一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法與流程

2023-05-06 23:13:16 1

本發明涉及植物無性快繁
技術領域：
，尤其是涉及一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法。
背景技術：
：金花茶（camellianittidissimachi），屬山茶科山茶屬，是山茶花家族中唯一具有金黃色花瓣的種類，是我國特有的傳統名花。也是國家8種一級重點保護植物之一，在國內外都享有盛名。國內將金花茶譽為「茶族皇后」、「植物界的大熊貓」，國外則稱之為「幻想中的黃色山茶」、「神奇的東方魔茶」。金花茶不僅觀賞價值高，還是名貴藥材，其藥用價值也得到社會的廣泛認可。金花茶含有d然有機鍺、鋅、硒、礬等多種對人體有重要保健作用的微量元素，以及茶多酚和人體所必需的胺基酸、維生素等，在降低血糖、血脂，防癌、抗癌方面有特殊功效。目前，市場上的金花茶產品倍受群眾青睞，而金花茶主產區廣西只能滿足其銷售量的1/10。由此可見金花茶市場前景十分廣闊。隨著金花茶藥用價值被社會廣泛認可，產品暢銷，價格昂貴，資源緊俏，金花茶種植產業猶如雨後春筍快速地發展。為了儘快將金花茶資源應用於社會，專業學者們開展了金花茶組織培養技術的研究，相關論文的報導有：顏慕勤等從1980年起陸續對七種具有重瓣，大花，芳香等特性的金花茶種進行組織培養研究，在1981年獲完整植株並已移栽成活；1987年廖漢刃等已開展金花茶嫩莖的組織培養，生根率為75%，且移栽成活，將無根苗剪下嫁接到普通油茶或越南油茶的芽苗砧木上，成活率為78%；黃曉娜等就金花茶瓶內生根困難進行了組培苗試管外生根研究，生根效果可達到85%。國家授權的相關專利有：①一種金花茶組培快繁方法（zl20140755440.8），以7至8月份金花茶葉片為外植體，誘導葉片產生愈傷組織，將愈傷組織接種於芽誘導培養基內，置於溫度25～28℃，光暗培養條件培養35～40d，愈傷組織分化出芽；將芽接種於生根培養基內，置於溫度25～28℃，光暗培養條件培養20～30d，培養出組培幼苗；芽誘導的培養基配方為：ms+6～8g/l瓊脂+25～29g/l蔗糖+0.3～0.8mg/l6-ba+0.8～1.5mg/lnaa，生根培養基ms+6～8g/l瓊脂+25～29g/l蔗糖+0.8～2.5mg/liaa+0.5～1.5mg/lnaa+0.8～1.5mg/l活性炭（wc）+0.8～1.5mg/l硫酸亞鐵。②一種金花茶組培增殖方法（zl201410581398.2）以金花茶成熟種胚為外植體，5%～10%nacl2溶液消毒滅菌20～30min接種於初代配培養基中獲取無菌芽，無菌芽在增殖培養基和壯芽培養基中重複培養，培養周期5～6周；剪切壯芽並將壯芽基部浸於500～1000mg/liba中10～20min再轉接到生根培養基內培養，生根率95%～98%，苗木移栽成活率90%以上；初代培養基為ms+6g/l瓊脂+30g/l蔗糖+0.2～0.5mg/l6-ba+0.2～0.5mg/lnaa，增殖培養基為ms+6g/l瓊脂+40g/l蔗糖+1.5～2.0mg/l6-ba+1.5～2.0mg/lkt；壯芽培養基為ms+6g/l瓊脂+40g%蔗糖+0.5～1.0mg/liaa，採用白熾燈進行光照培養，光照16h，暗培養8h，光照強度2000～3000lx，溫度25±3℃～28℃。③金花茶組織培養基（zl85102805）改良er；nh4no31200mg/l，kno31800mg/l，caci2200mg/l，kh2po4400mg/l，h3bo31mg/l，mnso4·h2o0.5mg/l，znso4·7h2o1mg/l，nam0o4·h2o1mg/l，cuso4·5h2o0.1mg/l，feso4+na2edta【27.8+37.3(絡合物5ml)】，煙酸10mg/l，甘氨酸2.0mg/l，肌醇5mg/l，鹽酸吡哆醇1mg/l，鹽酸硫銨4mg/l，瓊脂6g/l，蔗糖30g/l，6-ba1～5mg/l，iaa1～3mg/l。以上報導主要採用白熾燈提供光照條件，然而白熾燈光譜僅紅光、綠光和藍光光譜比較強，對植物生長的作用遠弱於太陽光。太陽光光譜豐富，有7種可見光（赤橙紅綠青藍紫）和2種不可見光（紫外線和紅外線）。太陽光中的藍紫光與青光對植物生長及幼芽的形成有很大的作用，抑制植物節間的伸長，促進芽的分化。藍光也是支配細胞分化最重要的光譜，同時影響植物的向光性。藍紫光有利於蛋白質和有機酸的合成，有助於花色素和維生素的合成。紅光和紅外線光有利於碳水化合物的合成，促進種子的萌發和莖的伸長，促進二氧化碳的分解和葉綠素的形成。因此，通過調節太陽光的光照強度，有助於提高金花茶組培苗光合作用和促進組培苗的生長。然而目前未見有關於利用太陽光對金花茶組培苗進行工廠化育苗的文獻和專利。技術實現要素：本發明目的是克服現有技術中使用白熾燈進行金花茶組培苗培育的不足，提供一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法，使金花茶的組培苗培育不受地域和氣候的限制，既能保持金花茶優良性狀的遺傳穩定性，又節約能源、節約成本，利於產業化快速培育金花茶優良組培苗。為實現上述目的，本發明採用以下技術方案：一種太陽光條件下金花茶種胚培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養：6月～7月採集7～8成熟、果殼呈紅綠色的金花茶果實，自來水衝洗果實外表塵埃，剝去外果皮，置於超淨工作檯，用75%酒精溶液消毒30s，無菌水清洗3～4次，質量分數1‰的hgcl2溶液浸泡8min，無菌水清洗3～4次，剝去內果皮，接種於初代培養基中，置於300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養7～10d，之後移置於1000～2500lx的太陽光照條件下繼續培養20～23d,至胚芽高2～5cm；（2）芽繼代增殖培養：將2～5cm高胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，置於1500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10～15d，再置於4000～8000lx的太陽光照條件下繼續培養20~25d，增殖係數為8～13；（3）芽生根培養：將繼代增殖芽中高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插於生根培養基中，置於2000～8000lx太陽光照條件下培養15～40d，當根系長0.5～1cm時，移至接近自然環境的煉苗棚內煉苗，生根率90~95%；（4）苗木移栽：瓶苗在煉苗棚內煉苗20～30d，苗木根系由白色變為灰白色時進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗乾淨粘附於根系上的生根培養基，移栽於經過基質消毒的營養杯內，置於溫度15～28℃，溼度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環境條件下培養，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養大苗。優選的，所述芽繼代增殖培養中，將胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，置於2500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10～15d，置於4000～8000lx的太陽光照條件下繼續繼代增殖培養20~25d，增殖係數8～13。優選的，所述芽生根培養中，將繼代增殖芽中高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插於生根培養基中，置於4000～8000lx太陽光照條件下進行芽生根培養15～40d，當根系長0.5～1cm時，移至接近自然環境的煉苗棚內煉苗，生根率90~95%。優選的，所述初代培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。優選的，所述繼代增殖培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-苄氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+15～20mg/l穀氨醯氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。優選的，所述生根培養基的配方為：2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，或2/3（ms+50mg/lna2so4－1650mg/lnh4no3+100mg/lca(no3)2·4h2o）+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。在ms培養基中增加適當濃度的na+可以調節植物細胞的滲透勢，促進細胞分裂，提高葉片的光合作用，促進苗木健壯生長，在生根培養中，將ms培養基去除nh4no3增加100mg/lca(no3)2·4h2o，可以解決培養基中n含量偏低，生根芽生長過程中缺n現象，避免葉片黃化，影響芽的生根率。優選的，所述芽初代培養、芽繼代增殖培養和芽生根培養均在牆體80%為雙層玻璃窗的培養室內進行。優選的，所述培養室的光照時間為11～14h/d，溫度為22~28℃。本發明具備以下的優點和積極效果：（1）本發明採用的光源來自太陽光，通過對光照強度和光照時間調節，充分發揮太陽光對金花茶組培苗生長的促進作用，金花茶組培苗生根率高達90%～95%，比使用白熾燈作為光源的方法生根率提高20%以上，同一生根培養基，太陽光條件下芽長根點的時間為20～25d，白熾燈下芽長根點時間為30～35d，前者比後者芽長根點時間縮短5～10d。（2）本發明培育的金花茶組培苗增殖係數高達8～13，移栽成活率95%以上，達到了產業化生產金花茶苗木的要求。（3）本發明的外植體來源於具有生長優勢的植株，生長茂盛，花多（2500朵/a.株以上），產花大小年不明顯，採用「以種繁芽」的組培方法，培育的組培苗遺傳穩定性好，能保持母樹優良的性狀。（4）本培養基為ms培養基，在ms培養基中添加低濃度的na2so4，na+能夠調節植物細胞的滲透勢，促進細胞分裂，提高葉片的光合作用，促進苗木健壯生長，在初代和增殖中培養基中添加適量濃度的水解酪蛋白，能促進酶活性，對細胞和組織的增殖和分化有明顯促進作用。（5）本發明工藝簡單，可操作性強，不使用白熾燈光源，降低了電力成本本發明所用基。附圖說明圖1：培養室；圖2：培養室太陽光光譜圖；圖3：白熾燈光譜圖；圖4：繼代增殖芽形態對比圖，圖左為實施例1培育的繼代增殖芽，圖右為對比例1培育的繼代增殖芽：圖5：生根苗根系形態對比圖，圖左為實施例1培育的生根苗，圖右為對比例1培育的生根苗；圖6：生根苗生產圖。具體實施方式以下結合實例描述本發明一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法，這些描述並不是對本
發明內容的限定。實施例1一種以種子為外植體的太陽光培育金花茶組培苗的方法，一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養：6月採集7～8成熟、果殼呈紅綠色的金花茶果實，自來水衝洗果實外表塵埃，剝去外果皮，置於超淨工作檯，用75%酒精溶液消毒30s，無菌水清洗3次，質量分數1‰的hgcl2溶液浸泡8min，無菌水清洗3次，剝去內果皮，接種於初代培養基中，初代培養基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於牆體80%為雙層玻璃窗的培養室內（圖1），培養室內光照時間11～14h/d,溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養8d，之後移置於1000～2500lx的太陽光照條件下繼續培養22d，種胚萌芽率≥98%，一般情況下，培養10～15d種胚萌芽，待萌芽高2～5cm時，將芽接種於增殖培養基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養：將胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，繼代增殖培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-苄氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+20mg/l穀氨醯氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於2500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10d，再置於4000～8000lx的太陽光照條件下繼續培養，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，：繼代增殖培養第35d，芽高3～5cm，翠綠，莖幹半木質化，葉片2/3展開，增殖係數13；繼代增殖培養第40d，芽高3～6cm，翠綠，莖幹木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數13；繼代增殖培養第50d，芽高3～6cm，翠綠，莖幹木質化較強，葉片2/3展開，較大，葉面光亮，革質，增殖係數13；（3）芽生根培養：分別取培養35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～6cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插於生根培養基中，生根培養基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於4000～8000lx太陽光照條件下進行芽生根培養，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第16d長出根點，第25d根系長0.5~1.0cm，平均生根率96.7%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第15d長出根點，第24d根系長0.5~1.0cm，平均生根率98.3%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第30d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率83.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗20d，苗木根系由白色變為灰白色時進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗乾淨粘附於根系上的生根培養基，移栽於經過基質消毒的營養杯內，置於溫度15～28℃，溼度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環境條件下培養，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養大苗，平均移栽成活率99.4%。實施例2一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養：6月採集7～8成熟、果殼呈紅綠色的金花茶果實，自來水衝洗果實外表塵埃，剝去外果皮，置於超淨工作檯，用75%酒精溶液消毒30s，無菌水清洗4次，質量分數1‰的hgcl2溶液浸泡8min，無菌水清洗4次，剝去內果皮，接種於初代培養基中，初代培養基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於牆體80%為雙層玻璃窗的培養室內（圖1），培養室內光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養7d，之後移置於1000～2500lx的太陽光照條件下繼續培養23d，種胚萌芽率≥98%，一般情況下，培養10～15d種胚萌芽，待萌芽高2～5cm時，將芽接種於增殖培養基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養：將胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，繼代增殖培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-苄氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+16mg/l穀氨醯氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於1500～3000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10d，再置於4000～6000lx的太陽光照條件下繼續培養，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃：繼代增殖培養第35d，芽高2～4cm，翠綠，莖幹半木質化，葉片1/2展開，增殖係數10；繼代增殖培養第40d，芽高3～4cm，翠綠，莖幹剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數11；繼代增殖培養第50d，芽高3～5cm，翠綠，莖幹木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖係數11；（3）芽生根培養：分別取培養35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插於生根培養基中，生根培養基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於3000～6000lx太陽光照條件下進行芽生根培養，光照時間11～14h/d,溫度22~28℃，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率93.3%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第17d長出根點，第26d根系長0.5~1.0cm，平均生根率94.8%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第30d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率85.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗20d，苗木根系由白色變為灰白色時進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗乾淨粘附於根系上的生根培養基，移栽於經過基質消毒的營養杯內，置於溫度15～28℃，溼度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環境條件下培養，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養大苗，平均移栽成活率98.9%。實施例3一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養：7月採集7～8成熟果殼呈紅綠色的金花茶果實，自來水衝洗果實外表塵埃，剝去外果皮，置於超淨工作檯，用75%酒精溶液消毒30s，無菌水清洗4次，質量分數1‰的hgcl2溶液浸泡8min，無菌水清洗4次，剝去內果皮，接種於初代培養基中，初代培養基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於牆體的80%為雙層玻璃窗的培養室內（圖1），培養室內光照時間11～14h/d,溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養8d，之後移置於1000～2500lx的太陽光照條件下繼續培養22d，種胚萌芽率≥98%，一般情況下，培養10～15d種胚萌芽，待萌芽高2～5cm時，將芽接種於增殖培養基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養：將胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，繼代增殖培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-苄氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+18mg/l穀氨醯氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於1500～2500lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10d，再置於4000～5000lx的太陽光照條件下繼續培養，光照時間11～14h/d,溫度22~28℃；繼代增殖培養第35d，芽高2～4cm，翠綠，莖幹半木質化，葉片1/2展開，增殖係數8.0；繼代增殖培養第40d，高3～4cm，翠綠，莖幹剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數9；繼代增殖培養第50d，芽高3～5cm，翠綠，莖幹木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖係數9.5；（3）芽生根培養：分別取培養35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插於生根培養基中，生根培養基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於2000～5000lx太陽光照條件下進行芽生根培養，光照時間11～14h/d,溫度22~28℃。培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第35d根系長0.5~1.0cm，平均生根率90.1%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第40d根系長0.5~1.0cm，平均生根率86.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗22d，苗木根系由白色變為灰白色時進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗乾淨粘附於根系上的生根培養基，移栽於經過基質消毒的營養杯內，置於溫度15～28℃，溼度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環境條件下培養，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養大苗，平均移栽成活率96.7%。實施例4一種太陽光條件下培育金花茶種胚組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養：6月月採集7～8成熟、果殼呈紅綠色的金花茶果實，自來水衝洗果實外表塵埃，剝去外果皮，置於超淨工作檯，用75%酒精溶液消毒30s，無菌水清洗3次，質量分數1‰的hgcl2溶液浸泡8min，無菌水清洗3次，剝去內果皮，接種於初代培養基中，初代培養基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於牆體的80%為雙層玻璃窗的培養室內（圖1），培養室內光照時間11～14h/d,溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養10d，之後移置於1000～2500lx的太陽光照條件下繼續培養20d，種胚萌芽率≥98%，一般情況下，培養10d～15d種胚萌芽，待萌芽高2～5cm時，將芽接種於增殖培養基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養：將胚芽剪切，轉接到繼代增殖培養基中，繼代增殖培養基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-苄氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+15mg/l穀氨醯氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於2500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養10d，之後置於4000～8000lx的太陽光照條件下繼續進行芽繼代增殖培養光照時間11～14h/d,溫度22~28℃：繼代增殖培養第35d，芽高3～6cm，紅綠色，莖幹較脆，葉片1/2展開，增殖係數9.0；繼代增殖培養第40d，芽高3.5～6cm，翠綠，莖幹半木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數10；繼代增殖培養第50d，芽高4～6cm，翠綠，莖幹木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖係數10；（3）芽生根培養：分別取培養35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～6cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插於生根培養基中，生根培養基的配方為2/3（ms+50mg/lna2so4－1650mg/lnh4no3+100mg/lca(no3)2·4h2o）+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置於4000～8000lx太陽光照條件下進行芽生根培養，光照時間11～14h/d,溫度22~28℃，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第21d長出根點，第29d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第18d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率92.6%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第43d根系長0.5~1.0cm，平均生根率85.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗28d，苗木根系由白色變為灰白色時進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗乾淨粘附於根系上的生根培養基，移栽於經過基質消毒的營養杯內，置於溫度15～28℃，溼度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環境條件下培養，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養大苗，平均移栽成活率94.1%。對比例1對比例1與實施例1的區別在於，對比例1採用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例1在芽初代培養、繼代增殖培養、生根培養每個步驟中，都採用接種後8d置於300～800lx的太陽光照條件下培養，之後置於2500lx白熾燈光培養，對比例1所用的外植體處理方法、初代培養基、繼代培養基、生根培養基以及培養室溫度環境與實例1同；在芽初代培養中，培養10d～15d種胚萌芽，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，接種於增殖培養基誘導叢生芽，種胚萌芽率97%；在芽繼代增殖培養中，繼代增殖培養第35d，芽高2～3cm，紅綠色，莖幹較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖係數2.5；繼代增殖培養第40d，芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數3.0；繼代增殖培養第50d，芽高3～5cm，綠棕色，莖幹半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖係數3.5；在芽生根培養中，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.1%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率38.5%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率62.0%，移栽後的平均成活率為51.7%。對比例2對比例2與實施例2的區別在於，對比例2採用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例2在芽初代培養、芽繼代增殖培養、芽生根培養每個步驟中，都採用接種後7d置於300～800lx的太陽光照條件下培養，之後置於2500lx白熾燈光培養，對比例2所用的外植體處理方法、初代培養基、繼代培養基、生根培養基以及培養室溫度環境與實例2一致；在芽初代培養中，培養10d～15d種胚萌芽，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，接種於增殖培養基誘導叢生芽，種胚萌芽率97.1%；在芽繼代增殖培養中，繼代增殖培養第35d，芽高2～4cm，紅紫色，莖幹較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖係數2.6；繼代增殖培養第40d，芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數3.0；繼代增殖培養第50d，高3～5cm，綠棕色，莖幹半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖係數3.3；在芽生根培養中，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.2%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.6%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率61.8%，移栽後的平均成活率為52.4%。對比例3對比例3與實施例3的區別在於，對比例2採用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例2在芽初代培養、芽繼代增殖培養、芽生根培養每個步驟中，都採用接種後8d置於300～800lx的太陽光照條件下培養，之後置於2500lx白熾燈光培養。對比例3所用的外植體處理方法、初代培養基、繼代培養基、生根培養基以及培養室溫度環境與實例3一致；在芽初代培養中，培養10d～15d種胚萌芽，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，接種於增殖培養基誘導叢生芽，種胚萌芽率97.5%；在芽繼代增殖培養中，繼代增殖培養第35d，芽高2～4cm，紅紫色，莖幹較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖係數2.5；繼代增殖培養第40d，芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數2.8；繼代增殖培養第50d，芽高3～5cm，綠棕色，莖幹半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖係數3.2；在芽生根培養中，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率30.6%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率35.8%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率60.2%，移栽後的平均成活率為51.3%。對比例4對比例4與實施例4的區別在於，對比例2採用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例2在芽初代培養、芽繼代增殖培養、芽生根培養每個步驟中，都採用接種後10d置於300～800lx的太陽光照條件下培養，之後置於2500lx白熾燈光培養。對比例4所用的外植體處理方法、初代培養基、繼代培養基、生根培養基以及培養室溫度環境與實例4一致；在芽初代培養中，培養10～15d種胚萌芽，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，接種於增殖培養基誘導叢生芽，種胚萌芽率97.8%；在芽繼代增殖培養中，繼代增殖培養第35d，芽高2～4cm，紅紫色，莖幹較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖係數2.5；繼代增殖培養第40d，芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數2.8；繼代增殖培養第50d，芽高3～5cm，綠棕色，莖幹半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖係數3.0；在芽生根培養中，培養35d的繼代增殖芽在生根培養的第38d長出根點，第60d根系長0.5~1.0cm，平均生根率29.5%；培養40d的繼代增殖芽在生根培養的第35d長出根點，第65d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.8%；培養50d的繼代增殖芽在生根培養的第32d長出根點，第46d根系長0.5~1.0cm，平均生根率55.2%，移栽後的平均成活率為46.8%。由以上實施例和對比例看出，芽繼代增殖培養40d的組培苗各項生理指標最優，實際生產也採用芽繼代增殖培養40d的工藝，以下就實施例和對比例的芽繼代增殖培養40d得到的技術效果進行比較，如圖4、圖5和表1所示：表1實施例與對比例芽繼代增殖培養40d的技術效果對比芽繼代增殖培養40d芽生根培養至根系長0.5-1cm移栽成活率實施例1繼代增殖芽高3～6cm，翠綠，莖幹木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數13第15d長出根點，第24d根系長0.5~1.0cm，平均生根率98.3%99.4%對比例1繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數3.0第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率38.5%51.7%實施例2繼代增殖芽高3～4cm，翠綠，莖幹剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數11第17d長出根點，第26d根系長0.5~1.0cm，平均生根率94.8%98.9%對比例2繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數3.0第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.6%52.4%實施例3繼代增殖芽高3～4cm，翠綠，莖幹剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數9第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%96.7%對比例3繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數2.8第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率35.8%51.3%實施例4繼代增殖芽高3.5～6cm，翠綠，莖幹半木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖係數10第18d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率92.6%94.1%對比例4繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖幹較脆，葉片1/3展開，增殖係數2.8第35d長出根點，第65d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.8%46.8%圖4、圖5和表1所示，本發明一種太陽光條件下金花茶種胚培育組培苗的方法比白熾燈條件下培育組培苗的方法優：繼代芽培養周期短，芽增殖係數高，生長健壯；芽始根時間短，生根率高，苗木移栽成活率高。因此，本發明的方法比白熾燈下培育組培苗的方法高效，更適合於規模化生產（圖6）。當前第1頁12