瘤(bm)患者(n°108，n°169，n°132，n°133，和n°135)，除了一個(n°150)以外，儘管有腦轉移瘤和放療，仍在癌症進展後幾周進入所述試驗。
所有bm患者都接受至少一種以前的系統治療性治療線。
5個患者在至少2種以前的化療線(包括第一線的鉑聯合法)後進入，2個患者在所述t特異性免疫療法之前接受3種以前的治療線。
所述ose2101治療對除了一個(n°150隻接受2次注射)之外的所有bm患者都是前6次注射每3周皮下給藥一次(在誘導期期間)。兩個患者進入維持期，每2/3個月注射一次(n°108–n°150均接受8次注射)。
在作為wbrt的放療後，文獻中描述的nsclc的中位生存期是3-6個月，對生存期的作用有限。在bm患者亞組中ose-2101治療後的所述中位數評價是13個月(範圍7至41)。
序列表
奧塞免疫療法公司
治療腦轉移瘤的治療性多種肽t特異性免疫療法
b1909pc
10
patentinversion3.5
1
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
1
argleuleuglngluthrgluleuval
15
2
10
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
2
tyrleuglnleuvalpheglyilegluval
1510
3
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
3
leuleuthrphetrpasnproproval
15
4
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
4
lysvalpheglyserleualapheval
15
5
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
misc_feature
(3)..(3)
xaaisalpha-aminobutyricacid
5
lysleuxaaprovalglnleutrpval
15
6
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
6
sermetproproproglythrargval
15
7
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
7
ilemetileglyhisleuvalglyval
15
8
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
8
lysvalalagluilevalhispheleu
15
9
9
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
9
tyrleuserglyalaaspleuasnleu
15
10
13
prt
artificialsequence
syntheticpeptide
misc_feature
(1)..(1)
xaaisd-alanine
misc_feature
(3)..(3)
xaaisacyclohexylalanine
misc_feature
(13)..(13)
xaaisd-alanine
10
xaalysxaavalalaalatrpthrleulysalaalaxaa
1510